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基因细胞工程
选修3现代生物科技专题
专题一、基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
基因工程技术的原理：
基因重组
目的：
创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
操作水平：
DNA分子水平
一、基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：
主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：
能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：
经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：
黏性末端和平末端（回文结构特点）。
常用限制酶：
EcoR
限制酶识别序列:
GAATTC
黏性末端
Sma
限制酶识别序列：
CCCGGG
平末端
2.“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）两种DNA连接酶：
将双链DNA片段缝合起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
E·coliDNA连接酶：
连接双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键，不能连接平末端
T4-DNA连接酶：
缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的不同点:
DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。
DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
相同点：
都形成磷酸二酯键
3.“分子运输车”——载体
（1）载体具备的条件：
①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
④大小合适，具有一定的安全性。
（2）最常用的载体：
质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：
噬菌体的衍生物、动植物病毒
在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改选的。
例题：
1、右图示某DNA片段，有关该图的叙述中，不正确的是
A．②③④可形成DNA的基本组成单位
B．②③④在DNA中特定排列顺序可代表遗传信息
C．某限制性内切酶可选择⑤作为切点
D．DNA连接酶可连接①处断裂的化学键
2、下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是
A．①②③④B．①②④③
C．①④②③D．①④③②
3、下列DNA片段能够用DNA连接酶连接起来的是
A．①和⑤B．①和⑤、②和④
C．①和③D．①和③、④和⑥
4、下列有关限制性内切酶识别的叙述，不正确的是
A．从反应类型来看，限制性内切酶催化的是一种水解反应
B．限制性内切酶的活性受温度、pH的影响
C．一种限制性内切酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D．限制性内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
5、下列关于染色体和质粒的叙述，正确的是
A．染色体和质粒的化学本质都是DNA
B．染色体和质粒都只存在于原核细胞中
C．染色体和质粒都与生物的遗传有关
D．染色体和质粒都可作为基因工程的常用载体
6、基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。
已知限制
酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。
根据图示判断下列操作正确的是
A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
2、基因工程的基本操作程序
第一步：
目的基因的获取
1.目的基因是指：
编码蛋白质的结构基因。
2.目的基因的获取方法：
原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。
从基因文库中获取目的基因：
区分基因组文库、部分基因文库（如cDNA文库）
PCR技术扩增目的基因
PCR是聚合酶链性反应的缩写，发明人：
穆里斯等人
原理：
DNA双链复制
实质：
是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
前提：
要有一段已知目的基因的核苷酸序列
过程：
（变性）加热至90～95℃DNA解链；
（复性）冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；
（延伸）加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
PCR利用DNA热变性原理，PCR扩增仪实质上是一台能够自动调控调控的仪器。
人工合成
逆转录法：
分子较大的，其全部序列未知
化学合成法:
小分子，且其序列已知
第二步：
基因表达载体的构建（基因工程的核心）
1.目的：
使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2.组成：
目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因
（1）启动子：
是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
（2）终止子：
也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
使转录在需要的地方停下来。
（3）标记基因的作用：
是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
常用的标记基因是抗生素基因。
第三步：
将目的基因导入受体细胞
1.转化的概念：
是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2.常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：
