李国梁专业技能作业汇总.docx

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李国梁专业技能作业汇总

专业技能培训作业

2014—2015学年第1学期

学院：

医学与生命科学学院

课程名称：

专业技能培训

课程编码：

27439350

课程类别：

专业任选课

学号：

20112721075

班级：

制药工程1102

姓名：

李国梁

填写日期：

2014年10月23日

复方双黄连胶囊的研制

（济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院；章丘250200）

李国梁

摘要：

目的:

掌握常用的中药提取的方法和原理、掌握湿法制粒的方法和技术；掌握薄层色谱的操作技术、崩解仪、及紫外分光光度计的使用,掌握胶囊剂项下的质量检查项目和检查方法及药效学研究方法。

方法：

水煎法、回流提取法、微博辅助提取法等方法提取金银花、连翘和黄芩，湿法制粒制备胶囊，薄层鉴别法进行胶囊剂鉴别，使用崩解仪测定胶囊的崩解时限，双波长分光光度法测定双黄连胶囊中黄芩苷含量，用小鼠耳肿胀模型进行双黄连胶囊的药效学研究。

结果：

制备得到了复方双黄连胶囊60粒，胶囊质量符合要求，制备的胶囊具有抗炎作用。

结论:

通过以上制备方法完全可以制备出合格的复方双黄连胶囊，该胶囊具抗炎作用，且药量越大，抗炎效果越好。

关键词：

复方双黄连，水煎提取法，湿法制粒，鉴别，检查，含量测定，药效学

PreparationofcompoundShuanghuangliancapsules

Abstract：

objectiveTomasterthecommonlyusedextractionmethodsandprinciplesoftraditionalChinesemedicine,tomasterthemethodsandprinciplesofwetgranulation;tomasterthemethodsfortheexaminationofthequalityofthecapsulesandpharmacodynamicresearchmethods;tomasterThinlayerchromatographytechniqueandtheuseofDisintegrationapparatusandUvspectrophotometry..

MethodsChinesemedicine–Jinyinhua、LianqiaoandHuangqingwereextractedusingthemethodofdecocting.Thecapsuleswerepreparedbywetgranulating.andidentifiedusingthemethodofTLCidentification.ThedisintegrationtimeofthecapsuleswasexamedusingDisintegrationapparatus.ThecontentofHuangqinganincompoundShuanghuangliancapsuleswasdeterminedusingthemethodofdualwavelengthspectrophotometry.TheresearchofpharmacodynamicsofcompoundShuanghuangliancapsuleswasconductedusingthemodelofmouseearinflammation.

ResultsWegotfortycompoundShuanghuangliancapsulesthatconformtothequalitycriterionandhaveanti-inflammatoryeffect.

ConclusionWecanpreparecompoundShuanghuangliancapsulesthatconformtothequalitycriterionwiththemethodsabove.Thesecapsuleshaveanti-inflammatoryeffect,besides,thegreaterdose,thebetteranti-inflammatoryeffectithas.

Keywords：

compoundShuanghuangliancapsules，themethodofdecocting,wetgranulation,identification,examination,contentdetermination,pharmacodynamics

综述

黄芩别名山茶根、土金茶根。

为唇形科植物黄芩（ScutellariabaicalensisGeorgi），以根入药。

有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效。

主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。

黄芩的临床应用抗菌比黄连还好，而且不产生抗药性。

我们借助广谱抗菌作用强的特点，用在真菌培养杂菌感染特厉害，用黄芩提取液效果很好，它是农业病害防治最理想的一味药。

产于河北、辽宁、陕西、山东、内蒙古、黑龙江等地。

连翘是历史悠久、使用广泛的一种中药，有清热解毒、消肿散结的功效。

《中华人民共和国药典》1995年版收载的连翘为木犀科Oleaceae连翘属植物连翘Forsythiasuspensa（Thunb.）Vahl的干燥果实。

当果实初熟，尚带绿色，未开裂时采收的称为青翘；当果实成熟开裂后采收的称为老翘。

主产于山西、河南、陕西。

金沙金银花，罗波湖南金银花植物金银花又名忍冬，为忍冬科多年生半常绿缠绕木质藤本植物。

“金银花”一名出自《本草纲目》，由于忍冬花初开为白色，后转为黄色，因此得名金银花。

药材金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。

金银花自古被誉为清热解毒的良药。

它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。

金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，均效果显著。

双黄连胶囊是日常感冒的常备药，它的主要成分是黄芩、连翘、金银花，它具有辛凉解表，清热解毒功效，常用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。

