常用培养基及染料的配制.docx
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常用培养基及染料的配制
常用培养基的配制
1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）
牛肉膏
3g
蛋白胨
5g
氯化钠
10g
琼脂
15~20g
pH
7.0~7.2
水
1000mL
121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）
可溶性淀粉
20g
硝酸钾
1g
氯化钠
0.5g
磷酸氢二钾
0.5g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁
0.01g
琼脂
20g
水
1000mL
pH
7.2～7.4
配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）
硝酸钠
2g
磷酸氢二钾
1g
氯化钾
0.5g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁
0.01g
蔗糖
30g
琼脂
15~20g
水
1000mL
pH
自然
121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）
葡萄糖
10g
蛋白胨
5g
磷酸二氢钾
1g
七水合硫酸镁
0.5g
1/3000孟加拉红（rosebengal，玫瑰红水溶液）
100mL
琼脂
15—20g
pH
自然
蒸馏水
800mL
112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）
马铃薯
200g
蔗糖（或葡萄糖）
20g
琼脂
15—20g
pH
自然
培养基的配制：
马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基
培养基的配制：
（1）、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
（2）、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
（3）、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
（4）、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。
121℃灭菌30min。
7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
甘露醇（或葡萄糖）
10g
磷酸二氢钾
0.2g
七水合硫酸镁
0.2g
氯化钠
0.2g
二水合硫酸钙
0.2g
碳酸钙
5g
蒸馏水
1000mL
pH
7.0—7.2
113℃灭菌30min。
8、半固体肉膏蛋白胨培养基
肉膏蛋白胨液体培养基
100mL
琼脂
0.35—0.4g
pH
7.6
121℃灭菌20min。
9、合成培养基
偏磷酸铵
1g
氯化钾
0.2g
七水合硫酸镁
0.2g
豆芽汁
10mL
琼脂
20g
蒸馏水
1000mL
pH
7.0
加12mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。
121℃灭菌20min。
10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基
黄豆芽
100g
蔗糖（或葡萄糖）
50g
水
1000mL
pH
自然
培养基的配制：
称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。
用水补足原量，再加入蔗糖（或葡萄糖）50g，煮沸熔化。
121℃灭菌20min。
11、油脂培养基
蛋白胨
10g
牛肉膏
5g
氯化钠
5g
香油或花生油
10g
1.6%中性红水溶液
1mL
琼脂
15—20g
蒸馏水
1000mL
pH
7.2
121℃灭菌20min
注：
（1）、不能使用变质油。
（2）、油和琼脂及水先加热。
（3）、调好pH值后，再加入中性红。
（4）、分装时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中。
12、淀粉培养基
蛋白胨
10g
牛肉膏
5g
氯化钠
5g
可溶性淀粉
2g
蒸馏水
1000mL
琼脂
15—20g
121℃灭菌20min
13、明胶培养基
牛肉膏蛋白胨液
100mL
明胶
12—18g
pH
7.6
在水浴锅中将上述成分溶化，不断搅拌。
溶化后调pH7.2—7.4。
121℃灭菌30min。
14、蛋白胨水培养基
蛋白胨
10g
氯化钠
5g
蒸馏水
1000mL
pH
7.6
121℃灭菌20min。
15、糖发酵培养基
蛋白胨水培养基
1000mL
1.6%溴钾酚紫乙醇溶液
1—2mL
pH
7.6
另配制20%糖溶液（葡萄糖、乳糖、蔗糖等）各10mL。
培养基的配制：
（1）、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（pH7.6）分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管（Durhamtube），使之充满培养液。
（2）、将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水121℃灭菌20min；糖溶液112℃灭菌30min。
（3）、灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%无菌糖溶液0.5mL（按每10mL培养基中加入20%的糖液0.5mL，则成1%的浓度）。
配制用的试管必须洗干净，避免结果混乱。
16、葡萄糖蛋白胨水培养基
蛋白胨
5g
葡糖糖
5g
磷酸氢二钾
2g
蒸馏水
1000mL
将上述各成分溶于1000mL水中，调pH7.0—7.2，过滤。
分装试管，每管10mL，112℃灭菌30min。
17、麦氏（Meclary）琼脂（酵母菌）
葡萄糖
1g
氯化钾
1.8g
酵母浸膏
2.5g
醋酸钠
8.2g
琼脂
15—20g
蒸馏水
1000mL
113℃灭菌20min。
18、柠檬酸盐培养基
磷酸二氢铵
1g
磷酸氢二钾
1g
氯化钠
5g
硫酸镁
0.2g
柠檬酸钠
2g
琼脂
15—20g
蒸馏水
