LC20ATvp高效液相色谱仪验证方案.docx
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LC20ATvp高效液相色谱仪验证方案
LC-20A高效液相色谱仪
验证方案
1.主题内容与适用范围
本方案规定了LC-20A高效液相色谱仪验证的内容、过程和方法。
本方案适用于LC-20A高效液相色谱仪验证。
2.相关文件
《岛津LC-20A高效液相色谱仪使用说明书》
《中国药典》2010年版二部
《药品检验仪器操作规程》2010年版
岛津LC-20A高效液相色谱仪的操作及维护保养SOP编号:
EMO-R35
3.验证目的
为确认LC-20A高效液相色谱仪能够达到仪器性能指标,能符合检验产品需求,特制订本验证方案,对高效液相色谱仪进行验证。
4.职责
验证小组成员
工作内容
组长
解斌
负责验证的实施、组织及协调工作
成员
熊仁清
负责按验证计划组织实施验证工作
熊仁清
负责验证方案、验证报告编写及实施工作
熊仁清
负责验证的实施及不符合项目的整改工作
动力设备部
负责验证中涉及计量器具的校验工作
质量管理部
负责验证质量检验项目的检验、出具报告工作
5.验证内容与方法
.预确认
.设备基本情况
本仪器由日本岛津公司生产,由2台LC-20AT泵、1台SPD-20A检测器、1台CBM-20A控制器,1台CTO-10ASvp柱温箱,岛津LCsolution双通道色谱工作站组成。
主要用于各种进厂原料、成品药的含量测定及新方法的开发及其验证。
设备名称:
高效液相色谱仪
型号:
LC-20A
生产厂家:
日本岛津公司
安装日期:
2008.4
使用部门:
研究开发中心
.安装确认
项目要求:
充分通风,附近无火源(当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时,房间应充分通风;当使用易燃溶液时,严禁室内使用明火或其它火源);
安装场所环境温度4-35℃,日温度变化要小(不超过2℃);
湿度保持在45~85%,无灰尘及腐蚀性气体;
没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调;
电源功率220±10V,50HZ;
供电电源应有良好的接地;
线路连接各接口连接正确;
管线连接各接口连接正确。
5.2.硬件认证
硬件认证检查LC系统是否运转正常,仪器是否适用于准备进行的分析,在LC安装、操作和性能鉴定过中进行认证,此后还要定期检查,随着时间的推移,由于易损部件的磨损,LC系统的性能会下降。
因此,从系统安装时起直到系统报废时止,必须定期进行硬件认证。
.柱温箱温度准确度检查
检查温度是否控制在设定的温度,特别是,测量柱箱内部热传感器附近的温度,并与设定温度相比较。
在没有特殊要求下,设定温度使用50℃。
.1.设备连接:
使用热电偶固定架将热传感器(热电偶)固定在柱箱内,将热传感器(热电偶)的导线连接到数字万用表的输入端。
.2.检查过程:
打开电源开关,显示初始屏幕,按func键,屏幕显示SETTEMP,使用▲/▼键设定温度为50℃,按oven键,启动温度控制,当ready指示灯亮后,等待10min,运行TEMPERAGURETEST。
可以接收的标准(温度控制精度为Dt≤℃(设定温度为50℃))。
为了检查温度,输入由数字万用表测量的温度,观察显示结果,屏幕如显示“ACCURACYGOOD”表示结果满足要求。
如果显示结果不满足要求,需要进行纠正设定温度错误,具体操作如下:
重复按VP键直至屏幕显示CALIBRATION(校正功能VP组);重复按func键直至屏幕显示TEMPCAL-IB(此为校正设定温度);输入作为校正温度的T值,该值显示在上述温度准确度检查过程中运行TEMPRATURETEST功能后所显示的屏幕上;重复按func键直至屏幕显示REF.TEMPCALIB(用于设定温度校正参数);使用▲/▼键设定一温度数值作为校正参数,该值是用热传感器测量的数值,按▲键以℃步长升高校正值,按▼键以℃步长降低校正值;按Enter键确认新的设定值,当电源关闭后,此值保留在内存中。
5.2.2.柱温箱漏液传感器的功能检查
打开电源ON,屏幕显示初始屏幕,运行LEAKSENSORTEST功能,如果屏幕显示SENSORGOOD,传感器通过测试。
