药物分析经典问题.docx

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药物分析经典问题

药物分析经典问题

1.超临界流体色谱法的原理和发展情况超临界流体是指其温

度和压力均超过自身临界温度和临界压力时的流体。

此时的流体进入临界状态，体系的性质均一，不再分为气相和液相。

超临界流体具有粘度小、密度、扩散系数、溶剂化能力等性质随温度和压力变化十分敏感等特征，粘度和扩散系数接近气体，而密度和溶剂化能力接近液体。

超临界流体色谱（SFC）是以超临界流体为流动相，以固体吸附剂（硅胶、氧化铝）或键合在载体（或毛细管壁）上的高聚物为固定相的色谱分离技术。

与传统的气相液相色谱相比其分离效能高，分析时间短。

原理：

在超临界流体色谱（SFC操作过程中，样品随流动相一起进入色谱柱，样品中的各个组分按照其在固定相和流动相间的分配系数的不同进行分配，分配系数小的组分，在固定相的吸附弱，在色谱柱中的停留时间短，流出色谱柱较早。

超临界流体性质等随温度和压力的变化会出现较大的变化，导致流动相的溶剂化能力出现较大程度的变化。

鉴于此，可以通过调整温度、压力（通过控制系统内背压实现）等影响流动相密度的因素较轻松地对待测化合物的保留情况进行调

发展情况:

SFC最早于20世纪60年代被分析化学工作者提出。

经过近20年的缓慢发展，空心毛细管柱式SFC于20世纪80年代早期被成功开发，其出现加速了SFC技术的发展。

随后，新型填充柱式SFC也应运而生，进一步加速了SFC技术在应用领域的发展。

2019年3月，美国Waters公司推出了新型商品化的超临界流体色谱系统超高效合相色谱系统，同时，基于亚2m粒径填料的色

谱柱也被开发出来。

自此，SFC技术的应用得到飞速发展，且在实践中成功与蒸发光散射检测器、红外检测器、荧光检测器等多种检测器联用。

其中，SFC与质谱（MS联用具有灵敏度高、绿色环保等优势，在分析化学领域引起了极大的关注。

目前，SFC技术已被广泛应用于各个领域，如食品安全领域、环境分析领域、临床及生物样本分析领域。

2.制备液相色谱法与分析液相色谱法的异同及方法的转移方

法。

相同点：

原理相同。

原理：

色谱法的分离以化合物在流动相与固定相之间的相互作用为基础,当溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从面先后从固定相中流出。

如果色谐分离过程中使用的流动相是液体，则称为液相色谱，高效液相色谱则指以泵高压驱动流动相，使用小粒径多孔硅胶或稳定键合固定相的液相色谱。

不同点：

分析型液相色谱转化成制备型液相色谱主要有以下三个基本步骤：

1）1.确定分析型HPLC的分离条件：

可采用TLC考察初始分离条件，然后经对比和优化发确定色谱柱种类和洗脱溶剂系统；也可以根据样品的极性和溶解性质直接开发HPLC分析方法。

然后，优化溶剂强度和选择性，寻求目标组分具有较小容量因子

（k2）和较大分离度（1.5）的等度分离条件。

2）型制备型HPLC的条件转换。

在色谱柱种类、洗脱溶剂的组成和线速度等方面尽可能使制备柱与分析柱保持一致，首选通过增大色谱柱直径来实现更大的柱容量，这样可以简便准确地实现分析条件与制备条件的转换。