本次试验选用水煎法、回流提取法、微博辅助提取法提取金银花、连翘和黄芩，采用湿法制粒的工艺制备胶囊，采用薄层鉴别法进行胶囊剂鉴别，使用崩解仪测定胶囊的崩解时限，双波长分光光度法测定双黄连胶囊中黄芩苷含量，用小鼠耳肿胀模型进行双黄连胶囊的药效学研究。

该实验贯穿天然药物化学、药物分析、药理学和药剂学四大药剂专业主干课程，通过本次实验，能够更加深刻地理解和巩固在课堂中所学到理论知识，掌握各专业实验的基本操作和基本技能，掌握药物制剂过程中常用仪器设备的使用方法，具备一定的分析问题、解决问题和独立工作的能力，熟悉新药研发的基本思路，为将来从事药物制剂及新剂型研究、开发与生产打下良好的基础。

1材料

1.1动物

健康小白鼠4只，重量（20―30）g

1.2药物

主药：

黄芩、连翘、金银花

药用辅料：

淀粉、微晶体纤维素、羧甲基淀粉钠、0号胶囊壳

1.3．仪器及试剂

1、仪器

玻璃仪器气体烘干仪、超声波清洗器、恒温水浴锅、通风柜、蒸煮锅、电热炉、紫外可见分光光度计、粉碎机、崩解时限测试仪、布氏漏斗、漏斗、玻璃棒、蒸发皿、纱布、试管、研钵、容量瓶（100ml）、分液漏斗（250ml）、密度计、胶头滴管、洗耳球、14目筛、16目筛、电子天平、小铝盆、不锈钢托盘、胶囊板、滤纸、展开缸、玻璃板、量筒（100ml、10ml）、烧杯（1000ml、500ml、200ml、100ml）、灌胃器、剪刀、打眼器、喷壶。

2、试剂

供试品溶液、芩苷对照品溶液、金银花对照药材溶液、绿原酸对照品溶液、连翘对照药材溶液、连翘苷对照品溶液、氨制硝酸银溶液、10%硫酸乙醇溶液、盐酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液、醋酸乙酯（分析纯）、甲醇（分析纯）、50%甲醇、正丁醇（分析纯）、冰醋酸、三氯甲烷（分析纯）、蒸馏水（分析纯）、二甲苯、双黄连水溶液、2mol/LHCl、75%乙醇、80%乙醇、无水乙醇、硅胶、羧甲基纤维素钠

2方法

2.2．黄芩、连翘和金银花的提取

2.1.1.黄芩的提取

称取黄芩94g，放入蒸煮锅内，加入适量水（没过药材1-2cm），用电热炉小火加热，保持微沸。

水煎煮1.5小时后停止，滤过（2层纱布），取滤液于500ml烧杯中。

药渣继续加适量水煎煮1小时滤过（2层纱布），合并两次滤液。

将蒸煮锅刷洗干净，并将所得的滤液倒入其中，于电热炉上浓缩，浓缩成约100毫升左右的浸膏。

用密度计测量其相对密度为1.03-1.08之间（未测相对密度，只是凭老师指导和实验经验），并在水浴锅上保持80℃用2mol/LHCl调节PH至1.0-2.0之间，在水浴锅上保温1小时，然后再在室温下静置24小时，得到下层为土黄色的膏状物质，上层为棕红色液体。

用胶头滴管小心弃去上层液体，向盛有土黄色膏状物质的烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅匀，倒入布氏漏斗中抽滤，用PH试纸测试溶液PH=3，取出滤饼，放入烧杯中再加入蒸馏水若干搅匀，再用布氏漏斗抽滤，取出滤饼，测试溶液的PH，重复以上步骤，抽滤处理共4次。

最终，PH调至5.0，然后再用70%的醇洗，按以上步骤，洗至PH接近7.0，醇洗2次，得到的沉淀用玻璃棒转移至100ml烧杯，两个蒸发皿中，放入烘箱中，恒温60摄氏度，干燥研细备用。

2.1.2.金银花、连翘的提取

称取金银花94g，连翘188g，预留6.0g干药材粉碎备用（金银花2.0g，连翘4.0g）。

将连翘和金银花混合药材放入蒸煮锅内，加入适量水（没过药材1-2cm），用电热炉小火加热，保持微沸。

水煎煮1.5h后停止，滤过（2层纱布），取滤液于500ml烧杯中。

药渣继续加适量水煎煮1.5h，滤过（2层纱布），合并两次滤液。

将蒸煮锅刷洗干净，并将所得的滤液倒入其中，于电热炉上浓缩，浓缩成约160mL的清膏，用密度计测量其相对密度为1.20-1.25（80℃）（未测相对密度，只是凭老师指导和实验经验）。