可接受的标准为屏幕必须显示“SENSORGOOD”。
..泵的检查
.1.ROM、RAM自检:
检查内存功能是否正常。
检查步骤:
打开电源开关。
按VP四次以显示VALIDATION,按func三次以显示MEMORYCHECK,按enter,检查内存MEMORYCHECK。
检查评判标准:
屏幕显示ROMOK/RAMOK。
.2.固件版本检查:
检查固件的版本。
检查步骤:
从初始屏幕按VP两次,出现PRODUCTINFO;按func两次显示版本号,显示软件版本号S/WIDP.5-32。
检查评判标准:
出现版本号。
版式本号与所管理的号码相同。
.3.显示、LED测试:
检查显示和LED的操作。
操作步骤:
打开电源开关,检查打开电源后屏幕上的所有点和键盘上的LED都亮。
检查评判标准:
屏幕上的所有点和LED都亮。
.4.流速的控制参数:
检查控制流速的参数。
检查步骤:
从初始屏幕按VP五次,出现CALIBRATION,按func一次以显示InputPASSWORD,输入00000并按enter,输入密码后出现FLOWCOMPFACT,记下FLOWCOMPFACT(ALPHA)R的显示值,设定流速补偿参数(ALPHA);按func一次,记下显示的两个PRESSCOMPFACT值(1:
PRS-1和5:
PRS-5),设定压力传感器灵敏度补偿因子(PRESSCOMPFACT)。
检查评判标准:
出现参数。
.5.送液稳定性测试:
检查压力波动幅度没有超出额定值。
检查步骤:
将电阻管连接到泵出样口,而不是HPLC色谱柱;在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相;重复按func直到出现PARAMETER并按enter;重复按func或back直到出现COMP,记下当前值。
按0.45enter将值设定为0.45。
按CE两次返回初始屏幕,按VP四次以显示VALIDATION,按func四次以显示PULSECHECK,按0.3enter将CRITERIA设定为0.30MPa,按enter,泵以1ml/min的速度运行,测定在一分钟后开始。
在测量过程中,显示设定流速、测量压力、压力波动和剩余时间。
测量后,显示压力波动幅度的测量值和通过/失败状态。
检查脉动PULSECHECK,按enter,测量结果和日期保存在仪态器的内存中。
检查评判标准:
压力波动幅度的测量结果不超过0.30MPa。
检查后重设:
重复按func直到出现PAEAMETER并按enter,重复按func或back直到出现COMP。
记下当前值,改回检查的第4步中记录的值。
.6.压力限制器测试:
检查压力限制器在压力上限或压力下限时是否操作正常。
检查步骤:
将电阻管连接到泵出样口,而不是HPLC色谱柱。
在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相,打开电源开关,出现初始屏幕,按func激活流速的设定。
按1和enter将流速设定为1ml/min,按func两次以激活P.MAX的输入。
按20和enter将P.MAX设定为20.0MPa。
例如,当实际压力值是10.0MPa时,将P.MAX设定为11.0MPa,P.MIN为9.0MPa。
将流速更改为1.5ml/min并观察压力,当实际压力超过所设定的P.MAX值时,应该出现ERRORP-MAX;按CE清除ERRORP-MAX,将流速重设为1ml/min,并再次按下pump重新开始送液,当压力稳定后,将流速更改为0.5ml/min。
实际压力应该下跌至低于所设定的P.MIN值,并在几秒钟后出现ERRORP-MIN。
按CE清除ERRORP-MIN。
检查评判标准:
出现ERRORP-MAX和ERRORP-MIN。
.7.漏液传感器测试:
检查漏液传感器的操作。
检查步骤:
从初始屏幕按VP四次,出VALIDATION,按back一次以显示LEAKSENSORTEST,检查漏液传感器LEAKSENSORTEST,用充满水的注射器弄湿漏液传感器底部的湿度传感器,约10秒钟左右,按enter显示测试结果。
检查评判标准:
屏幕上出现SENSORGOOD。
(注意:
在弄湿漏液传感器后,清完全擦干漏液托盘上的水。
.8.流速准确度测试:
使用容量瓶检查流速准确度。
