HPLC法测定果蔬中维生素C精.docx
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HPLC法测定果蔬中维生素C精
农业基础科学现代农业科技2011年第3期
表1
精密度试验结果
样品变异系数
%123456平均
刀豆角31.6031.2030.8030.930.3031.2031.000.441.42西瓜皮
9.809.409.509.4
9.30
9.30
9.45
0.192.01
维生素C含量∥mg/100g
标准差
mg/100g注:
表中检出量均为5次平行测定平均值。
表2
回收率
样品样品含量
mg/100g加入标样量
mg检出量
mg回收率
%苹果11.9220.019.4497.2菜瓜14.2020.018.4492.2辣椒155.9050.054.90109.8西红柿16.0820.019.4497.2杏
15.3620.019.9499.7
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一,它能增强人体抵抗力,预防坏血病,因此又称抗坏血酸。
维生素C分布很广,主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。
因此,测定水果及蔬菜中的维生素C含量,对评定其营养价值有重要意义。
维生素C的测定方法有多种,包括容量法、比色法以及荧光光度法、电位法[1]和紫外分光光度法[2-3]等,各种方法均有特长和不足。
高效液相色谱是近年来发展起来的一种快速、高效的分离技术。
运用这一现代色谱工具进行维生素C的检测,国内外曾有报道[4-6]。
在此基础上,开展了液相色谱测定果蔬中维生素C的工作,效果较好。
现将试验情况总结如下。
1材料与方法1.1
仪器与试剂
仪器:
高效液相色谱仪,美国Waters201型,包括510
泵、U6K进样器、481紫外检测器、740数据处理机;MILLI-Q型超纯水装置;GL-20型高速冷冻离心机。
试剂:
磷酸二氢铵,偏磷酸,浓磷酸,抗坏血酸;均为分析纯。
1.2样品前处理
用超纯水配制0.5%的磷酸二氢铵,用0.45μm膜过滤,
将浓磷酸调至pH值为2.3作为流动相。
标样配制:
准确称取维生素C标样50mg,用3%偏磷酸
定容至500mL容量瓶摇匀,再吸取1mL定容至100mL。
样品制备:
大量样品,迅速称取切碎样品100g加等量
3%偏磷酸,倒入组织捣碎机捣碎,称取匀浆20.0g,用3%偏
磷酸定容至100mL容量瓶。
少量样品,称取样品1~5g倒入研钵内,加入少量3%偏磷酸充分研磨成糊状,全部转移定容至100mL容量瓶。
将定容好的容量瓶超声提取10min,取上清液5mL,0℃、2700r/min离心10min,用0.45μm膜过滤后进样。
1.3试验方法
色谱条件:
色谱柱NOVA—PAKC18;流动相0.5%NH4H2PO4,
流速1mL/min;纸速1cm/min;洗脱时间2.5min;检测器
481紫外检测器;波长243.5nm;灵敏度0.1AuFS;进样量10μL。
根据经典的保留值法和样品中维生素C与加入标样后色谱峰迭加来定性。
将标准液注入色谱柱中,经740数据处理机采用单点外标法进行定量,直接打印出分析结果。
2结果与分析2.1
精密度
配制0.0050mg/mL的标准维生素C溶液,进样量从
2.5μL开始,以响应值与进样量绘制标准曲线均成线性。
试
验结果见表1。
回归方程为:
y=1.030x-2.431×10-5
(r=0.9997
HPLC法测定果蔬中维生素C
郝学宁
郝嫱嫱
刘雪莲
(青海省农林科学院分析测试中心,青海西宁810016
摘要通过高效液相色谱法和国标法2种方法测定了果蔬中的维生素C,通过精密度、准确度、回收率等方法对比结果表明:
液相色谱法是一种高效、快速、准确、高灵敏度的分离分析方法。
关键词HPLC法;果蔬;维生素C;测定中图分类号O652.63文献标识码A文章编号1007-5739(201103-0030-02
DeterminationofVitaminCinVegetablesandFruitswithHPLCMethod
HAOXue-ningHAOQiang-qiangLIUXue-lian
(AnalysisandTestingCenterofQinghaiAgricultureandForestrySciences,XiningQinghai810016
AbstractInthispaper,highperformanceliquidchromatographyandnationalstandardmethodwereusedtodetermineVCinfruitsandvegetables.Throughtheprecision,accuracy,recoverymethods,etc.,suchascomparativeresultsshowedthatliquidchromatographywasanefficient,fast,accurateandhighsensitivityseparationanalysismethod.
