微量成分分析方法.docx
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微量成分分析方法
微量成分分析方法
一、钙铁锌钠钾镁铜和锰的测定…………………………第330页
二、食品中砷、汞、硒的检测………………………………第332页
（一）食品中砷的检测………………………………………第332页
（二）食品中汞的检测………………………………………第335页
（三）食品中硒的检测………………………………………第337页
三、维生素的检测……………………………………………第340页
（一）婴儿配方食品和乳粉维生素B1的检测……………第340页
（二）婴儿配方食品和乳粉维生素B2的检测……………第342页
（三）婴儿配方食品和乳粉维生素B6的检测……………第344页
（四）婴儿配方食品和乳粉烟酸、烟酰胺的检测…………第347页
（五）食品中维生素A、维生素E的检测…………………第349页
四、苯甲酸和山梨酸的检测…………………………………第354页
五、食品中糖精钠的检测……………………………………第360页
六、食品中苏丹红的检测……………………………………第362页
七、巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定……………第365页
八、食品中铅含量的测定……………………………………第375页
九、食品中甜蜜素的测定……………………………………第377页
十、牛奶中土霉素残留的测定………………………………第378页
十一、牛奶中农药残留DDT和狄氏剂的测定………………第379页
一、婴幼儿配方食品和乳粉钙铁锌钠钾镁铜和锰的测定（依据国标GB/T5413.21-1997）
1试剂
1.1浓盐酸。
1.22%盐酸和1：
4盐酸。
1.31：
1硝酸。
1.4镧溶液50克/升：
称取29.32克氧化镧，用25毫升去离子水湿润后，慢慢仔细地添加125毫升浓盐酸使氧化镧溶解后用去离子水稀释至500毫升。
1.5钙铁锌钠钾镁铜和锰标准储备溶液：
浓度均为1000微克/毫升。
各离子的标准中间液100微克/毫升：
分别吸取标准储备液25毫升于250毫升容量瓶中用2%盐酸定容。
2操作步骤
2.1标准曲线
2.1.1标准混合溶液的配制
按表一给出得体积配制三个混合标准工作液。
即分别吸取铜锰标准中间液10毫升于100毫升容量瓶中定容，即两离子的浓度为10微克/毫升，再按表1吸取该液，测定铁、锌含量时按表一分别吸取标准中间液于100毫升容量瓶中；用2%盐酸定容即为5个铜锰铁锌混合标准溶液；测定钙镁含量时按表一吸取标准中间液于100毫升容量瓶中，加2毫升镧溶液用2%盐酸定容即为钙镁标准混合溶液；测定钾钠含量时按钙镁步骤操作即为钾钠标准混合溶液，各元素浓度如表2。
表1配制混合标准溶液所取各元素标准中间液的体积
序号
钾
钙
钠
镁
锌
铁
铜
锰
1
1
2.5
1
0.5
0.5
2.0
1
1
2
2
5
2
1.0
1.0
4.0
2
2
3
3
10
3
1.5
1.5
6.0
4
4
4
4
15
4
2.0
2.0
8.0
6
6
5
5
20
5
2.5
2.5
10.0
8
8
表2混合标准溶液各元素的浓度
序号
钾
钙
钠
镁
锌
铁
铜
锰
1
1
2.5
1
0.5
0.5
2.0
0.1
0.1
2
2
5
2
1.0
1.0
4.0
0.2
0.2
3
3
10
3
1.5
1.5
6.0
0.4
0.4
4
4
15
4
2.0
2.0
8.0
0.6
0.6