室温冷却至40℃时，搅拌下缓缓加入乙醇480mL,使含醇量达75%。

充分搅拌，静置12小时，过滤，将残渣中加入75%乙醇适量，搅拌，静置5小时，过滤，合并两次滤液，回收乙醇至无醇味。

将其浓缩成相对密度为1.34-1.40（60℃测）的稠膏（未测相对密度，只是凭老师指导和实验经验）。

2.2.双黄连胶囊的制备

1．处方组成：

提取的黄芩粉末所提取量

金银花、连翘粉碎粉末所提取量

金银花、连翘稠膏所提取量

微晶纤维素5.0g

羧甲基淀粉钠5.0g

淀粉适量

乙醇适量

制备60粒

2.制法：

向上述制得的金银花、连翘稠膏中加入预留的金银花连翘粉末，并且迅速用玻璃棒搅拌均匀，然后再向其中加入提取的黄芩粉末，并迅速搅匀。

加入微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，淀粉，硬脂酸镁适量，搅拌均匀，用喷雾法喷入无水乙醇适量，迅速用手搅拌均匀并制成软材，过16目筛，湿粒在60℃温度下烘干，干粒过14目筛整粒，最后用胶囊板装入胶囊壳制备胶囊。

2.3复方双黄连胶囊的鉴别、质量检查和含量测定

2.3.1复方双黄连胶囊的质量检查

1、装量差异：

取10粒胶囊，分别精密称定重量后，倾出内容物（不得损失囊壳），囊壳用小刷拭净，置通风处使溶剂自然挥尽，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量与平均装量。

每粒的装量与平均装量相比较，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。

平均装量重量差异限度

0.3g以下±10％

0.3g或0.3g以上±7.5％

2、崩解时限：

取供试品6粒，按《中国药典》2010年版二部附录XA进行崩解时限检查。

硬胶囊应在30min内全部崩解。

如有1粒不能完全崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。

2.3.2复方双黄连胶囊的鉴别

1．黄芩的鉴别

供试液的制备：

取双黄连胶囊2g，甲醇15mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至近干，加甲醇2mL使溶解。

黄芩对照药材溶液的制备：

黄芩对照药材1g，同上法，制成黄芩对照药材溶液。

黄芩对照品：

精密称定，加甲醇制成1mg/mL的溶液。

TLC：

点样量各2μL，硅胶薄层板（硅胶3g、羧甲基纤维素10mL）

展开剂：

正丁醇：

冰醋酸：

水（7:

2）,展开，晾干，喷以盐酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液，供试品色谱中，在与黄芩对照药材和黄芩对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2．金银花的鉴别

供试品的制备：

取双黄连胶囊2g，加热水20mL使溶解，加醋酸乙酯提取两次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取的水溶液，加0.3ml2M的盐酸溶液调节pH至1.0，用醋酸乙酯提取二次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL，使溶解，滤过，滤液作供试品溶液。

金银花对照药材溶液的制备：

金银花对照药材5g，加水50mL，煎煮1h，滤过，滤液加盐酸调节pH至1.0，同法制成金银花对照药材溶液。

绿原酸对照品溶液的制备：

精密称定，加甲醇制成1mg/mL的溶液

TCL:

点样量各2μL,硅胶G薄层板（用前活化处理）

展开剂：

醋酸丁酯：

甲酸：

水（7：

2.5：

2.5）的上层溶液为展开剂，展开，晾干喷以氨制硝酸银试液，立即检视。

供试品色谱中，在与金银花对照药材和绿原酸对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3．连翘的鉴别

供试品溶液的制备：

双黄连颗粒2g，研细，加75%乙醇5ml，超声处理10min，滤过，滤液作为供试品溶液

连翘对照药材溶液的制备：

取连翘对照药材0.5g，加甲醇10mL，置水浴上加热回流20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。

TCL：

吸取对照药材溶液供试品各2μL，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5:

1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.3.3.复方双黄连胶囊含量测定

对照品溶液的制备：

精密称取真空干燥至恒温的黄芩苷对照品12.5mg置50mL容量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇，使溶解，放置至室温，稀释至刻度即得浓度为0.25mg/mL的溶液。