1000mL
1%溴麝香草酚蓝乙醇液
10mL
培养基的配制：
将上述各成分加热溶解后，调pH6.8，然后加入指示剂，摇匀，用脱脂棉过滤。
制成后为黄绿色，分装试管，121℃灭菌20min后制成斜面，注意配制时控制好pH，不要过碱，以黄绿色为准。
19、醋酸铅培养基
pH7.4的牛肉膏蛋白胨琼脂
100mL
硫代硫酸钠
0.25g
10%醋酸铅水溶液
1mL
培养基的配制：
将牛肉膏蛋白胨琼脂100mL加热溶解，待冷却至60℃时加入硫代硫酸钠0.25g，调至pH7.2，分装于三角瓶中，115℃灭菌15min。
取出后待冷却至55—60℃，加入10%醋酸铅水溶液（无菌的）1mL，混匀后倒入灭菌试管或平板中。
20、血琼脂培养基
pH7.6的牛肉膏蛋白胨琼脂
100mL
脱纤维羊血（或兔血）
10mL
培养基的配制：
将牛肉膏蛋白胨琼脂加热熔化，待冷却至50℃时，加入无菌脱纤维羊血（或兔血）摇匀后倒平板或制成斜面。
37℃过夜检查无菌生长即可使用。
21、玉米粉蔗糖培养基
玉米粉
60g
磷酸二氢钾
3g
维生素B1
100mg
蔗糖
10g
七水合硫酸镁
1.5g
水
1000mL
121℃灭菌30min，维生素B1单独灭菌15min后另加。
22、酵母膏麦芽汁琼脂
麦芽粉
3g
酵母浸膏
0.1g
水
1000mL
121℃灭菌30min。
24、棉籽壳培养基
培养基的配制：
棉籽壳50%，石灰粉1%，过磷酸钙1%，水65%—70%，按比例称好料，充分搅拌均匀后装瓶，较薄地平摊盘上。
25、复红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基）
蛋白胨
10g
乳糖
10g
磷酸氢二钾
3.5g
琼脂
20—30g
蒸馏水
1000mL
5%碱性复红乙醇溶液
20mL
培养基的配制：
先将琼脂加入900mL蒸馏水中，加热溶解，再加入磷酸氢二钾及蛋白胨，使溶解，补足蒸馏水至1000mL，调pH至7.2—7.4。
加入乳糖，混匀溶解后，115℃灭菌20min。
称取亚硫酸钠置一无菌空试管中，加入无菌水少许使溶解，再在水浴中煮沸10min后。
立刻滴加于20mL5%碱性复红乙醇溶液中，直至深红色褪成淡粉红色为止。
将此亚硫酸钠与碱性复红的混合液全部加至上述已灭菌的并仍保持熔化状态的培养基中，充分混匀，倒平板，放冰箱中备用，贮存时间不宜超过2周。
26、伊红美蓝培养基（EMB培养基）
蛋白胨水培养基
100mL
20%乳糖溶液
2mL
2%伊红水溶液
2mL
0.5%美蓝水溶液
1mL
培养基的配制：
将已灭菌的蛋白胨水培养基（pH7.6）加热熔化，冷却至60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌操作加入。
摇匀后，立即倒平板。
乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115℃灭菌20min。
27、乳糖蛋白胨培养液（“水的细菌学检查”用）
蛋白胨
10g
牛肉膏
3g
乳糖
5g
氯化钠
5g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
1mL
蒸馏水
1000mL
培养基的配制：
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调pH至7.2—7.4。
加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于有小倒管的试管中。
115℃灭菌20min。
28、石蕊牛奶培养基
牛奶粉
100g
石蕊
0.075g
水
1000mL
pH
6.8
121℃灭菌15min。
29、LB（Luria-Bertani）培养基
蛋白胨
10g
酵母膏
5g
氯化钠
10g
蒸馏水
1000mL
pH
7.0
121℃灭菌20min。
30、基本培养基
磷酸氢二钾
10.5g
磷酸二氢钾
4.5
硫酸铵
1g
二水合柠檬酸钠
0.5g
蒸馏水
1000mL
121℃灭菌20min。
需要时灭菌后加入：
糖（20%）
10mL
维生素B1（硫胺素）（1%）
0.5mL
七水合硫酸镁（20%）
1mL
链霉素（50mg/mL）4mL，终浓度200μg/mL
氨基酸（10mg/mL）4mL，终浓度40μg/mL
pH自然（—7.0）
31、庖肉培养基
培养基的配制：
（1）、取已去肌膜、脂肪之牛肉500g，切成小方块，置1000mL蒸馏水中，以弱火煮1小时，用纱布过滤，挤干肉汁，将肉汁保留备用。
将肉渣用绞肉机绞碎，或用刀切成细粒。
（2）、将保留的肉汁加蒸馏水，使总体积为2000mL，加入蛋白胨20g，葡萄糖2g，氯化钠5g，及绞碎的肉渣，置烧瓶摇匀，加热使蛋白胨溶化。
（3）、取上层溶液测量pH，并调整其达到8.0，在烧瓶壁上用记号笔标示瓶内液体高度，121℃灭菌15min后补足蒸发的水分，重新调整pH值8.0，再煮沸10—20min，补足水量后调整pH7.4。
（4）、将烧瓶内容物摇匀，将溶液和肉渣分装于试管中，肉渣约占培养基的1/4左右。
经121℃灭菌15min后备用，如当日不用，应以无菌操作加入已灭菌的石蜡凡士林，以隔绝氧气。
32、乳糖牛肉膏蛋白胨培养基
乳糖
5g
牛肉膏
5g
酵母膏
5g
蛋白胨
10g
葡萄糖
10g
氯化钠
5g
琼脂粉
15g
pH
6.8
水
1000mL
33、马铃薯牛乳培养基
培养基的配制：
200g马铃薯（去皮）煮出汁，脱脂鲜乳100mL，酵母膏5g，琼脂粉15g，加水1000mLpH7.0。
制平板培养基时，牛乳与其他成分分开灭菌，倒平板前再混合。
34、尿素琼脂培养基
尿素
20g
琼脂
15g
氯化钠
5g
磷酸二氢钾
2g
蛋白胨
1g
酚红
0.012g
蒸馏水
1000mL
pH
6.8±0.2
培养基的配制：
在蒸馏水或去离子水100mL中，加入上述所有成分（除琼脂外）。
混合均匀。
过滤灭菌。
将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中，加热煮沸腾。
在15磅121℃灭菌15min。
冷却至50℃，加入灭菌好的基本培养基，混匀后，分装于灭菌的试管中，放在倾斜位置上使其凝固。
常用染色剂的配制及染料介绍
1、吕氏（Loeffer）碱性美蓝染液
A液：
美蓝（methyleneblue）
0.06g
95%乙醇
30mL
B液：
KOH
0.01g
蒸馏水
100mL
分别配制A液和B液，配好后混合即可。
2、齐氏（Ziehl）石炭酸复红染色液
A液：
