LC20ATvp高效液相色谱仪验证方案.docx

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LC20ATvp高效液相色谱仪验证方案

LC-20A高效液相色谱仪

验证方案

1.主题内容与适用范围

本方案规定了LC-20A高效液相色谱仪验证的内容、过程和方法。

本方案适用于LC-20A高效液相色谱仪验证。

2.相关文件

《岛津LC-20A高效液相色谱仪使用说明书》

《中国药典》2010年版二部

《药品检验仪器操作规程》2010年版

岛津LC-20A高效液相色谱仪的操作及维护保养SOP编号：

EMO-R35

3.验证目的

为确认LC-20A高效液相色谱仪能够达到仪器性能指标，能符合检验产品需求，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。

4.职责

验证小组成员

工作内容

组长

解斌

负责验证的实施、组织及协调工作

成员

熊仁清

负责按验证计划组织实施验证工作

熊仁清

负责验证方案、验证报告编写及实施工作

熊仁清

负责验证的实施及不符合项目的整改工作

动力设备部

负责验证中涉及计量器具的校验工作

质量管理部

负责验证质量检验项目的检验、出具报告工作

5.验证内容与方法

.预确认

.设备基本情况

本仪器由日本岛津公司生产，由2台LC-20AT泵、1台SPD-20A检测器、1台CBM-20A控制器,1台CTO-10ASvp柱温箱，岛津LCsolution双通道色谱工作站组成。

主要用于各种进厂原料、成品药的含量测定及新方法的开发及其验证。

设备名称：

高效液相色谱仪

型号：

LC-20A

生产厂家：

日本岛津公司

安装日期：

2008.4

使用部门：

研究开发中心

.安装确认

项目要求：

充分通风，附近无火源（当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时，房间应充分通风；当使用易燃溶液时，严禁室内使用明火或其它火源）；

安装场所环境温度4-35℃，日温度变化要小（不超过2℃）；

湿度保持在45～85%，无灰尘及腐蚀性气体；

没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调；

电源功率220±10V，50HZ；

供电电源应有良好的接地；

线路连接各接口连接正确；

管线连接各接口连接正确。

5.2.硬件认证

硬件认证检查LC系统是否运转正常，仪器是否适用于准备进行的分析，在LC安装、操作和性能鉴定过中进行认证，此后还要定期检查，随着时间的推移，由于易损部件的磨损，LC系统的性能会下降。

因此，从系统安装时起直到系统报废时止，必须定期进行硬件认证。

.柱温箱温度准确度检查

检查温度是否控制在设定的温度，特别是，测量柱箱内部热传感器附近的温度，并与设定温度相比较。

在没有特殊要求下，设定温度使用50℃。

.1.设备连接：

使用热电偶固定架将热传感器（热电偶）固定在柱箱内，将热传感器（热电偶）的导线连接到数字万用表的输入端。

.2.检查过程：

打开电源开关，显示初始屏幕，按func键，屏幕显示SETTEMP,使用▲/▼键设定温度为50℃，按oven键，启动温度控制，当ready指示灯亮后，等待10min,运行TEMPERAGURETEST。

可以接收的标准（温度控制精度为Dt≤℃（设定温度为50℃））。

为了检查温度，输入由数字万用表测量的温度，观察显示结果，屏幕如显示“ACCURACYGOOD”表示结果满足要求。

如果显示结果不满足要求，需要进行纠正设定温度错误，具体操作如下：

重复按VP键直至屏幕显示CALIBRATION（校正功能VP组）；重复按func键直至屏幕显示TEMPCAL-IB（此为校正设定温度）；输入作为校正温度的T值，该值显示在上述温度准确度检查过程中运行TEMPRATURETEST功能后所显示的屏幕上；重复按func键直至屏幕显示REF.TEMPCALIB（用于设定温度校正参数）；使用▲/▼键设定一温度数值作为校正参数，该值是用热传感器测量的数值，按▲键以℃步长升高校正值，按▼键以℃步长降低校正值；按Enter键确认新的设定值，当电源关闭后，此值保留在内存中。