制备型色谱的流速（v）及进样量（x）可根据以下公式从分析型

确定制备HPLC条件后，需要根据分离的目的的选择制备方式并进行相应的条件优化。

对于一般实验室研究所进行的分离，主要要求达到一定的纯度和回收率；而对于生产规模的分离，关键指标则是产量。

生产能力和产品纯度是两个相互制约的因素，只有根据具体样品的分离情况选择恰当的制备方式才能最大限度地兼顾这两个因素。

在低样品浓度条件下，随着样品量增加，容量因子改变超过10%

时可认为色谐柱处于过载状态；通常的制备操作都在过载状态下进行。

当对两个或多个相距很近的主要成分进行分离时，若色谱系统的选择性不足以将该混合物分开，此时可采用边缘切割结合循环色谱进行分离。

此外，为提高制备速度和分离效率，当目标组分含量较大时，可采用大幅度过载进样，利用中心切割技术进行分离，此种情况需避免主要色谱峰前后两端微量组分的污染。

3.分分子印迹法的种类、原理。

简述常见的模板分子及常用的制备方法。

。

种类：

根据功能单体与目标分子官能团之间的作用力形式不同，可分为以下三类：

1.共价法又叫作预组织法，该方法是目标分子与单体通过共价键结合，在加入交联剂聚合之后，用化学方法断裂共价键将目标分子除去。

目标分子与功能单体之间的可逆共价键是该聚合物的制备以及以后的分子识别过程的关键。

2.非共价法又叫作自组织法，此方法是目标分子与功能单体之间先进行自组织排列，以较弱的非共价键自发形成带有多重作用位点的分子复合物，再经过与交联剂作用之后，除去目标分子。

3.半共价法集中了共价法和非共价法的特点。

即在制备印迹聚合物时功能单体和目标分子以共价键的作用力结合，而在洗脱目标分子之后，其所形成的分子印迹聚合物则是以非共价作用来识别目标分子原理：

分子印迹技术是指制备对某些特定目标分子具有特异选择性识别聚合物的过程。

当印迹分子与聚合物单体接触时会形成多重作用点，通过聚合过程这种作用就会被记忆下来，当模板分子除去后，聚合物中就形成了与模板分子空间构型相匹配的具有多重作用点的空穴，这个空穴可以选择性地与模板分子进行结合，即对模板分子具有专一性识别作用。

常见的模板分子：

制备非共价型印迹聚合物几乎对模板分子没有限制，碳水化合物、有机胺类、羧酸类、甾醇类、氨基酸、核酸、蛋白质乃至金属离子均可被用于制备分子印迹聚合物；，一般选用有强极性基团的化合物和与功能单体形成氢键的印迹分子，具有高选择性能。

常用的制备方法：

1.本体聚合：

将模板分子和功能单体在溶剂中混合均匀，在交联剂和引发剂存在的条件下发生交联聚合，得到的聚合物再进行干燥、粉碎、研磨和筛分，最后将模板分子洗脱。

2.悬浮聚合：

将模板分子、功能单体、致孔剂和交联剂溶于溶剂中，加入分散剂形成均匀的混合溶液，后加入引发剂在搅拌下经升温或光照引发进行聚合，得到粒径均匀的球形颗粒，再利用物理或化学方法洗脱模板分子。

3.分散聚合：

分散聚合是介于本体聚合和悬浮聚合之间的一种聚合方法，主要制备不同粒径的聚合物微球。

在进行反应之前，功能单体、模板分子、交联剂、引发剂和分散剂都溶解在溶剂中，体系通过引发剂分解产生自由基引发进行聚合，形成的聚合物颗粒借助分散剂的作用稳定悬浮于介质中。

4.沉淀聚合：

通常反应所用的单体、交联剂、引发剂可溶于溶剂，而产生的聚合物因不溶于溶剂，从而以聚合物微球形态沉淀出来。

在印迹过程中需使用大量的溶剂，功能单体的浓度较低。

5.表面印迹法：

将活性识别位点集中在聚合物的表面，这样更有利于去除模板分

子和特异性识别目标物，减少了模板分子的包埋现象4.中药质量

控制有何见解和建议中药中含有的化学成分复杂，通常有糖类、氨基酸、蛋白质等。

每一味中药都含有多种成分，对这些成分的检测就成了中药检测中的重点。

中药质量标准决定着中药的安全性与有效性。

《中国药典》中对各个中药材和中药方剂的质量控制仍以传统的性状、显微鉴定为主，辅以简单的理化检验和含量测定，在技术层面仍较为基础，而在准确度和精确度上仍处于一般水平。

因此需要有稳定且整体的评价方法来鉴定中药质量。

中药质量控制的主要方法：

1.中药指纹图谱法是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材、中药制剂以及半成品质量的真实性、优良性和稳定性，是对中药整体质量控制的手段，整体性和模糊性为其显著特点。

指纹图谱包括了对已知成分和未知成分的分析，可较充分地反映出中药复杂混合体系中各种化学成分量分布的整体状况，能够结合各种色谱、光谱、波谱手段，特征性地鉴定中药的真伪与优劣。