5
5
20
5
2.5
2.5
10.0
0.8
0.8
2.1.2准曲线的绘制
按照仪器说明书将仪器工作条件调整到测定各元素最佳状态，选用灵敏吸收线钾766.5纳米，钙422.7纳米，钠588.9纳米，镁285.2纳米，铁248.3纳米，铜324.7纳米，锰279.5纳米，锌213.9纳米将仪器调好预热后，用毛细管吸喷2%盐酸溶液，测定钾钠钙镁时用含镧1克/升的体积分数为2%的盐酸调零。
分别测定混合标准溶液中各离子的透光率，对各元素含量绘制标准曲线或计算回归方程。
2.2样品处理
精确称取5.0000克样品于坩埚中在电炉上微火炭化至不放烟，再移入高温炉中升温至490℃使样品灰化成白色灰烬。
如果有黑色碳粒，冷却后滴加少许1：
1的硝酸湿润。
在电炉上小火蒸干后，再移入490℃高温炉中继续灰化成白色灰烬，取出冷却至室温，加1：
4的盐酸5毫升，在电炉上加热使灰烬充分溶解，冷却到室温后，移入50毫升容量瓶中，用去离子水定容，同时处理一个空白样品。
2.3样品的测定：
调整好仪器最佳状态，用相应的盐酸溶液调零后，按下面的方式测定样品的透光率及试剂空白。
2.3.1钠的测定：
从50毫升样液中吸取1毫升于100毫升容量瓶中，加2毫升镧溶液，用2%盐酸定容，上机测定。
2.3.2钾的测定：
从测定钠的100毫升容量瓶中吸取10毫升于50毫升容量瓶中，加1毫升镧溶液，用2%盐酸定容，上机测定。
2.3.3钙镁的测定：
从50毫升样液中吸取1毫升于50毫升容量瓶中，加1毫升镧溶液，用2%盐酸定容，上机测定。
2.3.4铁锰锌铜的测定：
从50毫升样液中吸取5毫升于25毫升容量瓶中，用2%盐酸定容，上机测定锌，铁锰铜用50毫升样液直接上机测定。
3计算：
（c1-c2）×V×A
样品中元素含量（毫克/100克）=----------------×100
m×1000
式中：
c1——测定样液中元素的浓度，微克/毫升；
c2——测定空白液中元素的浓度，微克/毫升；
V——样液体积，毫升；
A——样液稀释倍数；
m——样品的质量，克。
允许差：
同一样品的两次测定之差不得超过两次测定平均值的5%。
二、食品中砷、汞、硒的检测：
（一）食品中砷的检测：
（依据国标GB/T5009.11-2003）
氢化物原子荧光光度法
1主题内容与适用范围
本标准规定了各类食品中总砷的测定方法。
本标准适用于各类食品中总砷的测定。
其最低检出浓度：
氢化物原子荧光光度法:
0.01mg/kg。
2原理
样品经湿消解或干灰化后，加入硫脲使五价砷还原为三价砷,再加入硼氢化钾或硼氢化钠使还原生成砷化氢,由氩气载入石英原子化器中分解为原子态砷,在特制砷空心阴极灯的发射光激发下产生原子荧光,其荧光强度在固定条件下与被测液中的砷含量成正比。
与标准系列比较定量。
3试剂
3.1硫脲溶液（50g/L）。
3.2氢氧化钠溶液（2g/L）和氢氧化钠溶液（100g/L）。
3.3硼氢化钠溶液（10g/L）:
10.0g硼氢化钠溶于2g/L氢氧化钠溶液1000ml中。
3.4硫酸（1＋9）。
3.5砷标准储备液：
含砷0.1mg/mL,精确称取经100℃干燥2h以上的三氧化二砷（As2O3）0.1320g于100mL烧杯中，加入10mL氢氧化钠溶液（100g/L）溶解，用适量水转入1000mL容量瓶中,加硫酸（1＋9）25mL，用水定容至刻度。
3.6砷使用标准液：
含砷1μg/mL,吸取1.00mL砷标准储备液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。
此溶液应当日配制使用.