5.2.2.柱温箱漏液传感器的功能检查

打开电源ON，屏幕显示初始屏幕，运行LEAKSENSORTEST功能，如果屏幕显示SENSORGOOD，传感器通过测试。

可接受的标准为屏幕必须显示“SENSORGOOD”。

..泵的检查

.1.ROM、RAM自检：

检查内存功能是否正常。

检查步骤：

打开电源开关。

按VP四次以显示VALIDATION，按func三次以显示MEMORYCHECK，按enter,检查内存MEMORYCHECK。

检查评判标准：

屏幕显示ROMOK/RAMOK。

.2.固件版本检查：

检查固件的版本。

检查步骤：

从初始屏幕按VP两次，出现PRODUCTINFO；按func两次显示版本号，显示软件版本号S/WIDP.5-32。

检查评判标准：

出现版本号。

版式本号与所管理的号码相同。

.3.显示、LED测试：

检查显示和LED的操作。

操作步骤：

打开电源开关，检查打开电源后屏幕上的所有点和键盘上的LED都亮。

检查评判标准：

屏幕上的所有点和LED都亮。

.4.流速的控制参数：

检查控制流速的参数。

检查步骤：

从初始屏幕按VP五次，出现CALIBRATION，按func一次以显示InputPASSWORD，输入00000并按enter，输入密码后出现FLOWCOMPFACT，记下FLOWCOMPFACT（ALPHA）R的显示值，设定流速补偿参数（ALPHA）；按func一次，记下显示的两个PRESSCOMPFACT值（1：

PRS-1和5：

PRS-5），设定压力传感器灵敏度补偿因子（PRESSCOMPFACT）。

检查评判标准：

出现参数。

.5.送液稳定性测试：

检查压力波动幅度没有超出额定值。

检查步骤：

将电阻管连接到泵出样口，而不是HPLC色谱柱；在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相；重复按func直到出现PARAMETER并按enter；重复按func或back直到出现COMP，记下当前值。

按0.45enter将值设定为0.45。

按CE两次返回初始屏幕，按VP四次以显示VALIDATION，按func四次以显示PULSECHECK，按0.3enter将CRITERIA设定为0.30MPa，按enter，泵以1ml/min的速度运行，测定在一分钟后开始。

在测量过程中，显示设定流速、测量压力、压力波动和剩余时间。

测量后，显示压力波动幅度的测量值和通过/失败状态。

检查脉动PULSECHECK，按enter，测量结果和日期保存在仪态器的内存中。

检查评判标准：

压力波动幅度的测量结果不超过0.30MPa。

检查后重设：

重复按func直到出现PAEAMETER并按enter，重复按func或back直到出现COMP。

记下当前值，改回检查的第4步中记录的值。

.6.压力限制器测试：

检查压力限制器在压力上限或压力下限时是否操作正常。

检查步骤：

将电阻管连接到泵出样口，而不是HPLC色谱柱。

在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相，打开电源开关，出现初始屏幕，按func激活流速的设定。

按1和enter将流速设定为1ml/min，按func两次以激活P.MAX的输入。

按20和enter将P.MAX设定为20.0MPa。

例如，当实际压力值是10.0MPa时，将P.MAX设定为11.0MPa,P.MIN为9.0MPa。

将流速更改为1.5ml/min并观察压力，当实际压力超过所设定的P.MAX值时，应该出现ERRORP-MAX；按CE清除ERRORP-MAX，将流速重设为1ml/min，并再次按下pump重新开始送液，当压力稳定后，将流速更改为0.5ml/min。

实际压力应该下跌至低于所设定的P.MIN值，并在几秒钟后出现ERRORP-MIN。

按CE清除ERRORP-MIN。

检查评判标准：

出现ERRORP-MAX和ERRORP-MIN。

.7.漏液传感器测试：

检查漏液传感器的操作。

检查步骤：

从初始屏幕按VP四次，出VALIDATION，按back一次以显示LEAKSENSORTEST，检查漏液传感器LEAKSENSORTEST，用充满水的注射器弄湿漏液传感器底部的湿度传感器，约10秒钟左右，按enter显示测试结果。

检查评判标准：

屏幕上出现SENSORGOOD。

（注意：

在弄湿漏液传感器后，清完全擦干漏液托盘上的水。

.8.流速准确度测试：

使用容量瓶检查流速准确度。

检查步骤：

将电阻管连接到泵出样口，而不是HPLC色谱柱。

在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相，在初始屏幕上按func以激活流速的设定，按1和enter将流速设定为1ml/min，重复按func直到出现PARAMETER并按enter，重得按func直到出现COMP，然后记录下当前的COMP值。