但缺点是太过于模糊，导致在实际生产、监督中难以应用和难以说清楚的局面。

2.一测多评法（QAMS是根据中药有效成分间存在的函数关系和

比例关系，测定其中的一个成分，来实现多个成分的测定。

一测多评侧重从量上阐明主要成分或药效成分间的相互关系，校正因子的应用能够实现在对照品短缺的情况下实现多指标成分的含量测定，是一种较好的多指标质量评价模式。

3.中药质量Q标记是指某些类型的物质或特征，可以代表中草药的质量。

从狭义上讲，Q标记是指在随后的中成药加工过程中可以转移的活性成分。

从广义上讲，Q标记是指影响中草药质量的形态，化学，生物和生态特征，与中药功效相关的标记。

中药质量Q标记方法关键在于确定Q标记物，在结合指纹图谱法等，运用多组分质量评估方法，来评价中药的质量。

4.多元统计分析法是从多方面因素对中药进行综合分析和评

价，主要有主成分分析，聚类分析，因子分析等方法我国的中药产

业发展和质量标准紧密相连，因此需要建立起相应的中药管理机构，有效实现规范化管理，并注重中药药材的应用、相关知识的传播，建立起正确的中药认识体系。

政府加大支持力度，建立起中药质量标准，加强相关中药教育体制的改革，并加强中药人才储备。

加强国际交流，加强公众中药安全的宣传，这样才能保障中药的应用效果。

5.简述手性拆分的方法和原理手性拆分也称作光学拆分，亦或称作外消旋体拆分，为立体化学上，用以分离外消旋化合物成为两个不同的镜像异构物的方法。

手性拆分法是制备、分离光学活性药物的重要方法。

手性拆分法有结晶法、酶拆分法、化学拆分法及色谱拆分法。

1.结晶法：

直接结晶法利用外消旋体具有形成聚集体的性质，直接将其从溶

液中结晶析出；间接结晶法是将对映异构体与光学纯的化合物形成非对映异构体，然后利用非对映异构体的溶解度差别使其中一个结晶析出.2.酶催化的动力学拆分是通过酶对底物中某一对映体的立体选择性催化，使得一种对映体能够更快地生成产物，实现手性拆

分。

常用于动力学拆分的酶包括：

脂肪酶、转氨酶等。

3.化学拆分是利用手性拆分剂将外消旋体拆分为单一光学异构体的拆分方法。

手性拆分剂可通过与外消旋体形成盐键得到非对映异构盐，根据溶解度等理化性质的差异，采用结晶方法实现拆分。

4.色谱拆分法分为直接法和间接法。

直接法是通过手性拆分剂创造手性环境，在分子间引入不对称中心从而进行直接分离，应用范围较广。

间接法是运用高光学纯度的手性衍生化试剂（CDR）与被分析组分

反应，将对映体转变为非对映体后，利用其物化性质的不同，在非手

性固定相上进行分离，然后经化学转化得到纯对映体

色谱拆分法根据色谱原理不同还可以分为薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、超临界流体色谱法、高效毛细管电泳法、分子印迹技术。

高效液相色谱法可采用CMPA法、CSP法和CDR法。

常用的手性流动相添加剂（CMPA）有：

环糊精及其衍生物、冠醚类手性添加剂、多糖及其衍生物类、手性离子对添加剂、蛋白质、大分子抗生素等等。

以羧甲基--环糊精（CM--CD）为手性流动相添加剂，用HPLC法分离非尼拉敏、溴苯那敏、扑尔敏等手性药物，达到基线分离。

常用的手性固定相（CSP）有：

吸附型手性固定相（又可分为天然高分子类、合成高分子固类、氨基酸类）、配体交换型固定相、蛋白质类固定相、电荷转换型手性固定相（如Pirkle型手性固定相）、生物碱类和大环抗生素类手性固定相等。

。

目前使用广泛的手性柱有ChiralcelOD-H［纤维素-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）涂敷型手性固定相］色谱柱、ChiralpakAD-H［直链淀粉-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）涂敷型手性固定相］色谱柱、Chiral-pakIA［直链淀粉-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合型手性固定相］色谱柱和Pirkle型的（5,S）-Whelk-01手性固定相色谱柱等。