3.7湿消解试剂:
硝酸,硫酸,高氯酸
3.8干灰化试剂:
硝酸镁溶液（150g/L）,氧化镁,盐酸（1+1）
4仪器
原子荧光光度计。
5分析步骤
5.1样品处理
5.1.1湿消解：
固体样品1-2.5g,液体样品5-10g（mL）（精确至小数点后两位）,置于50-100mL锥形瓶中，同时做两份空白.加硝酸20-40mL,硫酸1.25mL，加粒玻璃珠，摇匀过夜，置电热板上加热消解.若消解液处理至10mL左右时仍有未分解物质或色泽变深,取下放冷,补加硝酸5-10mL,再消解至10mL左右观察,如此反复两三次,注意避免炭化.仍不能消解完全,则加入高氯酸1-2mL,继续消化至消解完全后,再持续蒸发至高氯酸的白烟散尽，硫酸白烟开始冒出.冷却，加水25mL,再蒸发至冒硫酸白烟.冷却,用水分数次将消解液转入25mL容量瓶或比色管中,加入硫脲2.5mL,定容,混匀,备测。
5.1.2干灰化：
一般用于固体试样,称取1～2.5g样品（精确至小数点后两位）,于50-100mL坩埚中，同时做两份空白.加入硝酸镁溶液（150g/L）10mL混匀,低热蒸干,将氧化镁1g仔细覆盖在干渣上,与电炉上炭化至无黑烟,550℃高温炉中灰化4小时.取出放冷,小心加入盐酸（1+1）10mL以中和氧化镁并溶解灰分,转入25mL容量瓶或比色管中,加入硫脲2.5mL,用硫酸（1+9）分次刷洗坩埚,合并定容,混匀,备测。
5.2标准系列的制备
于6只25mL容量瓶或比色管，依次加入砷使用标准液0，0.05，0.2，0.5，2.0，5.0mL（相当于砷0，2.0，8.0，20.0，80.0，200.0ng/ml），各加硫酸（1+9）12.5mL，硫脲2.5mL,补水定容,混匀,备测。
5.3样品及标准的测定
5.3.1仪器参考条件:
光电倍增管电压:
400V;砷空心阴极灯电流:
35mA;原子化器:
温度820-850℃;高度7mm;氩气流速:
600ml/min;测量方式:
荧光强度或浓度直读,读数方式:
峰面积;读数延迟时间:
1s;读数时间:
15s;标液或样液加入体积:
2ml.
5.3.2测定方式：
设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10-20分钟。
先连续用标准系列的零管进样，待数值稳定再进标样。
转入试样测量，先用标准系列的零管进样，使数值基本回零，再分别测定空白和试样消化液，每测不同的试样前都应清洗进样器。
5.4结果计算:
C1-C025
X=-----------×------
m1000
式中：
X——样品中砷的含量，mg/kg或mg/L；
m——样品质量或体积，g或mL。
C1------试样被测液的浓度,ng/ml
C0------试剂空白液的浓度,ng/ml
计算结果保留两位有效数字。
（二）食品中汞的检测：
（依据国标GB/T5009.17-2003）
原子荧光光谱分析法
1主题内容与适用范围
本标准规定了各类食品中总砷的测定方法。
本标准适用于各类食品中总砷的测定。
其最低检出浓度：
0.15μg/kg,标准曲线最佳线性范围0-60μg/L.
2原理
样品经酸加热消解后，再酸性介质中,试样中汞被硼氢化钾或硼氢化钠使还原生成原子态汞,由载气（氩气）带入原子化器,在特制汞空心阴极灯照射下,基态汞原子被激发至高能态,在去活化回到基态时,发射出特征波长的荧光,其荧光强度与汞含量成正比,与标准系列比较定量。
3试剂
3.1硫酸+硝酸+水混合酸（1+1+8）。
3.2硝酸溶液（1+9）。
3.3混合酸:
硝酸+高氯酸（4+1）混合酸。
3.4盐酸（6mol/L）。
3.5氢氧化钾溶液（5g/L）。
3.6硼氢化钾溶液（5g/L）:
5.0g硼氢化钾溶于5g/L氢氧化钾溶液中，并稀释至1000ml，现用现配。
3.7汞标准储备液：
含汞1mg/mL,精确称取0.1354g干燥过的二氯化汞于50mL烧杯中，加硫酸+硝酸+水混合酸（1+1+8）溶解后转入100mL容量瓶中,并稀释至刻度，混匀。
3.8汞使用标准液：
含汞100ng/mL,吸取1.00mL汞标准储备液于100mL容量瓶中，用硝酸（1+9）稀释至刻度，此溶液为10μg/mL；在吸10μg/mL汞标准溶液1.00mL于100mL容量瓶中，用硝酸（1+9）稀释至刻度，即为100ng/mL的标准汞溶液。
4仪器
原子荧光光度计。
5分析步骤
5.1样品处理
固体样品1-2.5g,液体样品5-10g（mL）（精确至小数点后两位）,置于50-100mL锥形瓶中，同时做两份空白.加混合酸（3.3）10mL和几粒玻璃珠,摇匀过夜，置电热板上加热消解.并及时补加混合酸（3.3）。
当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。