KeywordsHPLCmethod;fruitsandvegetables;vitaminC;determination
作者简介郝学宁(1955-,男,河北永清人,高级实验师,从事农化分析工作。
收稿日期
2010-12-18
试验条件下维生素C的最小检测量为2.5×10-9g。
2.2方法可靠性
历经制样全过程,在不同基样中加入维生素C,回收考
察其准确度,结果见表2。
由表2可知,样品平均回收率为
99.2%。
标准维生素C和典型样品的色谱图见图1。
部分样品的测定结果与2,6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定
30
法结果比较见表3。
2.3柱效
在有预柱的情况下,1根柱子经过500余次的进样,柱
效无明显变化。
柱压一直保持在1500Pa左右。
维生素C峰的保留时间稳定在1.8min±1s。
2.4维生素C溶液的可保存性
在(20±2℃的室温下,经连续测定维生素C的氧化程
度,结果见表4。
由表4可知,标样在试验浓度下,24h内
无变化,48h内稍有下降;而样品中由于存在抗坏血酸酶,
2h内分别比原浓度下降3.2%和6.0%,48h内分别比原浓
度下降14.5%和11.2%。
因此,样品应迅速处理后立即上机为好。
3结论
试验结果表明,反相HPLC-UV检测法具有样品用量
少、预处理简单、流动相无毒、速度快、选择性好、灵敏度高等特点[7-8],具有较高的精密度和准确度。
与普通应用的2,6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定法比较,定量结果基本一致,但对常有色素物质存在,造成滴定法滴定终点观察困难的生物组织液更能发挥其特长。
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(上接第29页
K=936.3712,K=893.8137。
由比较知,稻-鱼区的环境容纳量为K=936.3712,稻-鸭-鱼区的环境容纳量为K=893.8137,易知在这2个区鱼鸭
的活动对蜘蛛的数量影响不大,稻-鸭-鱼区的K值稍小,则说明鸭活动对蜘蛛的数量变化稍有影响,而在常规用药区,由于化学农药的破坏性作用,K值最大仅为444.2196,这也反映了化学农药的副作用,化学农药的不合理施用会对生态环境造成极大的破坏[17]。
在3个区的自然增长率,常规用药区、稻-鱼区、稻-鸭-鱼区分别为r=0.0631、r=0.1532、r=0.1373。
说明在稻-鱼区和稻-鸭-鱼区,蜘蛛的数量增长属于较高增长率,说明此复合生态系统中,鸭和鱼对蜘蛛的数量增长繁殖影响不大,而在常规用药区,化学农药在杀灭害虫的同时也杀死了天敌蜘蛛,自然增长率r值仅0.0631,比稻-鱼区的r值0.1532和稻-鸭-鱼区的r值0.1373低58.8%和54.0%。
处于极低的增长率,化学农药的危害由此可见一斑。
4致谢
研究过程中得到桃江县农业局刘若书高级农艺师、林温华站长的
帮助,特此致谢!
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表3
测定方法比较结果
样品维生素C含量∥mg/100g色谱法滴定法
苹果18.007.34苹果211.9212.42早酥梨6.765.94茄子7.306.47辣椒120.10117.40白菜
55.8058.30
郝学宁等:
HPLC法测定果蔬中维生素C
2.50.002.50.00
2.5
0.00维生素C标样
样品1
样品2
图1标准维生素C和典型样品色谱
维生素C
维生素C维生素C
表4
维生素C氧化程度结果
样品
维生素C浓度∥mg/mL
起始2h4h6h8h24h48h
标样样品10.05580.05400.05380.05370.05200.05070.0477样品20.01340.01260.01260.01250.01190.01190.0119
31