（指导老师已经提前准备好了）

供试品溶液的制备：

取重量差异下双黄连颗粒研细，用电子天平称取供试品M=0.02～0.05g，置100ml容量瓶中加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，稀释至刻度，摇匀。

滤过，精密量取滤液2ml置100ml容量瓶中至刻度，摇匀，滤过，再精密量取续滤液2ml置100ml容量瓶中摇匀。

滤过，精密量取滤液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得。

标准曲线方程：

y=△A=75.78x-0.0245。

供试品吸光度测定：

取供试品溶液于277nm和377nm波长处分别测吸光度，分别为A¹、A²，得△A=A¹－A²，根据回归方程计算样品中黄芩苷的含量。

2.4复方双黄连胶囊的药效研究

选用健康雄性小白鼠4只，称重，并分别用苦味酸标记。

随机分成给药组（1号，2号，3号）和对照组，并且标号。

并且分别标上标签1号，2号，3号。

根据公式：

（人用剂量/378.9）*小鼠体重、（0.1～0.3ml）/10g体重,人的剂量是0.4g/粒*4*3，依据上述给出的公式及数据计算小鼠给药量。

1号、2号、3号给药量分别是：

0.436ml、0.448ml、0.458ml。

半个小时后，每鼠左耳两面涂二甲苯约0.02mL，右耳做空白对照。

对照组：

给等量生理盐水。

1h后，将小鼠处死，剪下双耳并在同一部位打圆耳片，电子天平称重，以（左耳重-右耳重）/右耳重作为肿胀率，比较差异。

3结果与讨论

3.1．黄芩、连翘和金银花的提取

【结果】

提取得到少量黄芩粉末，一定量金银花、连翘稠膏。

【讨论】

1、水煎法提取出的连翘，金银花，黄芩的量相对超声提取法、回流提取法等其他溶剂提取法得到的量较多，并且设备简单，操作简单，是中药提取的好方法。

但同时要注意的是：

提取出的药量大，多糖、鞣质等杂质也较多，多糖等成分粘性很大，会造成后期制粒时软材粘性过大，影响制粒。

2、煎煮时要注意补充水分，保持药液微沸即可，不要过大的火力加热，并且在煎煮过程中经常用玻璃棒搅拌，防止药材煎糊使药物有效成分减少，产生毒副物质。

3、黄芩提取过程中，采取80℃保温一小时的措施，目的是便于黄芩苷的析出，凝集成较大的颗粒易于沉降和过滤，注意保温尽量保持静止稳定，使之充分受热沉降。

3.2．双黄连胶囊的制备

【讨论】

1、制软材和制湿粒的过程中出现较多问题：

在制软材时候，由于没有预先查好资料，导致崩解剂羧甲基淀粉钠过早的加入，润滑剂硬脂酸镁忘记添加，影响其崩解和润滑效果，但这样对胶囊的崩解时限影响不是太大。

由于采用水煎法提取的金银花和连翘，因此含多糖、鞣质等杂质比较多，而多糖等的粘性本身就很大，并且加入辅料的次序及用量不太恰当，金银花连翘稠膏过于黏稠，其中的水分太少，导致在制备软材的过程中，加入黄芩、金银花连翘药材粉末和各种辅料的时候，越搅拌粘性越大，最后又添加了一些金银花及连翘粉末还添加了微晶纤维素并喷洒了少许乙醇③制湿粒时，经过反复过筛、加辅料、用手混合的过程才勉强制成的。