冷却，再加5mL盐酸（6mol/L），继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟时。
冷却，用硝酸（1+9）定容转移至25mL,混匀,备测。
5.2标准系列的制备
于6只25mL容量瓶或比色管，依次加入100ng/ml汞使用标准液0，0.25，0.50，1.00，2.00，2.50mL（相当于砷0，1.00，2.00，4.00，8.00，10.00ng/ml），用硝酸（1+9）定容,混匀,备测。
5.3样品及标准的测定
5.3.1仪器参考条件:
光电倍增管电压:
240V;汞空心阴极灯电流:
30mA;原子化器:
温度300℃;高度8.0mm;氩气流速:
500ml/min,屏蔽气1000ml/min;测量方式:
标准曲线法；读数方式:
峰面积;读数延迟时间:
1.0s;读数时间:
10.0s;硼氢化钠溶液加液时间：
8.0s；标液或样液加入体积:
2ml.
5.3.2测定方式：
设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10-20分钟。
先连续用硝酸（1+9）进样，待数值稳定再进标样。
转入入试样测量，先用硝酸（1+9）进样，使数值基本回零，再分别测定空白和试样消化液，每测不同的试样前都应清洗进样器。
5.4结果计算:
（C-C0）×V×1000
X=-----------------
m×1000×1000
式中：
X——样品中汞的含量，mg/kg或mg/L;
m——样品质量或体积，g或mL;
C------试样被测液的浓度,ng/ml;
C0------试剂空白液的浓度,ng/ml;
V------消化测试液总体积，ml;
计算结果保留三位有效数字。
（三）食品中硒的检测：
（依据国标GB/T5009.93-2003）
氢化物原子荧光光度法
1主题内容与适用范围
本标准规定了各类食品中总砷的测定方法。
本标准适用于各类食品中总砷的测定。
其最低检出浓度：
3ng/ml,标准曲线最佳线性范围0.01-0.2μg/mL.
2原理
样品经酸加热消解后，在6mol/L盐酸介质中,试样中六价硒还原成四价硒，用硼氢化钾或硼氢化钠做还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢（SeH2）,由载气（氩气）带入原子化器进行原子化,在特制硒空心阴极灯照射下,基态硒原子被激发至高能态,在去活化回到基态时,发射出特征波长的荧光,其荧光强度与硒含量成正比,与标准系列比较定量。
3试剂
3.1混合酸:
硝酸+高氯酸（4+1）混合酸。
3.2盐酸（6mol/L）。
3.3氢氧化钠溶液（5g/L）。
3.4硼氢化钠溶液（8g/L）:
8.0g硼氢化钠溶于5g/L氢氧化钠溶液中，并稀释至1000ml，现用现配。
3.5铁氢化钾（100g/L）：
10.0g铁氢化钾，溶于100mL水中，混匀。
3.6硒标准储备液：
含硒100μg/mL,精确称取100.0mg硒（光谱纯）溶于少量硝酸中，加2mL高氯酸，置沸水浴中加热3-4小时，冷却后再加8.4mL盐酸，再置沸水浴煮2分钟，准确定容1000mL，容量瓶中,并稀释至刻度，混匀。
3.7硒使用标准液：
含硒1μg/mL,吸取1.0mL硒标准储备液，定容至100mL，4仪器
原子荧光光度计。
5分析步骤
5.1样品处理
固体样品1-2.5g,液体样品5-10g（mL）（精确至小数点后两位）,置于50-100mL锥形瓶中，同时做两份空白.加混合酸10mL和几粒玻璃珠,摇匀过夜，置电热板上加热消解.并及时补加混合酸。
当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。
冷却，再加5mL盐酸（6mol/L），继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟时。
冷却，定容转移至50mL容量瓶中,混匀。
从中吸取10mL消化液于15mL比色管中，加浓盐酸2mL，铁氢化钾溶液1mL，混匀待测。
5.2标准系列的制备
于6只15mL比色管，依次加入1μg/mL硒使用标准液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mL混匀,备测。
5.3样品及标准的测定
5.3.1仪器参考条件:
负高压:
340V;灯电流:
100mA;原子化温度800℃;炉高8mm;氩气流速:
500ml/min,屏蔽气1000ml/min;测量方式:
标准曲线法；读数方式:
峰面积;读数延迟时间:
1s;读数时间:
15s;加液时间：
8s；标液或样液加入体积:
2ml.
