USP方法与EP方法对比实验.docx

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USP方法与EP方法对比实验

USP与EP检测方法的对比实验

一实验目的：

比较USP与EP检测方法结果的区别

二实验中需要注意的重要参数：

仪器：

高效液相色谱仪，紫外分光光度计，TLC，傅里叶红外变换光谱仪，

*同种仪器使用同一台

试剂：

同种规格的试剂应尽量使用同一生产批号或同一批配制的。

人员：

同一指标必须由同一人完成。

三执行方法及标准：

1定性鉴别：

1.1EP方法：

A红外吸收光谱

在105oC下干燥样品6小时，用4mg样品录制谱图。

将所得谱图与化学参比物谱图。

B：

在0.4ml溶液S1中加入10ml水，5ml稀盐酸，2ml重铬酸钾溶液。

产生橘黄色沉淀。

C：

在1ml的S1溶液中加入0.2ml的二甲氨基苯甲醛和0.1ml的硫酸，生成粉红色溶液。

D：

在0.1ml的S1溶液中加入5ml的水和0.2ml0.05mol/l的碘溶液，生成红色溶液。

E：

取0.5g样品溶解于10ml水中，摇动，全部样品溶解。

溶液外观：

溶液S澄清，颜色浅于B6，BY6。

1.2USP方法：

A．取10ml20mg/ml的样品溶液加入20ml1当量的盐酸和5ml的重铬酸钾溶液，生成黄色沉淀。

B．用2ml纯水溶解75mg的硝酸钴和300mg的硫氰酸铵，加入5ml的20mg/ml的样品溶液，再加入3当量的盐酸，生成蓝色沉淀。

C．取5ml5mg/ml的样品溶液加入数滴碘液，溶液变成深红色。

注：

溶液S：

取1.0g样品，溶解于无二氧化碳水中并稀释至20ml。

取少量待测样品到水中，用磁力搅拌器搅拌。

溶液S1：

取2.5g样品，溶解于无二氧化碳水，并稀释至25ml。

取少量待测样品到水中，用磁力搅拌器搅拌。

参比液B6溶液的配：

黄色溶液：

用盐酸溶液（HCl/H2O=25ml/975ml）溶解46gFeCl3并定容至1000ml，滴加相同的盐酸溶液调整FeCl3·6H2O的浓度为45.0mg/ml，避光存放。

滴定：

加10.0ml上述溶液，15ml水，5mlHCl，4gKI于250ml带塞磨口锥形烧瓶中，塞上瓶塞，加100ml水，避光存放15min。

用0.1MNa2S2O3滴定游离的碘，当滴定达终点时，加0.5ml+淀粉溶液做指示剂。

1ml0.1MNa2S2O3等量于27.03mgFeCl3·6H2O。

红色溶液：

用盐酸溶液（HCl/H2O=25ml/975ml）溶解60gCoCl2（cobaltchlorideR）并定容至1000ml，滴加相同的盐酸溶液调整CoCl2·6H2O的浓度为59.5mg/ml。

滴定：

加5.0ml上述溶液，5mlH2O2的稀溶液，10ml300g/l的NaOH溶液，于250ml带塞磨口锥形烧瓶中，慢慢煮沸10min，冷却，加60ml稀H2SO4，2gKI，塞上瓶塞，轻轻摇动使沉淀物溶解。

用0.1MNa2S2O3滴定游离的碘，当滴定达终点时，加0.5ml淀粉溶液做指示剂，粉红色显示为终点。

1ml0.1MNa2S2O3等量于23.79mgCoCl2·6H2O。

蓝色溶液：

用盐酸溶液（HCl/H2O=25ml/975ml）溶解63gCuSO4）并定容至1000ml，滴加相同的盐酸溶液调整CuSO4·5H2O的浓度为62.4mg/ml。

滴定：

加10.0ml上述溶液，50ml水，12ml稀醋酸，3gKI于250ml带塞磨口锥形烧瓶中，塞上瓶塞，加100ml水，避光存放15min。

用0.1MNa2S2O3滴定游离的碘，当滴定达终点时，加0.5ml淀粉溶液做指示剂。

浅棕色显示为终点。

1ml0.1MNa2S2O3等量于24.97mgCuSO4·5H2O。

标准溶液B的配制见表1：

表1标准溶液B的配制

标准溶液

体积/ml

黄色溶液

红色溶液

蓝色溶液

盐酸（10g/l）

B（褐色）

3.0

3.0

2.4

1.6

参比液B6的配制见表2：

表2参比溶液B6的配制

参比液

体积/ml

标准液B

盐酸（10g/l）

B6

5.0

95.0

2K值：

2.1EP方法：

2.1.1标准：

理论K值≤15的聚维酮，其实际K值为理论值的85%-115%；

理论K值或平均理论K值＞15的聚维酮，其实际K值为理论值或平均理论K值的90.0%-108.0%

2.1.2试验方法：

取本品1.00（g）按无水物计算精密称定，置50ml烧杯中,加水适量使之溶解,置100ml容量瓶中并加水稀释至刻度,在25℃恒温水浴中放置1h，用最小流动时间为100S的粘度计检测。