常用的手性衍生化试剂（CDR）有：

苯并咲喃为母体类、异氰酸酯类、含萘二甲酰胺以及三氟甲基磺酸酯结构类、含其它功能基（氨基、羧基、羟基和酰氯等）类等等。

以邻苯二甲醛为衍生化试剂建立了葛根中精氨酸的色谱测定法。

为了解气相色谱和液相色谱的光学拆分机理，曾提出过多种手性识别模型，但这些模型多是基于在年提出的三点相互作用理论。

根据这一理论，在一对对映体和手性选择剂之间，为了形成稳定性不同的非对映体分子络合物而达到手性分离的目的，至少需要三个

同时发生的分子之间的相互作用力存在，而且，三点作用力中至少有一个必须是立体化学相互作用。

三点相互作用的要求不可避免的要从三维空间结构考虑相互的手

性识别。

为了识别两个对映体，手性识别与一种对映体进入一个与立体相关的三点相互作用的稳定状态，而另一个对映体则只能以两点作用形成不稳定的状态，这种稳定性或形成自由能差越大，则相互分离的可能性就越大。

这种络合作用被定量的表达为与键合及排斥相互作用相关的平衡常数。

排斥作用通常为立体排斥，有时也可能是偶极偶极排斥，而键合作用则包含氧键、偶极偶极吸引、电荷转移和疏水等相互作用⑴。

在手性液相色谱中根据手性固定相和手性选择不同，在对映体选择吸附过程中主要存在下列几种键合作用类型：

、过渡金属离子的手性配位相互作用；、电荷转移相互作用；、包结络合作用；、氢键相互作用；、立体硬合作用。

手性HPLC拆分法通常分为直接法和间接法两大类。

对映体混合物以手性试剂作为柱前衍生，形成一非对映异构体对，然后以常规（偶尔也见手性）固定相分离，称为间接法，也称手性衍生化试剂（CDR法；未做上述处理，使用手性固定相（CSP或手性流动性（CMP拆分方法，称为直接法。

间接法和直接法的共同特点是，均以现代HPLC技术为基础，并引入不对称中心（或光活化性分子）；不同的是CDR法是将其引入分子（溶质）内，而CSP法和CMP法则是引入分子间。

引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异是手性HPLC

进行光学异构体拆分的基础。

例如型和型的对映体的物理性质完全相同，只能在手性固定相上

才能获得拆分；如果利用对映体分子中的反应基团与某一光学纯试剂反应形成了非对映光学异构体混合物，其物理性质就有较大的差异，因而在普通固定相（非手性固定相）上也能实现分离。

6.HSCCC的原理？

选择条件时要综合考虑哪些因素？

高速逆

流色谱法HSCCC是一种可连续有效液液分离的色谱技术，该分离技术避免了固体吸附使用中存在的不可逆吸附问题，具有样品污染小、活性影响小、回收率高。

原理：

HSCCC的基础是单向性动力学平衡原理，利用螺旋管的高速行星

式运动产生的不对称离心力，使螺旋管中包含的两个互不相溶的溶剂在高速旋转时，分开呈单向分布，其中一相作固定相，恒流泵将载

有样品的流动相输送经过固定相，流动相不断穿过固定相，随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序被依次洗脱。

溶剂系统的选择：

1.两个溶剂系统选择基本要求：

①两相溶剂体系应稳定，溶剂系统分层时间小于30s;②溶剂不会引起样品的分解与变性；③样品溶解度较高；④目标化合物在两相溶剂系统中分配系数在0.5~2;⑤溶剂易挥发；⑥固定相保留值尽量不低于50%2.不同极性溶剂体系K值的选取：

一般选用HPLCEGTLC来测定，根据目标化合物的极性选择溶剂系统，按照不同比例混合，取适量化合物溶解，分别取上下相使用HPLCECTLC检测，上下相目标化合物的质量浓度比即为K值,选取K值落在0.5-2之间的比例作为溶剂系统。