检查步骤:
将电阻管连接到泵出样口,而不是HPLC色谱柱。
在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相,在初始屏幕上按func以激活流速的设定,按1和enter将流速设定为1ml/min,重复按func直到出现PARAMETER并按enter,重得按func直到出现COMP,然后记录下当前的COMP值。
按0.45和enter将COMP设定0.45。
按pump送液至少5分钟。
在送液过程中,泵指示灯亮;从初始屏幕按VP四次,出现VALIDATION,按func五次直到出现FLOWCHECK并按enter。
在准备好进行测量时再按enter,将管路的末端插入容量瓶或量筒,然后开始测量。
对于容量瓶:
在第一滴水一开始现在进入容量瓶的管路末端就开始计时。
在注入5ml水时停止计时表。
对于量筒:
使管路的末端进入量筒并接触筒壁,确定量筒内一个合适的水平面,在该位置达到确定的开始平面时开始计时,在注入5ml水时停止计时表。
(注意:
在整个测量过程中,务必使管路的末端保持在量筒的水面以上。
)通过数字键盘输入已经测量的时间并按enter,显示流速准确度(%)和通过/失败状态。
检查评判标准:
±2.00%以内。
检查后重设:
重复按func直到出现PARAMETER,然后按enter。
重复按func或back直到出现COMP,改回第6步中记录的值。
.9.高压梯度系统的梯度浓度准确度测试:
检查高压梯度系统的梯度浓度准确度。
检查步骤:
在混合器出样口(1.7ml)和检测器之间连接电阻管,对于流动相,准备纯化水作为流动相A,准备咖啡因溶液(10mg/L)作为流动相B(各500ml)。
流动相脱气,打开排液阀并按泵A和B的purge以更换每个泵的流路,按如下所述设定送液条件,并按pump开始送液至检测器基线稳定。
总流速=3ml/min,流动相B浓度=50%;按如下所述设定控制设备的参数,并送液至基线稳定:
流动相B的浓度0.0%
UV检测器波长272nm
RESPONSE3(0.5sec)
AUXRANGE2(1.0AU/V)
LCsolution时自动设定强度轴
输入表中给出的时间程序,该程序将产生如右图所示的操作模式。
使用了系统控制器或LC工作站,应从每个菜单都选择时间程序建立该程序。
TIMEFUNCVALUE
10.00B.CONC
30.00STOP
VP功能的GETESTPROGRAM能够将时间程序自动复制到指定的文件。
设定时时间程序以检查梯度模式的浓度准确度GETESTPROGRAM。
将基线归零,开始进行梯度时间程序。
在下列浓度位置记录吸光度级别,并用该数据计算实际的浓度。
(注意:
在基线稳定时测定信号级别)
计算方法:
10%的实际浓度
=
50%的实际浓度
=
90%的实际浓度
=
如果高压梯度系统使用3种液体,那么用流动相C(泵C)替换流动相B(泵B),并同样测试。
检查评判标准:
设定值的±1.0%以内
.系统认证:
LC系统由许多单独的组件组成,系统认证是为了确认每一组件的功能及整个系统的性能,在安装时进行系统认证,之后应该定期进行。
5.3.1.等度LC系统认证:
进行分析以获取每次峰的保留时间和峰面积。
检查获取的数据以检查系统可重现性。
可重现的数据用于认证系统。
通常,接受认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统控制器和数据处理机(或色谱工作站)。
5.3.1.
5.3.1.检查LC系统中的所有缆线连接是否正常。
5.3.1..检查LC系统管路
并短于300mm,使色谱柱外的死体积尽可能小。
5.3.1.1.
在清洗流路前,从系统中取下色谱柱,并使用二通连接色谱柱的进样口和出样口,对于新系统首先用异丙醇清流行流路,然后用水清洗,在每种情况下,使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。
对于使用水溶液与有机溶剂的混合剂,或水与易溶于水的有机溶剂(如甲醇、乙腈)作为流动相系统用水清洗流路。
使水以2ml/min的流速流动10分钟。
5.3.1.1.4.清洗完成后,将流动相(水与甲醇的混合剂(3/2,V/V)注入贮液瓶,然后将色谱柱重新连接到LC系统。
5.3.1.