采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：
最常用的方法是显微注射技术。
此方法的受体细胞多是受精卵（也可以是卵细胞）。
将目的基因导入微生物细胞：
原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：
先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：
目的基因的检测和表达
1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。
基因探针：
是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
2.其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。
3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。
4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。
如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状或抗病性状。
例题：
1、下列属于获取目的基因的方法的是
①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术⑤利用DNA转录⑥人工合成
A．①②③⑤B．①②⑤⑥C．①②③④D．①②④⑥
2、基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞。
下列不属于这样做的原因的是
A．结构简单，多为单细胞B．繁殖速度快
C．遗传物质含量少D．性状稳定，变异少
3、要检测目的基因是否成功的插入了受体DNA中，需要用基因探针，基因探针是指
A．用于检测疾病的医疗器械
B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
C．合成
一球蛋白的DNA
D．合成苯丙羟化酶的DNA片段
4、下列有关基因工程技术的叙述，正确的是
A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和基因进入受体细胞的载体
B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞主要是因为细菌繁殖快、遗传物质少
D．只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达
5、下列哪项不是基因工程技术
A．基因转移B．基因扩增C．基因检测D．基因表达
6、用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质，下列叙述正确的是（）
A．常用不同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒
B．DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必须的工具酶
C．可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达
7、我国科学家运用基因工程技术将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。
下列叙述正确的是（）
A．基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少
B．重组DNA分子中增加一个碱基对，就一定会导致毒蛋白的毒性丧失
C．抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物，从而造成基因污染
D．转基因棉花是否具有抗虫特性是可以通过检测棉花对抗生素抗性来确定的
8、科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎内含有人奶主要蛋白。
以下有关该基因工程的叙述，正确的是（）
A．采用反转录的方法得到目的基因有内含子
B．基因非编码区对于目的基因在块茎中表达是不可缺少的
C．马铃薯的叶肉细胞不可作为受体细胞
D．用同一种限制性内切酶，分别处理质粒和含目的基因的DNA，可产生黏性末端而形成重组DNA分子
9、科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。
其过程大致如下图所示。
（1）基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是___、_______、______、 _____。
（2）Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有T-DNA，把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中是利用T-DNA__________的特点。
（3）Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为_____。
（4）将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是________。
（5）目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是_______，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是__________。
三、基因工程的应用
1.植物基因工程：
抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。
①抗虫棉，抗盐碱地的农作物，耐寒的番茄，抗除草剂的玉米，
②富含赖氨酸的转基因玉米、转基因延熟番茄
2.动物基因工程前景广阔：
提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物、用转基因动物作器官移植的供体。
①③④导入人的生长激素的鲤鱼，比一般的鲤鱼长的快且大。
②用转基因动物生产药物：
乳腺生物反应器（乳房生物反应器）
最令人兴奋的是利用基因工程技术，使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”
大概过程：
目的基因（蛋白基因+乳腺蛋白基因的启动子）
显微注射方法
导入哺乳动物受精卵
母体子宫内
能产生药品蛋白质转基因动物
能产生如：
抗凝血酶，血清白蛋白，生长激素，抗胰蛋白酶，等大量蛋白质类药品。
转基因动物作器官移植的供体：
最大的难题是解决免疫排斥问题