碱性复红（basicfuchsin）
0.3g
95%乙醇
10mL
B液：
石炭酸
5.0g
蒸馏水
95mL
配制方法：
将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%乙醇，继续研磨使其溶解，配成A液。
将石炭酸溶于水中，配成B液。
混合A液及B液即成。
通常可将此混合液稀释5~10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。
3、革兰氏（Gram）染色液
（1）．草酸铵结晶紫染液
A液：
结晶紫（crystalviolet）
2g
95%乙醇
20mL
B液：
草酸铵（ammoniumoxlate）
0.8g
蒸馏水
80mL
混合A液及B液，静置48h后使用。
（2）．卢戈氏（Lugol）碘液
碘片
1g
碘化钾
2g
蒸馏水
300mL
配制方法：
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分既成。
（3）．95%的乙醇溶液
（4）．番红复染液
番红（safranineO）
2.5g
95%乙醇
100mL
取上述配好的番红乙醇溶液10mL与80mL蒸馏水混匀既成。
4、 芽孢染色液
（1）．孔雀绿染液
孔雀绿（malachitegreen）
5g
蒸馏水
100mL
（2）．番红水溶液
番红
0.5g
蒸馏水
100mL
（3）．苯酚品红溶液
碱性品红
11g
无水乙醇
100mL
配制方法：
取上述溶液10mL与100mL5%的苯酚溶液混合，过滤备用。
（4）．黑色素（nigrosin）溶液
水溶性黑色素
10g
蒸馏水
100mL
配制方法：
称取10g黑色素溶于100mL蒸馏水中，置沸水浴中30min后，滤纸过滤两次，补充水到100mL，加0.5g甲醛，备用。
5、 荚膜染色液
（1）．黑色素水溶液
黑色素
5g
蒸馏水
100mL
福尔马林（40%甲醛）
0.5mL
配制方法：
将黑色素在蒸馏水中煮沸5min，然后加入福尔马林作防腐剂。
（2）．番红染液
与革兰氏染液中番红复染液相同。
6、 鞭毛染色液
（1）．硝酸银鞭毛染色液
A液：
单宁酸
5g
FeCl3
1.5g
蒸馏水
100mL
福尔马林（15%）
2mL
NaOH（1%）
1mL
冰箱内可以保存3~7天，延长保存期会产生沉淀，但用滤纸除去沉淀后，仍能使用。
B液：
AgNO3
2g
蒸馏水
100mL
配制方法：
待AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其余的90mLAgNO3中滴入NH4OH，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。
再将备用的10mLAgNO3慢慢地滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。
冰箱内保存通常10天内仍可使用。
如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。
（2）．Leifson氏鞭毛染色液
A液：
碱性复红
1.2g
95%乙醇
100mL
B液：
单宁酸
3g
蒸馏水
100mL
C液：
NaCl
1.5g
蒸馏水
100mL
临用前将A，B，C液等量混合均匀后使用。
三种溶液分别于室温保存可保存几周，若分别置冰箱保存，可保存数月。
混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。
（一）天然染料
1、苏木精
苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。
苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。
被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。
常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红
洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。
单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。
常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
（二）人工染料
人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。
它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。
他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
他跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。
他能作染料，也用作指示剂。
他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。
他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。
在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。
刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。
3、甲基蓝
甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。
甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。
他跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。
它的水溶液是原生动物的活体染色剂。
甲基蓝极易氧化，因此用他染色后不能长久保存。
4、固绿
固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。
固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。
他和苏木精、番红并列为植物组织学
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