7.细胞膜色谱法的原理及优缺点分析细胞膜色谱CMC是近

年发展迅速的一种生物亲和色谱技术，以细胞膜与色谱载体作为固定相，采用色谱分析法，可在体外模拟药物分子与细胞膜受体的相互作用过程。

原理：

现代药理学研究表明，细胞膜上的受体和通道可以特异性地识别

并结合药物中的活性成分，这种活性成分可作为第二信使，参与胞内酶的活性和非酶蛋白的活性调节，从而在细胞信号转导途径中行使携带和放大信号的功能，最终产生药理学作用。

CMC的方法学原理是将动物或植物活性细胞膜结合到硅胶表面制成细胞膜固定相，药物作为流动相在色谱柱中进行分析，根据不同的活性成分和膜上受体作用程度的差别表现出不同的保留特性，由此可

实现中药活性成分的分离、纯化和筛选及相应的靶点与受体研究。

优点：

1.与传统方法相比，CMC作为一种亲合的生物色谱技术，具有特异性识别和高效分离的特性。

2.CMC与HPLC和质谱分析技术在线二维分析系统联用，对复杂中药体系中有效活性成分的分离和高通量筛选具有独特优势。

3.CMC具有细胞膜活性功能，通过建立不同的细胞膜色谱模型，利用不同药物与其受体亲和力相互作用的特性进行定量和定性分析

4.CMC不仅可以在生理状态下还可以表征病理状态下分析细胞膜上药物与受体的相互作用。

5.较传统的细胞增殖和酶活性测定法显现出简便快速、灵敏精确、成本低廉等优点。

缺点：

1.CMC不能使复杂的体内环境和体内其他影响中药药效发挥的因素被完全模拟出来。

2.不同的中药活性成分在体内的作用靶点不同，制备生物材料的固定相细胞难以实现商品化的问题。

3.多种活性蛋白存在于自然生物膜上，但标本量太少或收集困难，不能将此类生物膜用于大规模筛选和受体亚型的研究。

4.药物与细胞膜、膜受体之间的相互作用受到干扰。

5.被CMC柱特异性保留的有效成分的量通常很少，难以进行结构鉴定和药理活性确证。

6.没有共同的标准可以衡量CMC色谱柱的质量。

细胞膜蛋白活性的丧失以及细胞膜从CMSP上脱落，柱寿命短.7.药物筛选的选择性和敏感性受特定膜受体数量的影响。

8.简述固相微萃取技术的原理和方法固相微萃取（SPME）是在固相萃取技术基础上发展起来的新型绿色前处理技术，能够有效

解决固相萃取和其他传统样品预处理技术存在的易堵塞、产生沟流等问题。

原理：

SPME是一种基于气固吸附（吸收）和液固吸附（吸收）平衡的富集方法，利用分析物对活性固体表面有一定的吸附（吸收）亲合力而达到分离富集目的的方法。

固相微萃取的分析对象主要是有机物，根据有机物与溶剂之间相似相溶的原则，利用载体表面色谱固定相对分析组分的吸附作用，将

组分从试样基质中萃取出来，并逐渐富集，完成试样前处理过程，采用色谱的分析方法进行分析。

SPME的基本原理和萃取理论可以表述为待测组分在介质相或顶空相及萃取相的分配平衡过程，当达到动态平衡时，萃取相吸附的待测组分的量与样品中的浓度成正比，以此为定量分析的依据。

方法：

固相微萃取的方法：

1、直接萃取：

涂层纤维直接插入样品中，分析物直接从样品基质直接转移到萃

取相中。

一定程度的搅拌可以加快萃取进行。

适合于气体基质或干净的水基质。

2、顶空萃取：

萃取纤维插入到溶液上部的空气中，它要求分析物具有一定的挥发性。

这种方法可以有效避免一些大分子的干扰。

适合于任何基质，尤其是直接法无法处理的脏水、油脂、血液、污泥等样品。

3、膜保护法：

通过一个选择性的高分子材料膜将试样和萃取头分离，以实现间接萃取，保护萃取头不被污染。

对于含有不挥发目标分析物和大分子干扰物的样品，如含腐殖酸、蛋白质等的体系，直接萃取和顶空萃取的方法可能都不适用，该法可以获得很好的重现性和准确度。

9.关于LC-MS的理解液相色谱-质谱（LC-MS是一种分析化学技术，液质联用技术是将高效液相色谱和质谱串联整合，以高效液

相色谱作为主要分离手段，质谱作为检测手段的现代分析技术，集

合了高效液相色谱的高分离能力和质谱的高灵敏度、高选择性的特点。

一般可以应用在天然药物分析、药物代谢研究、在违禁药物研究、蛋白组学中。

LCMS系统由：

HPLC替代原来质谱的进样系统接口（离子源）质量分析器检测器。

离子源：

是使被分析样品的原子或分子离化为带电粒子（离子），同时对带电粒子加速，使其进入分析器的装置，目前使用的离子源主要是电喷雾离子源（ESI）和大气压化学电离源（APCI）。