3.基因治疗：
把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。
基因诊断：
是指用基因探针，利用DAN分子杂交原理，鉴定被检测样本上的遗传信息，从而达到检测病症的目的，如镰刀形贫血症，苯丙酮尿症，癌症
基因治疗：
基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗病症的目的，这是治疗遗传病的最有效的手段。
基因治疗包括：
体外基因治疗和体内基因治疗
4.微生物的基因工程：
利用转基因工程菌生产药物：
如细胞因子，抗体，疫苗，激素（胰岛素），干扰素等，已形成工业化。
工程菌：
用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系一般称为工程菌。
基因工程的优点：
克服不同生物远缘杂交的障碍。
目的性强，能够定向的改变生物的品质。
缩短育种周期。
例题：
1、采用基因工程的方法培育抗棉虫，下列导入目的基因的作法正确的是
①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中
③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养
④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵
A．①②B．②③C．③④D．④①
2、下列属于利用基因工程技术培育的新品种的是
Ａ、耐寒的小黑麦 Ｂ、抗棉铃虫的转基因抗虫棉
Ｃ、太空椒 Ｄ、试管牛
3、切取某动物合成生长激素的基因，用某种方法将此基因转移到鲇鱼的受精卵中，从而鲇鱼比同类个体大3～4倍，此项研究遵循的原理是
A．基因突变，DNA→RNA→蛋白质B．基因工程，DNA→tRNA→蛋白质
C．细胞工程，DNA→RNA→蛋白质D．基因重组，DNA→RNA→蛋白质
4、下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。
（1）大肠杆菌等微生物是基因工程最早的突破口和常用的实验材料，这是因为：
①大肠杆菌结构简单，容易从体内取出和导入；
②大肠杆菌繁殖速度快，产量大，成本低。
（2）“目的基因”能在大肠杆菌内实现遗传信息成功的表达，说明大肠杆菌具有一种细胞器是。
（3）自然界中生物的变异是的，而以上的基因工程技术使大肠杆菌按照人们
目的发生的变异。
（4）若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶个。
（5）家蚕的体细胞共有56条染色体，对家蚕的基因组进行分析（参照人类基因组计划要求），应测定家蚕的条双链DNA分子上的核苷酸序列，它们分别是。
（6）为了提高蚕丝的产量和品质，可以通过家蚕遗传物质改变引起变异和进一步的选育来完成．这些变异的来源有：
。
4、蛋白质工程的崛起
蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。
（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）
蛋白质工程成功的例子：
科学家通过对胰岛素的改造,已使其成为速效型药品
例题：
1、科学家将β－干扰素基因进行定点突变导入大肠杆菌表达，使干扰素第17位的半胱氨酸变成丝氨酸，结果大大提高了β－干扰素的抗病活性，并且提高了储存稳定性。
该生物技术为（ ）
A．基因工程B．蛋白质工程
C．基因突变D．细胞工程
2、下列哪项不是蛋白质工程的研究内容（ ）
A．分析蛋白质分子的精细结构
B．对蛋白质进行有目的的改造
C．分析氨基酸的化学组成
D．按照人的意愿将天然蛋白质改造成新的蛋白质
3、蛋白质工程中需要直接进行操作的对象是（ ）
A．氨基酸结构B．蛋白质空间结构
C．肽链结构D．基因结构
4、科学家为提高玉米中赖氨酸含量，计划将天冬氨酸激酶的第352位的苏氨酸变成异亮氨酸，将二氢吡啶二羧酸合成酶中104位的氨基酸由天冬氨酸变成异亮氨酸，就可以使玉米叶片和种子中的游离赖氨酸含量分别提高5倍和2倍，下列对蛋白质的改造，操作正确的是（ ）
A．直接通过分子水平改造蛋白质
B．直接改造相应的mRNA
C．对相应的基因进行操作
D．重新合成新的基因
5、蛋白质工程的基本流程正确的是（ ）
①蛋白质分子结构设计 ②DNA合成 ③预期蛋白质功能 ④据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列
A．①②③④B．④②①③
C．③①④②D．③④①②
6、蛋白质工程中目前已成功的是（ ）
A．对胰岛素进行改造，使其成为速效型药品
B．蛋白质工程应用于微电子方面
C．室温下可保存半年的干扰素
D．耐储存的番茄
专题二、细胞工程
细胞工程：
是指导应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。
根据操作对象不同分为：
植物细胞工程，动物细胞工程
操作水平：
细胞水平的操作
一、植物细胞工程（属于无性繁殖）
无性繁殖最大优点：
保持优良品种的遗传特征。
1.理论基础（原理）：
细胞全能性（具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞都具有发育成完整生物体的潜能，也就是说，每个生物细胞都具有全能性的特点）
植物具有全能性的原因：
分化的细胞，仍具有形成完整植株所需要的全部基因。
全能性表达的难易程度：
受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞
理论上，生物的任何一个细胞都具有发育成完整植物的潜力，但是在生物的生长发育过程中，细胞并不会表现出全能性，而是分化成各种器官和组织，是因为在特定的时间和空间条件下，
植物细胞工程的基本技术：
植物组织培养，植物体细胞杂交技术
2.植物组织培养技术
（1）过程：
离体的植物器官、组织或细胞
脱分化
愈伤组织
再分化
试管苗→植物体
（外植体消毒）生长素及细胞分裂素（避光）生长素及细胞分裂素（给光）
植物全能性表达的条件：
离体的，提供人为条件（营养，激素，适宜的外界条件）
愈伤组织：
细胞排列疏松而无规则是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞
培养基：
固体培养基，含有矿质元素，碳源（蔗糖），氮源，植物激素，维生素
（2）植物组织培养技术的应用：
微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。
A植物繁殖
微型繁殖：
可以高效快速地实现种苗的大量繁殖
作物脱毒：
采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有）
人工种子：