按0.45和enter将COMP设定0.45。

按pump送液至少5分钟。

在送液过程中，泵指示灯亮；从初始屏幕按VP四次，出现VALIDATION，按func五次直到出现FLOWCHECK并按enter。

在准备好进行测量时再按enter，将管路的末端插入容量瓶或量筒，然后开始测量。

对于容量瓶：

在第一滴水一开始现在进入容量瓶的管路末端就开始计时。

在注入5ml水时停止计时表。

对于量筒：

使管路的末端进入量筒并接触筒壁，确定量筒内一个合适的水平面，在该位置达到确定的开始平面时开始计时，在注入5ml水时停止计时表。

（注意：

在整个测量过程中，务必使管路的末端保持在量筒的水面以上。

）通过数字键盘输入已经测量的时间并按enter，显示流速准确度（%）和通过/失败状态。

检查评判标准：

±2.00%以内。

检查后重设：

重复按func直到出现PARAMETER，然后按enter。

重复按func或back直到出现COMP，改回第6步中记录的值。

.9.高压梯度系统的梯度浓度准确度测试：

检查高压梯度系统的梯度浓度准确度。

检查步骤：

在混合器出样口（1.7ml）和检测器之间连接电阻管，对于流动相，准备纯化水作为流动相A，准备咖啡因溶液（10mg/L）作为流动相B（各500ml）。

流动相脱气，打开排液阀并按泵A和B的purge以更换每个泵的流路，按如下所述设定送液条件，并按pump开始送液至检测器基线稳定。

总流速=3ml/min,流动相B浓度=50%；按如下所述设定控制设备的参数，并送液至基线稳定：

流动相B的浓度0.0%

UV检测器波长272nm

RESPONSE3（0.5sec）

AUXRANGE2（1.0AU/V）

LCsolution时自动设定强度轴

输入表中给出的时间程序，该程序将产生如右图所示的操作模式。

使用了系统控制器或LC工作站，应从每个菜单都选择时间程序建立该程序。

TIMEFUNCVALUE

10.00B.CONC

30.00STOP

VP功能的GETESTPROGRAM能够将时间程序自动复制到指定的文件。

设定时时间程序以检查梯度模式的浓度准确度GETESTPROGRAM。

将基线归零，开始进行梯度时间程序。

在下列浓度位置记录吸光度级别，并用该数据计算实际的浓度。

（注意：

在基线稳定时测定信号级别）

计算方法：

10%的实际浓度

=

50%的实际浓度

=

90%的实际浓度

=

如果高压梯度系统使用3种液体，那么用流动相C（泵C）替换流动相B（泵B），并同样测试。

检查评判标准：

设定值的±1.0%以内

.系统认证：

LC系统由许多单独的组件组成，系统认证是为了确认每一组件的功能及整个系统的性能，在安装时进行系统认证，之后应该定期进行。

5.3.1.等度LC系统认证：

进行分析以获取每次峰的保留时间和峰面积。

检查获取的数据以检查系统可重现性。

可重现的数据用于认证系统。

通常，接受认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统控制器和数据处理机（或色谱工作站）。

5.3.1.

5.3.1.检查LC系统中的所有缆线连接是否正常。

5.3.1..检查LC系统管路

并短于300mm，使色谱柱外的死体积尽可能小。

5.3.1.1.

在清洗流路前，从系统中取下色谱柱，并使用二通连接色谱柱的进样口和出样口，对于新系统首先用异丙醇清流行流路，然后用水清洗，在每种情况下，使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。

对于使用水溶液与有机溶剂的混合剂，或水与易溶于水的有机溶剂（如甲醇、乙腈）作为流动相系统用水清洗流路。

使水以2ml/min的流速流动10分钟。

5.3.1.1.4.清洗完成后，将流动相（水与甲醇的混合剂（3/2，V/V）注入贮液瓶，然后将色谱柱重新连接到LC系统。

5.3.1.

