体外诊断试剂注册申报资料模板主要原材料的研究资料.docx

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体外诊断试剂注册申报资料模板主要原材料的研究资料

体外诊断试剂注册申报资料

XXXXX检测试剂盒（XXX法）

主要原材料的研究资料

XXXXX有限公司

一、主要原材料的选择

根据试剂盒组分，对市面常见竞争品牌进行比较测试，参考试剂性能，并比较相关试剂应用于反应体系中的表现以及采购难易、成本、口碑等多方面因素，择优选择适用于本试剂盒的主要原材料。

（一）、连接酶的选择

1.检测对象

A公司生产的XX酶和B公司生产的XX酶。

2.主要仪器

PCR仪、荧光PCR仪、QubitDNA荧光定量仪、漩涡混合器、迷你离心机、磁力架等。

3.研究方法和考核指标

3.1建库测试

使用待选择的两种XX酶分别对4例临床真实样本按照附件建库方法进行建库。

取1μL建库产物进行文库定量，并进行电泳检测。

要求：

建库产物文库浓度应≥PM和文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。

3.2酶活测试（定性检测酶活性）

使用待选择的两种连接酶及非连接酶配制反应体系以？

？

为模板进行连接反应，并设置了空白对照，连接产物进行电泳检测。

表1连接酶酶活实验反应体系

要求：

2个供应商的连接产物电泳条带分布应单一，无连接酶和空白对照组的反应体系产物应无连接产物产生，呈现多条条带。

4.实验结果

4.1建库测试结果：

文库产量如表1，两个供应商文库产量浓度结果对比图见图1。

B公司的连接酶建库产量虽整体较高，但不稳定，样本（填入样本编号）的文库产量低于pM（3.1规定的指标）。

电泳结果如图2，两个供应商的连接酶产生的文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。

（3.1规定的指标）

表1：

连接酶的选择：

文库产量及电泳结果（单位：

pM）

样本编号

A公司

B公司

*（如有不符合要求的请用高亮标出）

图1连接酶的选择：

文库产量对比图

图2：

连接酶的选择：

文库片段电泳条带分布

4.2酶活测试结果：

酶活测试结果见表2。

A公司和B公司的连接酶均能成功连接，酶活符合要求。

表2连接酶的选择：

酶活测试结果

泳道号

对应酶

结果

1

A公司连接酶

单一条带

2

B公司连接酶

单一条带

3

非连接酶

无连接产物，多个条带

4

空白

无连接产物，多个条带

图3连接酶的选择：

酶活测试结果电泳条带分布

5.实验结论

有以上实验结果可知，B公司生产的连接酶未能使样本（样本编号）的建库产物文库浓度未能达到pM。

而A公司酶连接效果较为稳定，各方面均能符合要求，因此将A公司生产的连接酶作为该试剂盒的主要原材料。

（二）、XXX酶的选择

1.检测对象

2.主要仪器

3.研究方法和考核指标

3.1建库测试

3.2荧光PCR测试

4.实验结果

5.实验结论

（三）、引物a（如标签引物）的选择

1.检测对象

A公司合成的引物a和B公司合成的引物a。

2.主要仪器

紫外分光光度计、QubitDNA荧光定量仪、漩涡混合器、迷你离心机。

3.引物的设计

说明引物的设计原理

4.研究方法和考核指标

分别从两家供应商的引物中选取3条引物进行以下四个性能指标的检查。

4.1外观及性状：

目测，应为半透明或不透明片状粉状物质，无异味，易溶于水和TE缓冲液。

4.2相对分子质量：

对合成的引物A，进行HPLC检测，根据每个碱基的分子质量（见附录2），计算理论的分子质量值与HPLC检测的分子质量值进行比较，HPLC检测的分子质量值与计算的理论分子质量值的差值应在±1%范围内。

4.3总量：

将引物溶解，使用Qubit3.0荧光定量仪测试引物浓度，与理论值进行比较；测定OD值换算的浓度与合成报告单的浓度相差±200%。

4.4碱基准确性：

检查质量报告单，合成的序列应与设计的序列一致性。

5.实验结果

5.1外观及性状：

两个供应商的引物均是呈薄膜粉状物质，加入TE溶液后全部溶解。

5.2相对分子质量结果见表8

表8引物A的选择：

相对分子质量

A公司

B公司

理论值

测定值

理论值差值

测定值

理论值差值

引物编号1

引物编号2

引物编号3

5.3总量测定见表9

表9引物A的选择：

总量测定（单位：

μM）

实测值

理论值

A公司

B公司

第一次

第二次

平均值

标准偏差

理论值差值

第一次

第二次

平均值

标准偏差

理论值差值

引物编号1

引物编号2

引物编号3

5.4碱基准确性检查两个供应商的引物碱基准确性均与设计一致。

6.实验结论

综上，A公司合成的引物a和B公司合成的引物a，在外观及性状，相对分子质量，总量和碱基准确性上均能符合要求，综合成本等因素，选择A公司合成的引物作为本试剂盒的主要原材料。