5.3.2测定方式：
设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10-20分钟。
先连续用标准系列的零管进样，待数值稳定再进标样。
转入入试样测量，先用标准系列的零管进样，使数值基本回零，再分别测定空白和试样消化液，每测不同的试样前都应清洗进样器。
5.4结果计算:
（C-C0）×V×1000
X=-----------------
m×1000×1000
式中：
X——样品中硒的含量，mg/kg或mg/L;
m——样品质量或体积，g或mL;
C------试样被测液的浓度,ng/ml;
C0------试剂空白液的浓度,ng/ml;
V------消化测试液总体积，ml.
计算结果保留两位有效数字。
三、维生素的检测：
（一）婴儿配方食品和乳粉维生素B1的检测：
（依据国标GB/T5413.11-1997）
1方法提要：
样品在稀盐酸环境中高温水解、酶解，试样用碱性铁氰化钾衍生，正丁烷萃取后，经ODSC18反相色谱柱分离，在荧光检测器（Ex：
375nm，Em：
435nm）条件下检测，用外标法定量维生素B1含量。
2试剂：
2.1正丁醇
2.2铁氰化钾
2.3浓盐酸
2.4无水乙酸钠
2.5冰乙酸
2.6甲醇：
色谱纯
2.7硫胺素（维生素B1）：
标准品
2.8铁氰化钾溶液（10g/L）：
称取2g铁氰化钾，溶解并稀释至200ml。
2.9氢氧化钠溶液（100g/L）：
称取20g氢氧化钠，溶解并稀释至200ml。
2.10碱性铁氰化钾溶液（10g/L）：
铁氰化钾溶液（10g/L）5ml与氢氧化钠溶液（100g/L）200ml混合。
2.11盐酸溶液（0.1mol/L）：
吸取4.5ml浓盐酸，溶于500ml去离子水中。
2.12盐酸溶液（0.01mol/L）：
吸取盐酸（0.1mol/L）50ml，配成500ml。
2.13乙酸钠溶液（PH=4.5）（0.05mol/L）：
称取4.10g乙酸钠，配成1000ml。
并用冰乙酸调至PH=4.5。
2.14乙酸钠溶液（2.0mol/L）：
称取16.61g乙酸钠，配成100ml。
2.15混合酶溶液（30g/L）：
称取淀粉酶和木瓜酶各3.6g，溶溶于100ml乙酸钠溶液（2.0mol/L）。
2.16流动相配制：
用0.05mol/L乙酸钠溶液与甲醇按适当比例混合。
2.17标准溶液：
2.17.1维生素B1标准储备溶液（500μg/mL）：
精确称取0.0500g维生素B1（2.7），用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，放冰箱中保存。
2.17.2维生素B1标准工作液（0.5μg/mL）：
将标准储备溶液用重蒸水稀释1000倍，所得溶液经0.3μm滤膜过滤。
3操作步骤：
3.1样品处理：
3.1.1称样：
将样品捣碎混匀后，精确称取5.0~10.0g（内含维生素B15μg以上）于三角瓶中。
3.1.2水解：
加适量的盐酸溶液（2.11），控制样液中酸浓度在0.1mol/L左右，将三角瓶内的样液摇匀后，放入高压杀菌锅内，在121℃下保持30min，待冷却后取出，轻摇数次。
3.1.3酶解：
冷却40℃以下，分别加入2.5mL混合酶液（2.15），摇匀后，置于37℃的培养箱中过夜。
3.1.4定容：
用0.1mol/L氢氧化钠溶液调至PH值6.0左右，再用二次重蒸水定容至100mL。
3.1.5过滤：
样液经定量滤纸过滤。
3.1.6衍生：