5.3.1..将送液流速设定为1ml/min，色谱柱柱温箱的温度设定为40℃。

5.3.1..按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven，开始送液和温度调节。

5.3.1..设定检测器参数（272nm），进样器参数（进样体积），数据处理参数。

5.3.1..监视基线，基线平稳后，按检测器zero键，然后注入20ul流动相并确认没有观察到峰。

5.3.1..注入测试标准样（20mg/L的咖啡因溶液）6次，并分析获取的数据。

使用手动进样器时，样品的进样量应为定量管体积的5倍。

5.3.1..从6次分析得出峰数据中，计算出保留时间和峰面积和相对标准偏差

RSD=

其中：

SD为标准偏差，X为平均值

5.3.1.3.检查评判标准：

保留时间的RSD绝不能超过0.5%；峰面积的RSD绝不能超过1.0%；峰高的RSD绝不能超过1.0%。

5.3.2.认证梯度LC系统

进行分析以获取每次峰的保留时间和峰面积。

检查获取的数据以检查系统可重现性。

可重现的数据用于认证系统。

通常，接受认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统控制器和数据处理机（或色谱工作站）。

5.3.2

5.3.2.检查LC系统中的所有缆线连接是否正常。

5.3.2

并短于300mm，使色谱柱外的死体积尽可能小。

5.3.2.1.3.使用下面一种方法清洗系统流路。

在清洗流路前，从系统中取下色谱柱，并使用二通连接色谱柱的进样口和出样口，对于新系统首先用异丙醇清流行流路，然后用水清洗，在每种情况下，使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。

对于使用水溶液与有机溶剂的混合剂，或水与易溶于水的有机溶剂（如甲醇、乙腈）作为流动相系统用水清洗流路。

使水以2ml/min的流速流动10分钟。

5.3.2.1.4.清洗完成后，将流动相（A：

水，B：

乙腈）注入贮液瓶，然后将色谱柱重新连接到LC系统。

5.3.2.2.认证步骤

5.3.2.2.1将送液流速设定为1ml/min，流动相B的浓度参数设定为50%；色谱柱柱温箱的温度设定为40℃。

梯度洗脱时间程序如下：

TIMEFUNCVALUE

0.00B.CONC50

5.00B.CONC100

6.00B.CONC100

6.01B.CONC50

12.00STOP

5.3.2.按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven，开始送液和温度调节，检查流经检测器出样品管路的液体流，确认所有连接处都没有漏液。

5.3.2.设定检测器参数（254nm），进样器参数（进样体积），数据处理参数。

5.3.2.监视基线，基线平稳后，按检测器zero键，然后注入20ul流动相并确认第二次没有观察到峰。

5.3.2.注入测试标准样（含1mg/100ml的吡啶和1mg/100ml的蒽乙腈溶液）6次，并分析获取的数据。

5.3.2.从6次分析得出峰数据中，计算出保留时间和峰面积和相对标准偏差

RSD=

其中：

SD为标准偏差，X为平均值

5.3.1.3.检查评判标准：

保留时间的RSD绝不能超过0.5%；峰面积RSD绝不能超过1.0%；峰高的RSD绝不能超过1.0%。

.如果系统不能达到系统认证的标准，或某一硬件没能达到硬件认证标准，要进行如下处理：

5.4.1.检查是否有达到其使用寿命的消耗件，如果必要，检查并且更换这些消耗件。

5.4.2.排除故障

可能是由于一些小问题如气泡导致系统不能达到认证标准，排除故障的目的就是检查这类故障，并且采取适当措施排除所发现的故障。

3.如果不能确定原因民，请与岛津公司当地办事处或代理商联系。

6.校正

6.1.检测器的波长准确度度校正

测量由水银灯和氘灯产生的发射谱线光谱中的峰波长，并对波长进行校正以将波长变动最小化。

.用泵传送水、甲醇或乙腈通过流通池，或用注射器和注射器适配器将三种液体之一注入流通池。

确保流通池中没有气泡，然后再流通池装入检测器中。

.按CE直到显示初始屏幕，重复按VP直到显示CALIBRATION，按func出现密码输入屏幕，输入密码（00000），重复按func直到显示WAVECALIB，按enter，波长准确度校正自动运行。

.校正结束后屏幕上出现Calibrated，确认校正已经成功完成。

.吸光度准确度校正

校正吸光度准确度，以便最小化屏幕上显示的吸光度值（当存在测试的吸光度校正过滤器时）与过滤器的吸光度值之间的差异。

.重复按CE直到显示初始屏幕，设定仪器为单波长模式，按func，出现PARAMETER，重复按func直到显示LAMP，按1，这将打开氘灯。

.重复按CE直到显示CALIBRATION，按func，出现密码输入屏幕，输入密码（00000），重复按func直到显示ABSCALIB。

.ABSCALIBSetFILHOLDER和ABSCALIBEntertoCalib将交替显示，取下标准流通池，将过滤器固定座安装到检测器上，并用盖盖住过滤器固定座。

.按enter，大约10秒后，ABSCALIBInsertFilter和ABSCALIBInputClibValue将交替显示，插入吸光度校正过滤器并用盖盖住。

.输入245nm处的6nm带宽吸光度值0.***，该值印在吸光度过滤器附带的合格证明上，按enter，2分钟后Calibrating标识更改为Calibrated，校正完成。