测得相对粘度ηr，按下式计算K值。

K={〔300C㏒z+（C+1.5C㏒z）2〕1/2+1.5C㏒z-C}/（0.15C+0.003C2）

式中C为供试品的浓度（g/100ml）

2.2USP方法：

2.2.1标准：

理论K值≤15的聚维酮，其实际K值为理论值的85%-115%；

理论K值或平均理论K值＞15的聚维酮，其实际K值为理论值或平均理论K值的90.0%-108.0%

2.2.2检测方法：

称取1g（按无水物计算）样品，用50ml水溶解至100ml容量瓶中，用水稀释至刻度线。

在25+0.2oC下用毛细管粘度计测量其粘度。

在同样环境下测量水的年度。

用下面公式基数按K值：

K={〔300C㏒ηr+（C+1.5C㏒ηr）2〕1/2+1.5C㏒ηr-C}/（0.15C+0.003C2）

式中：

C：

100ml溶液中样品无水物质量

Z:

样品溶液相对于水的相对粘度。

3醛：

3.1EP方法：

3.1.1标准：

表证为乙醛，不超过500ppm

3.1.2试验方法：

3.1.2.1测试液：

精密称取1.0g待测样品，用PH=9.0的磷酸盐缓冲液溶解并稀释至100.0ml。

塞紧容量瓶，使其处于密封状态，并在60℃水浴中恒温1h，再冷却至室温，备用。

3.1.2.2参比液：

精密称取0.140g三水合三聚乙醛胺，用纯水溶解并稀释至200.0ml。

取1.0ml上述溶液置100ml容量瓶中，再用PH=9.0的磷酸盐缓冲液溶解至100.0ml。

3.1.2.3操作步骤：

取三个相同的石英比色皿（L=1cm）分别加入0.5ml的测试液，参比液，水（作空白）。

然后在每个比色器中加入2.5ml的PH=9.0的磷酸盐缓冲液和0.2ml的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，摇匀，塞紧。

将它们放在22

2℃下，保持2～3mim后，以纯水为空白，在波长为340nm的紫外分光光度计上测定每个溶液的吸收度，并记录。

然后再在每个比色皿中，加入0.05ml乙醛脱氢酶，摇匀，塞紧，放在22±2℃下保持5mim，以纯水为空白，在340nm紫外分光光度计上测定每个溶液的吸收度，记录每个数据。

计算公式

醛的含量（ppm）：

式中：

At1:

加入乙醛脱氢酶前待测液的吸光度

At2:

加入乙醛脱氢酶后待测液的吸光度

As1:

加入乙醛脱氢酶前参比液的吸光度

As2:

加入乙醛脱氢酶后参比液的吸光度

Ab1:

加入乙醛脱氢酶前空白液的吸光度

Ab2:

加入乙醛脱氢酶后空白液的吸光度

m:

不含水的聚维酮的质量（g）

C:

参比液中乙醛的浓度，按三聚乙醛胺的重量计算（转换系数：

0.72mg/ml）

3.2USP方法：

3.2.1标准：

小于0.05%

3.2.2检测方法：

3.2.2.1溶液A：

用500ml容量瓶中加入8.3g焦磷酸钾，加入400ml水石其溶解，如必要，以1当量的盐酸调节PH为9.0，用水稀释至刻度线。

3..2.2.2溶液B：

在一小玻璃瓶中加入等同于70单位的冻干乙醛脱氢酶，加入10ml水时期溶解。

3.2.2.3溶液C：

向一小玻璃瓶中加入40mg烟酰胺腺嘌呤核苷酸，再加入10ml溶液A使其溶解。

3.2.2.4标准液：

在玻璃称量瓶中加入2ml水，再加入100mg新蒸的乙醛，将此溶转移至100ml容量瓶，用几分水清洗称量瓶，转移每次的洗液至容量瓶中，用水稀释至刻度线。

在4oC下放置20小时。

取此溶液1ml至100ml容量瓶用水稀释至刻度线。

3.2.2.5样品溶液：

在100ml容量瓶用溶液A配制成20mg/ml的聚维酮溶液，在60oC水浴加热1小时，冷却至室温。

3.2.2.6空白液：

水

3.2.2.7在三个比色皿中分别加入0.5ml标准液，样品溶液。

空白液，在每个比色皿中分别加入2.5ml溶液A和0.1ml溶液C。

盖上比色皿的盖子，在20+2oC放置2到3分钟。

用水做残壁测量吸光度。

在每个比色皿中加入0.05ml溶液B，盖上盖子，在20+2oC放置5分钟。

以水做参比测量吸光度。

用下面公式计算醛的百分含量

Result=10×（C/W）×[{（AU2-AU1）-（AB2-AB1）}/{（AS2-AS1）-（AB2-AB1）}]