由于没有掌握好制备软材和湿粒的技巧，导致在此过程中浪费了大量的药材和辅料。

④由于提取的金银花和连翘稠膏本身粘性就很大，所以在选择辅料的时候就要选择粘性不大的辅料，如微晶纤维素，和稀释剂淀粉。

⑤我认为要想得到比较理想的软材和湿粒除了要掌握相应的理论知识以外，更重要的是需要一定的制备软材的经验。

有时候，辅料多一点或者是少一点都会导致软材的制备失败，因此，我们就需要多加练习，积累制备经验。

2、处方分析：

金银花+黄芩+连翘粉主药

微晶纤维素填充剂和粘合剂

羧甲基淀粉钠崩解剂

乙醇润湿剂

淀粉填充剂和稀释剂

3.3复方双黄连胶囊的鉴别、质量检查和含量测定结果

3.3.1.复方双黄连胶囊的质量检查结果

1、装量差异结果

胶囊总重量：

4.2429g胶囊平均重量：

0.43167g胶囊壳重量：

0.9471g囊壳平均重量：

0.09478g内容物装量总重：

3.3689内容物平均装量：

0.3296

胶囊重量（g）

0．4308

0．4277

0．4152

0．4193

0.4202

0.4314

0.4219

0.4324

0.4301

0.4136

囊壳重量（g）

0.0990

0.0972

0.0916

0.0938

0.0969

0.0947

0.0957

0.0936

0.0914

0.0939

内容物装量（g）

0.3318

0.3305

0.3236

0.3255

0.3233

0.3367

0.3262

0.3388

0.3387

0.3197

装量差异（%）

0.6674

0.2730

-1.820

-1,244

-1.911

2.154

-1.032

2.791

2.761

-3.003

【讨论】

由以上数据可得：

本组胶囊的平均装量均＞0.3g，装量差异均在±7.5%范围内，因此本组中胶囊装量差异符合要求。

2、崩解时限结果

6粒胶囊崩解时限：

13min内全部崩解

【讨论】

1、连翘：

如以上薄层层析结果所示，供试品与连翘对照药材和连翘苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色（紫黑色）的斑点，即制备的复方双黄连胶囊中含有连翘。

2、金银花：

如以上薄层层析结果所示，供试品的薄层结果为3个斑点（棕黄色），而金银花对照药材只出现3个斑点，绿原酸对照品出现一个斑点。

这样的结果说明制备的复方双黄连胶囊中含有金银花。

3、黄芩：

如以上薄层层析结果所示，供试品与对照药材各出现3、2个斑点（绿色），黄芩苷对照品出现一个斑点，且这三种溶液都几乎在同一位置出现一个斑点，这样也能够得出制备的复方双黄连胶囊中含有黄芩。

4、在展开前，应该将展开缸用展开剂进行预饱和，防止在展开的过程中出现边缘效应。

并且，在展开前，应该振摇展开剂，否则展开剂会出现分层现象，影响展开效果。

3.3.3.复方双黄连胶囊含量测定结果

1、标准曲线方程：

y=△A=75.78x-0.0245，r=0.9994

表3-3-3供试品吸光度测定结果

波长（nm）

277

377

吸光度A（质量m=0.264g）

1.046

0.28

△A（A¹－A²）

0.766

42、黄芩苷的含量%计算

5代入标准曲线计算公式得黄芩苷浓度：

x=0.01043mg/ml

6稀释倍数为：

50倍

7黄芩苷的重量计算：

8m=x×50=0.01043×50=0.5216mg,即0.005216g

9黄芩苷的含量计算：

黄芩苷的含量%=m/M×100%=0.005216/0.264×100%=1.976%

【讨论】

1、一般情况下，每粒胶囊中黄芩苷的量为≥50mg，含量约为11.6%,可见制备的复方双黄连胶囊黄芩苷的含量偏低。

之所以偏低是因为，在制软材的时候，加的辅料量太；提取的黄芩量太少。

2、含量测定的时候，本来制备的黄芩苷溶液稀释倍数为50倍，但是由于所测得的吸光度A值为0.832，而正常情况下A值的范围为0.3－0.7，A值略微偏大，稍微影响吸光度的精确性。

3、在测紫外时按照前面的步骤进行测量时得到的数据是0.02左右偏差太大，所以经过我们小组的讨论决定直接用配好的原液直接进行测量，最终得到以上表格中的数据。

3.4复方双黄连胶囊的药效研究结果

表3-4-14只小鼠的重量

编号

空白

小剂量（1号）

中剂量（2号）

大剂量（3号）

小鼠重量\g

23.1

19.9

22.4

22.9

给药量分别为：

1号：

（0.4g×4×3/378.9g）/20×19.9g＝0.0126

2号：

（0.4g×4×3/378.9g）/20×22.4=0.0142

3号：

（0.4g×4×3/378.9g）/20×22.9=0.0145

空白组：

生理盐水

表3-4-24组小鼠肿胀率结果

编号

小鼠给药量\g

左耳重\g

右耳重\g

肿胀率\％

空白

0.00000

0.0088

0.0045

95.6

1号

0.0126

0.0119

0.0062

91.9

2号

0.0142

0.0070

20.6

3号

0.0145

0.0097

0.0084

15.5

表3-4-3全班小鼠肿胀率统计结果

空白

95.6

7.94

33.3

13.3

161.7

72.4

124

35.48

73.1

小剂量

91.9

130.30

52.5

15.25

8.7

38.3

112

56.92

84.3

中剂量

20.6

31.25

13.46

13.04

90.7

96.7

114

47.95

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