.遵循以下步骤确认校正已经完成：

从过滤器固定座下取下吸光度校正过滤器，并装上过滤器固定座盖，设定波长245nm,按CE两次返回初始屏幕，按zero,确保显屏幕上显示的吸光度是0；插入吸光度校正过滤器，然后装上盖子，记录初始屏幕上显示的吸光度值；确认显示的吸光度值和245nm处6nm带宽吸光度值间的差异，印制在吸光度校正过滤器的合格证明上。

.吸光度线性度校正

当充满具有极高吸光度溶液的流通池，测量传送通过流通池的光强度并更正吸光度线性度。

.设定检测器为单波长模式，波长为272nm，AUXRANGE为4（4AU/FS），RESPONSE为10（2sec.）并且LAMP为1（氘灯）.

.用泵传送甲醇通过流通池，确保基线已稳定，并按zero，重复按CE直到显示初始屏幕，重复按VP直到显示CALIBRATION。

.按func出现密码输入屏幕，输入密码（00000），重复按func直到显示LINERCALIB，按1，然后按enter，显示Calibrated后，按func或back以更改显示。

.重复按func或back直到显示LINERCALIB，注入咖啡因+甲醇溶液（浓度：

90mg/L）到流通池中，使用工具为注射器和注射器适配器，按2，然后按enter。

.屏幕上出现Calibrated后，关闭电源开关并再次打开，检测器重新启动并且补偿开始生效。

.传送甲醇通过流通池，完全清洗掉咖啡因+甲醇溶液，确认校正已经完成。

7验证结果评定与结论

QC负责收集各项验证、试验结果记录，起草验证报告，报验证小组。

验证小组负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论。

8.验证周期及拟订再验证项目

质量部负责根据设备仪器情况，确定再验证周期项目及周期（6个月或1年），报验证小组审核。

如仪器因出现严重故障而更换零部件，则需要进行再验证。

验证内容包括：

以上内容。

LC-20A高效液相色谱仪

验证记录目录

附表1：

仪器安装条件检查记录

附表2：

硬件检查记录

附表3：

检测器校正记录

附表4：

等度LC系统认证记录

附表5：

梯度LC系统认证记录

附表1

仪器安装条件检查记录

设备名称

型号

安装条件要求

实际安装条件

温度

4～35℃

湿度

45-85%

电

220±10V，50HZ

其它条件

1.充分通风，附近无火源（当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时，房间应充分通风；当使用易燃溶液时，严禁室内使用明火或其它火源）；

-35℃，日温度变化要小（不超过2℃）；

5～85%，无灰尘及腐蚀性气体；

4.没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调。

检查人

复核人

检查日期

年月日

附表2

硬件件认证检查记录

检查项目

检查评判标准

结果

结论

柱温箱温度准确度检查

屏幕如显示“ACCURACYGOOD”表示结果满足要求。

柱温箱漏液传感器的功能检查

可接受的标准为屏幕必须显示“SENSORGOOD”。

泵的ROM、RAM自检

屏幕显示ROMOK/RAMOK。

泵的.固件版本检查：

出现版本号。

版式本号与所管理的号码相同。

泵的显示、LED测试

屏幕上的所有点和LED都亮

泵的流速的控制参数

出现参数。

泵的送液稳定性测试

压力波动幅度的测量结果不超过0.30MPa。

泵的压力限制器测试

出现ERRORP-MAX和ERRORP-MIN。

泵的漏液传感器测试

屏幕上出现SENSORGOOD

泵的流速准确度测试

±2.00%以内。

泵的高压梯度系统的梯度浓度准确度测试

设定值的±1.0%以内

检查人

复核人

检查日期

年月日

附表3

SPD-20A检测器的校正记录

设备名称

型号

温度：

湿度：

波长准确度校正

吸光度准确度度校正

吸光度线性度校正

检查人

复核人

检查日期

年月日

附表4

等度LC系统认证记录

设备名称

型号

测试项目

标准规定

实测结果

结论

保留时间的RSD

≤0.5%

峰面积的RSD

1.0%

峰高的RSD

1.0%

检查人

复核人

检查日期

年月日

附表4

梯度LC系统认证记录

设备名称

型号

测试项目

标准规定

实测结果

结论

保留时间的RSD

≤0.5%

峰面积的RSD

1.0%

峰高的RSD

1.0%

检查人

复核人

检查日期

年月日