以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经人工薄膜包装得到的种子。
优点：
完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输
B作物新品种培育
单倍体育种：
a过程：
植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；对花粉进行花药离体培养（技术是植物组织培养）；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行秋水仙素处理；得到了正常的纯合二倍体植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。
b优点：
明显缩短育种年限
C突变体利用：
在组织培养中会出现突变体，通过从有用的突变体中选育出新品种（如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体）
D细胞产物的生产：
通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养，从而让它们能够产生大量的细胞产物。
（3）地位：
是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。
3.植物体细胞杂交技术
（1）过程：
原生质制备
细胞融合
杂种细胞筛选
细胞培养
组织培养技术植物鉴定植物再生
（2）诱导融合的方法：
物理法包括离心、振动、电刺激等。
化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。
（3）去细胞壁：
纤维素酶和果胶酶
等到杂种细胞再生出细胞壁即细胞杂交结束
意义：
克服了远缘杂交不亲和的障碍。
打破特种之间的生殖隔离，扩大遗传重组范围。
例题：
1、将胡萝卜韧皮部细胞培养成幼苗时，下列条件中不需要的是
A．具有完整细胞核的细胞B．一定的营养物质和植物激素C．离体状态D．导入外源基因
2、将植物的茎尖和叶片、茎段、花药等，在无菌的条件下，培养在人工配制的培养基上，使它发育成完整的植株。
这种技术不仅可以用来培育新品种，而且还可以快速繁殖植物，及防止植物病毒的危害。
下列关于这种技术的叙述正确的是：
这种技术利用了植物细胞的全能性
这种技术叫做组织培养，可以克隆生物体
这种技术属于细胞工程的应用领域之一
这种技术属于无性繁殖的方式
A.
B.
C.
D.
3、在下列过程中，需要采用植物组织培养技术的是
①利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，获得多倍体植株 ②利用花药离体培养得到的单倍体植株③利用基因工程培养抗棉铃虫的植株 ④利用细胞工程培养“番茄马铃薯”杂种植株 ⑤无子西瓜的大量繁殖
A．①②③B．③④⑤C．①②④⑤D．②③④⑤
4、白菜甘蓝细胞融合完成的标志
A．产生新的细胞壁B．细胞膜发生融合C．细胞质发生融合D．细胞核发生融合5、对细胞全能性的表达正确的是
A．离体的植物细胞均能够表现出全能性
B．动物细胞融合标志着动物细胞全能性的实现
C．花粉可培育成单倍体植株是细胞全能性的表现
D．单克隆抗体的制备依据的原理是细胞的全能性
6、自然界中有一种含有叶绿体的原生动物——眼虫，这说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活。
某同学提出问题：
“动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？
”他尝试设计出下列具体的实验方案。
结合实验方案回答：
实验原理：
根据眼虫的特点，动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的。
实验
步骤如下：
（1）①中选的植物材料细胞中，必须有的细胞器是________。
（2）③过程所用的酶是________________________________________________________。
（3）④过程除了用电激之外，还可以用________、________等作为诱导因素。
（4）⑤过程动物细胞体外培养需要满足的条件是________、________、________、________。
（5）在整个实验过程中，要强调所用的器械的灭菌和无菌操作，原因是各种杂菌可以在培
养基上面迅速生长，培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和________争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量导致培养物迅速死亡。
二、动物细胞工程
常用的技术手段：
动物细胞培养，动物细胞核移植，动物细胞融合，生产单克隆抗体。
其中动物细胞培养技术是基础技术
1.动物细胞培养
（1）概念：
动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
（2）动物细胞培养的流程：
取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
（3）细胞贴壁和接触抑制：
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
（4）动物细胞培养需要满足以下条件
①无菌、无毒的环境：
培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。
此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：
合成培养基成分：
糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常需加入血清、血浆等天然成分。
③温度：
适宜温度：
哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：
7.2～7.4。
④气体环境：
95%空气＋5%CO2。
O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（5）动物细胞培养技术的应用：
制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。
2.动物体细胞核移植技术和克隆动物
（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。
（2）选用去核卵（母）细胞的原因：
卵（母）细胞比较大，容易操作；
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