取滤液10.00mL（3.1.5）于25mL带塞量筒中，加入5mL碱性铁氰化钾溶液（2.10）氧化后，充分混匀后再加10.00mL正丁醇（2.1）萃取，经强烈摇动，静止分层后吸取正丁醇相（上层）进样。
3.2样品测定：
3.2.1色谱条件：
C18反相色谱柱：
dp5μm,25cm×4.6mm或具同等性能的色谱柱。
流动相：
0.05mol/L乙酸钠溶液（2.13）:
甲醇（2.6）=65:
35（体积比）。
流速：
1.00mL/min。
检测器波长：
375nm，发射波长435nm。
进样量：
20μL。
4分析结果的表述：
C×F×V×100
样品中维生素B1的含量（mg/100g）=----------------------
M×1000
式中：
C——进样样液的浓度，μg/mL;
F——稀释倍数;
V——定容容积，mL;
M——样品的质量，g.
（二）婴儿配方食品和乳粉维生素B2的检测：
（依据国标GB/T5413.12-1997）
1方法提要：
样品在稀盐酸环境中高温水解、酶解，经ODSC18反相色谱柱分离，在荧光检测器（Ex:
462nm，Em:
522nm）条件下检测，用外标法定量维生素B2含量。
2试剂：
2.1浓盐酸
2.2无水乙酸钠
2.3冰乙酸
2.4甲醇：
色谱纯
2.5核黄素（维生素B2）：
标准品
2.6盐酸溶液（0.1mol/L）：
吸取4.5ml浓盐酸，溶于500ml去离子水中。
2.7盐酸溶液（0.01mol/L）：
吸取盐酸（0.1mol/L）50ml，配成500ml。
2.8乙酸钠溶液（PH=4.5）（0.05mol/L）：
称取4.10g乙酸钠，配成1000ml。
并用冰乙酸调至PH=4.5。
2.9乙酸钠溶液（2.0mol/L）：
称取16.61g乙酸钠，配成100ml。
2.10混合酶溶液（30g/L）：
称取淀粉酶和木瓜酶各3.6g，溶溶于100ml乙酸钠溶液（2.0mol/L）。
2.11流动相配制：
用0.05mol/L乙酸钠溶液与甲醇按适当比例混合。
2.12标准溶液：
2.12.1维生素B2标准储备溶液（500μg/mL）：
精确称取0.0500g维生素B2（2.5），用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，放冰箱中保存。
2.12.2维生素B2标准工作液（0.5μg/mL）：
将标准储备溶液用重蒸水稀释1000倍，所得溶液经0.3μm滤膜过滤。
3操作步骤：
3.1样品处理：
3.1.1称样：
将样品捣碎混匀后，精确称取5.0~10.0g（内含维生素B25μg以上）于三角瓶中。
3.1.2水解：
加适量的盐酸溶液（2.6），控制样液中酸浓度在0.1mol/L左右，将三角瓶内的样液摇匀后，放入高压杀菌锅内，在121℃下保持30min，待冷却后取出，轻摇数次。
3.1.3酶解：
冷却40℃以下，分别加入2.5mL混合酶液（2.10），摇匀后，置于37℃的培养箱中过夜。
3.1.4定容：
用0.1mol/L氢氧化钠溶液调至PH值6.0左右，再用二次重蒸水定容至100mL。
3.1.5过滤：
样液经定量滤纸过滤。
3.2样品测定：
3.2.1色谱条件：
C18反相色谱柱：
dp5μm,25cm×4.6mm或具同等性能的色谱柱。
流动相：
0.05mol/L乙酸钠溶液（2.8）:
甲醇（2.4）=65:
35（体积比）。
流速：
1.00mL/min。
检测器波长：
462nm，发射波长
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