5.3.1..将送液流速设定为1ml/min,色谱柱柱温箱的温度设定为40℃。
5.3.1..按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven,开始送液和温度调节。
5.3.1..设定检测器参数(272nm),进样器参数(进样体积),数据处理参数。
5.3.1..监视基线,基线平稳后,按检测器zero键,然后注入20ul流动相并确认没有观察到峰。
5.3.1..注入测试标准样(20mg/L的咖啡因溶液)6次,并分析获取的数据。
使用手动进样器时,样品的进样量应为定量管体积的5倍。
5.3.1..从6次分析得出峰数据中,计算出保留时间和峰面积和相对标准偏差
RSD=
其中:
SD为标准偏差,X为平均值
5.3.1.3.检查评判标准:
保留时间的RSD绝不能超过0.5%;峰面积的RSD绝不能超过1.0%;峰高的RSD绝不能超过1.0%。
5.3.2.认证梯度LC系统
进行分析以获取每次峰的保留时间和峰面积。
检查获取的数据以检查系统可重现性。
可重现的数据用于认证系统。
通常,接受认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统控制器和数据处理机(或色谱工作站)。
5.3.2
5.3.2.检查LC系统中的所有缆线连接是否正常。
5.3.2
并短于300mm,使色谱柱外的死体积尽可能小。
5.3.2.1.3.使用下面一种方法清洗系统流路。
在清洗流路前,从系统中取下色谱柱,并使用二通连接色谱柱的进样口和出样口,对于新系统首先用异丙醇清流行流路,然后用水清洗,在每种情况下,使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。
对于使用水溶液与有机溶剂的混合剂,或水与易溶于水的有机溶剂(如甲醇、乙腈)作为流动相系统用水清洗流路。
使水以2ml/min的流速流动10分钟。
5.3.2.1.4.清洗完成后,将流动相(A:
水,B:
乙腈)注入贮液瓶,然后将色谱柱重新连接到LC系统。
5.3.2.2.认证步骤
5.3.2.2.1将送液流速设定为1ml/min,流动相B的浓度参数设定为50%;色谱柱柱温箱的温度设定为40℃。
梯度洗脱时间程序如下:
TIMEFUNCVALUE
0.00B.CONC50
5.00B.CONC100
6.00B.CONC100
6.01B.CONC50
12.00STOP
5.3.2.按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven,开始送液和温度调节,检查流经检测器出样品管路的液体流,确认所有连接处都没有漏液。
5.3.2.设定检测器参数(254nm),进样器参数(进样体积),数据处理参数。
5.3.2.监视基线,基线平稳后,按检测器zero键,然后注入20ul流动相并确认第二次没有观察到峰。
5.3.2.注入测试标准样(含1mg/100ml的吡啶和1mg/100ml的蒽乙腈溶液)6次,并分析获取的数据。
5.3.2.从6次分析得出峰数据中,计算出保留时间和峰面积和相对标准偏差
RSD=
其中:
SD为标准偏差,X为平均值
5.3.1.3.检查评判标准:
保留时间的RSD绝不能超过0.5%;峰面积RSD绝不能超过1.0%;峰高的RSD绝不能超过1.0%。
.如果系统不能达到系统认证的标准,或某一硬件没能达到硬件认证标准,要进行如下处理:
5.4.1.检查是否有达到其使用寿命的消耗件,如果必要,检查并且更换这些消耗件。
5.4.2.排除故障
可能是由于一些小问题如气泡导致系统不能达到认证标准,排除故障的目的就是检查这类故障,并且采取适当措施排除所发现的故障。
3.如果不能确定原因民,请与岛津公司当地办事处或代理商联系。
6.校正
6.1.检测器的波长准确度度校正
测量由水银灯和氘灯产生的发射谱线光谱中的峰波长,并对波长进行校正以将波长变动最小化。
.用泵传送水、甲醇或乙腈通过流通池,或用注射器和注射器适配器将三种液体之一注入流通池。
确保流通池中没有气泡,然后再流通池装入检测器中。
.按CE直到显示初始屏幕,重复按VP直到显示CALIBRATION,按func出现密码输入屏幕,输入密码(00000),重复按func直到显示WAVECALIB,按enter,波长准确度校正自动运行。
.校正结束后屏幕上出现Calibrated,确认校正已经成功完成。
.吸光度准确度校正
校正吸光度准确度,以便最小化屏幕上显示的吸光度值(当存在测试的吸光度校正过滤器时)与过滤器的吸光度值之间的差异。
.重复按CE直到显示初始屏幕,设定仪器为单波长模式,按func,出现PARAMETER,重复按func直到显示LAMP,按1,这将打开氘灯。
.重复按CE直到显示CALIBRATION,按func,出现密码输入屏幕,输入密码(00000),重复按func直到显示ABSCALIB。
.ABSCALIBSetFILHOLDER和ABSCALIBEntertoCalib将交替显示,取下标准流通池,将过滤器固定座安装到检测器上,并用盖盖住过滤器固定座。
.按enter,大约10秒后,ABSCALIBInsertFilter和ABSCALIBInputClibValue将交替显示,插入吸光度校正过滤器并用盖盖住。
.输入245nm处的6nm带宽吸光度值0.***,该值印在吸光度过滤器附带的合格证明上,按enter,2分钟后Calibrating标识更改为Calibrated,校正完成。
.遵循以下步骤确认校正已经完成:
从过滤器固定座下取下吸光度校正过滤器,并装上过滤器固定座盖,设定波长245nm,按CE两次返回初始屏幕,按zero,确保显屏幕上显示的吸光度是0;插入吸光度校正过滤器,然后装上盖子,记录初始屏幕上显示的吸光度值;确认显示的吸光度值和245nm处6nm带宽吸光度值间的差异,印制在吸光度校正过滤器的合格证明上。
.吸光度线性度校正
当充满具有极高吸光度溶液的流通池,测量传送通过流通池的光强度并更正吸光度线性度。
.设定检测器为单波长模式,波长为272nm,AUXRANGE为4(4AU/FS),RESPONSE为10(2sec.)并且LAMP为1(氘灯).