质量分析器：

现有的质量分析器有串联四极、三重四极杆分析器等LC-MS分析条件的选择：

1.离子源的选择：

ESI是最软的电离技术，适合分析中极性、强极性化合物分子，尤其是在溶液中能预先形成离子的化合物和可获得多个质子的大分子。

APCI亦为软电离技术，适合分析弱极性小分子物质，不适合分析

带多个电荷的大分子

2.正离子模式用于分析碱性样品，样品由甲酸或乙酸酸化后进

行分析。

样品中含仲氨或叔氨的应优先考虑使用正离子模式。

负离子模式用于分析酸性样品，由三乙胺或氨水碱化样品后分析，适合分析含较多强伏电性基团的样品，如含氯、含溴或多个羟基时

可尝试使用负离子模式3.流动相的选择常用的流动相为甲醇、乙腈、水及不同比例的混合物，或一些易挥发盐的缓冲液，还可通过加入酸、碱调节pH值4.流量和色谱柱的选择不加热ESI目前一般用lmm~2.1mm内径微柱，最佳流速（1〜50）l/min;采用内径4.6mm的LC柱时要求柱后分流。

APCI常规使用直径4.6mm的色谱柱，最佳流速lml/min;小于100mm的短柱可提高分析效率，节省定量分析的时间LC-MS联用技术结合了色谱的高分离性和质谱的强鉴别力，专属性高，对多数药物的检测灵敏度优于其它分析方法，定量测试速度亦明显加快。

该技术可解析混合物中微量组分的结构，达到现代体内药物分析研究中高通量和高精度的要求，成为了药代动力学和药物代谢研究的核心分析技术。

随着现代高新技术的不断发展，LC-MS联用技术必将在体内药物分析的研究中拥有不可或缺的地位10.CE的原理，比HPLC高效

的原因，与HPLC的异同比较毛细管电泳又称高效毛细管电泳，是一类以毛细管为分离通直，以高压直流电场为驱动力，以样品的多种特性为根据的液相微分离分析技术。

原理：

在电场的作用下根据离子的迁移速度不同，以高压电场为驱动力，以内径10-100um的毛细管为工具对样品组份进行分离和分析，毛细管电泳技术采用熔融石英管毛细管柱，石英管外包裏聚酰亚胺涂层以保持石英管的弹性，毛细管的内径达到微米級。

因此,一方面可以分析量非常少的样品如单细胞组份的分析，另一方面因为比表面积大横截半径小，具有较快的散热速度，克服了传统电泳散热效率差而不能采用高电场分离的问题。

在毛细管电泳分离过程中，样品分于的迁移是有效电泳速度和电渗速度的综合表现。

由于在毛细管中电渗速度比电泳速度大一个数量级，因此能实现样品组份同向泳动。

比HPLC高效的原因：

CE属于电力驱动分离系统，在毛细管中流型呈扁平的柱塞形状向前流动，这种流型有利于防止扩散，提高分离效率，而高效液相色谱柱中为抛物面动力学流型，易扩散，效率相对较低；柱效由纵向扩散项涡流扩散项和传质阻力项举得，但CE中几乎无涡流扩散项，因此比HPLC有更高的柱效。

CE和HPLC相比，其相同处在于都是高效分离技术，操作均可自动化，且有多种不同分离模式。

差异在于:

（1）CE用迁移时间取代HPLC中的保留时间，CE的分析时间通常不超过30min,比HPLC速度快；其他分离存在两相，电泳是均相。

（2）对CE而言,理论塔板高度和溶质的扩散系数成正比，对扩散系数小的生物大分子而言，其柱效高。

（3）CE所需样品为nl级，最低