（四）、XXXX的选择

其他原材料的选择同样选取2-3个供应商生产的原材料采用一定的考核指标评价确定供应商，（供应商指生产厂家，非经销商）。

如无法确定哪些原材料需要确定供应商，可参考相关产品的技术审评指导原则。

二、主要原材料的检定

（一）、连接酶

1.外观

无色透明液体。

2.性能要求

2.1将原料配制成建库试剂组分，进行建库测试，建库产物文库浓度应PM和文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。

2.2对原料进行酶活测试，应具有连接酶活性。

3.贮存条件

-18℃以下保存。

（二）、XXX酶

1.外观

无色透明液体。

2.性能要求

2.1将原料配制成建库试剂组分，进行建库测试，建库产物文库浓度应PM和文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。

2.2对原料进行荧光PCR测试，Ct值应＜，扩增曲线呈‘S’型。

3.贮存条件

-18℃以下保存。

（三）、标签引物

1.外观

半透明或不透明片状粉状物质，无异味，易溶于水和TE缓冲液。

2.性能要求

2.1总量：

使用分光光度计测定OD260，换算的浓度与报告单的浓度相差±10%。

2.2相对分子质量

分子质量值与理论计算的值相差±10%。

2.3碱基准确性

合成公司提供的合成证明文件上的序列与设计序列一致。

3.贮存条件

-18℃以下保存。

（四）、XXXX

1.外观

2.性能要求

3.贮存条件

-18℃以下保存。

三、试剂盒质控品的建立

试剂盒质控品是放置于试剂盒中，与试剂盒一起销售，用于质控样本检测过程的标准物质。

1.试剂盒质控品的组成

本试剂盒包括阳性质控品和阴性质控品各一，作为评价检测数据有效性的依据；在实际检测中，阳性质控品和阴性质控品与样本同步进行前处理上机。

2.试剂盒质控品的来源

说明质控品的来源，是真实临床样本还是实验室模拟样本，是否有经过提取等处理加工。

3.试剂盒质控品的制作

详细介绍质控品的制作方法，如何配置，如何定量等。

4.试剂盒质控品的定值方法

详细介绍质控品的定值方法。

5.试剂盒质控品的质量标准

举例：

5.1DNA和RNA总量

DNA和RNA的浓度都应大于或等于ng/μL。

5.2突变位点的确定

各个突变位点的分析结果应与供应商提供的突变位点一致。

5.3.贮存条件

-18℃以下保存。

6.试剂盒质控品的检验方法

举例：

6.1使用QubitDNA或RNA测试试剂盒，分别检测其DNA和RNA含量，结果应符合5.1的要求。

6.2使用建库试剂盒进行建库并测序分析质控品，结果应符合5.2的要求。

四、企业参考品的建立

为评价不同批次的试剂盒的产品性能、合理控制生产工艺过程、保证每批试剂的有效性和稳定性，建立企业参考品盘，分别考察试剂盒的阳性符合率、阴性符合率、检测限、精密度，评估试剂盒的成品性能。

企业参考品盘用于对每批试剂盒的质量检测。

1.企业参考品的来源

说明质控品的来源，是真实临床样本还是实验室模拟样本，是否有经过提取等处理加工。

2.企业参考品的组成

描述企业参考品盘由哪些参考品组成。

举例：

（1）阳性参考品：

阳性参考品应当包括对所申报产品的适用范围，并尽量设置中高低浓度。

如有特殊情况，特别考虑。

（2）阴性参考品：

不包含申报范围内位点的参考品，但尽量设置与申报范围位点相似的位点，考察试剂盒的特异性。

（3）检测限参考品：

建议包含所有的申报位点。

（4）精密度参考品：

精密度参考品设置要求可参考阳性/阴性参考品。

3.企业参考品的制作

详细介绍质控品的制作方法，如何配置，如何定量等。

4.企业参考品的定值方法

一般跟试剂盒质控品的定制方法一致

5.企业参考品的质量标准

一般包含以下几个指标，具体指标的要求针对产品性能设置。

5.1外观

5.2阳性参考品符合率

5.3阴性参考品符合率

5.4最低检测限参考品

5.5重复性

6.企业参考品盘的检验方法

用合格批次的试剂盒检测企业参考品盘，检测结果应符合5.1-5.5的要求。

7.企业参考品盘的保存条件和有效期

企业参考品盘？

？

℃保存？

年；？

？

℃保存？

年。