.用泵传送甲醇通过流通池,确保基线已稳定,并按zero,重复按CE直到显示初始屏幕,重复按VP直到显示CALIBRATION。
.按func出现密码输入屏幕,输入密码(00000),重复按func直到显示LINERCALIB,按1,然后按enter,显示Calibrated后,按func或back以更改显示。
.重复按func或back直到显示LINERCALIB,注入咖啡因+甲醇溶液(浓度:
90mg/L)到流通池中,使用工具为注射器和注射器适配器,按2,然后按enter。
.屏幕上出现Calibrated后,关闭电源开关并再次打开,检测器重新启动并且补偿开始生效。
.传送甲醇通过流通池,完全清洗掉咖啡因+甲醇溶液,确认校正已经完成。
7验证结果评定与结论
QC负责收集各项验证、试验结果记录,起草验证报告,报验证小组。
验证小组负责对验证结果进行综合评审,做出验证结论。
8.验证周期及拟订再验证项目
质量部负责根据设备仪器情况,确定再验证周期项目及周期(6个月或1年),报验证小组审核。
如仪器因出现严重故障而更换零部件,则需要进行再验证。
验证内容包括:
以上内容。
LC-20A高效液相色谱仪
验证记录目录
附表1:
仪器安装条件检查记录
附表2:
硬件检查记录
附表3:
检测器校正记录
附表4:
等度LC系统认证记录
附表5:
梯度LC系统认证记录
附表1
仪器安装条件检查记录
设备名称
型号
安装条件要求
实际安装条件
温度
4~35℃
湿度
45-85%
电
220±10V,50HZ
其它条件
1.充分通风,附近无火源(当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时,房间应充分通风;当使用易燃溶液时,严禁室内使用明火或其它火源);
-35℃,日温度变化要小(不超过2℃);
5~85%,无灰尘及腐蚀性气体;
4.没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调。
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表2
硬件件认证检查记录
检查项目
检查评判标准
结果
结论
柱温箱温度准确度检查
屏幕如显示“ACCURACYGOOD”表示结果满足要求。
柱温箱漏液传感器的功能检查
可接受的标准为屏幕必须显示“SENSORGOOD”。
泵的ROM、RAM自检
屏幕显示ROMOK/RAMOK。
泵的.固件版本检查:
出现版本号。
版式本号与所管理的号码相同。
泵的显示、LED测试
屏幕上的所有点和LED都亮
泵的流速的控制参数
出现参数。
泵的送液稳定性测试
压力波动幅度的测量结果不超过0.30MPa。
泵的压力限制器测试
出现ERRORP-MAX和ERRORP-MIN。
泵的漏液传感器测试
屏幕上出现SENSORGOOD
泵的流速准确度测试
±2.00%以内。
泵的高压梯度系统的梯度浓度准确度测试
设定值的±1.0%以内
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表3
SPD-20A检测器的校正记录
设备名称
型号
温度:
湿度:
波长准确度校正
吸光度准确度度校正
吸光度线性度校正
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表4
等度LC系统认证记录
设备名称
型号
测试项目
标准规定
实测结果
结论
保留时间的RSD
≤0.5%
峰面积的RSD
1.0%
峰高的RSD
1.0%
检查人
复核人
检查日期
年月日
附表4
梯度LC系统认证记录
设备名称
型号
测试项目
标准规定
实测结果
结论
保留时间的RSD
≤0.5%
峰面积的RSD
1.0%
峰高的RSD
1.0%
检查人
复核人
检查日期
年月日