C：

标准液中乙醛的浓度（mg/ml）

W：

聚维酮的质量（g）

AU2：

加入溶液B后样品溶液的吸光度

AU1：

加入溶液B前样品溶液的吸光度

AB2：

加入溶液B后空白液的吸光度

AB1：

加入溶液B前空白的吸光度

AS2：

加入溶液B后标准溶液的吸光度

AS1：

加入溶液B前标准溶液的吸光度

4过氧化物：

4.1EP方法：

4.1.2标准：

4.1.3实验步骤：

4.1.3.1标准曲线的绘制

4.1.3.1.1仪器校正

将样品池与参比池中加入25mL被测物溶液与2mL13%硫酸的混合液，交换样品与参比两池在分光光度计中的位置，在405nm处参比池的透光度为100%，保持样品池的透光度≤100%，并记为:

C%。

4.1.3.1.2标准溶液的配制与标准曲线的绘制

配制H2O2含量分别为6ppm,8ppm,9ppm,10ppm,11ppm,12ppm,14ppm和15ppm的一系列标准溶液,每一浓度取25mL，滴加2mL硫酸化钛试液，静置30分钟。

以25mL被测溶液加2mL13%硫酸作为参比液,分别测定并记录该系列标准样品在405nm处的透光率，T1,T2,T3,T…T8%。

Y以H2O2的浓度为横坐标,LogA为纵坐标作图,即得到一条标准曲线（应为一条直线）。

4.1.3.1.3待测样品的配制和测定

4.1.3.1.3.1待测样品溶液

称取样品4.0克，用100毫升纯化水溶解并搅拌30分钟；

取25ml样品溶液，加入2ml硫酸氯化钛溶液，静置30分钟后用分光光度计测定该样品在405nm处的吸光度，记为：

A%；

计算logA,然后在标准曲线方程中计算处样品溶液中的过氧化物的浓度，再除以样品重量，从而计算处样品的真实过氧化物的浓度。

参比液

吸取25mL待测样品溶液，加2mL13%（V/V）稀硫酸溶液,静置30分。

4.1.4结果处理

计算出LogA,然后在标准曲线的方程中计算出样品溶液中的过氧化物的浓度,再除以样品重量，从而计算出样品的真实过氧化物的浓度。

计算公式

C=（C1/M）*100

式中：

C：

样品的真实过氧化物的浓度

C1：

待测样品溶液过氧化物的浓度

M：

称取样品质量

5甲酸：

5.1EP方法：

标准

5.1.1标准：

小于0.5%

5.1.2实验验方法：

5.1.2.1测试条件

预柱：

柱长为0.025m,内径为4mm，固定相为色谱级强酸性离子交换树脂（5-10μm）；

柱子：

长度为0.25-0.30m,内径为4-8mm；

固定相：

强酸性离子交换树脂（5-10μm）；

流动相：

用水稀释0.25ml的高氯酸至1000ml；

流速：

调节流速，使得甲酸的出峰保留时间大约为11分钟；

进样量：

50μl；

检测波长：

210nm；

柱温：

30℃；

重现性：

连续6次重复测参比液，最大相对标准差为2.0%。

5.1.2.2样品液准备：

精密称取样品2.0g，用纯化水溶解并稀释至100.0ml容量瓶中，并充分摇匀，备用。

将强酸性离子交换树脂R的悬浮水溶液转移到内径0.8cm、长20mm的玻璃管中，其间保持酸性离子交换树脂一直浸没在水中。

倾倒5ml水，且调节流速至约20d/min，当水平线接近强酸性离子交换树脂的顶层时，将测试储备液倒入柱子上，当倒了2ml时，收集1.5ml，并将其作为测试液。

5.1.2.3参比液制备：

精密称取甲酸100mg,用纯化水溶解并稀释至100.0ml，取上述溶液1ml，并用纯化水稀释至100.0ml。

5.1.2.4计算：

5.1.2.4.1校正因子（F）=A1/C1

式中：

A1：

外标物峰面积

C1：

外标物的重量，mg

5.1.2.4.2样品中甲酸的含量（外标）

甲酸=A2/（F*C2）*100%

式中:

A2:

样品出峰峰面积，mv．s

C2：

样品的重量，mg

6肼

6.1EP方法：

6.1.1标准：

小于1ppm

6.1.2试验方法：

6.1.2.1溶液的的配制

待测液：

精密称取2.5g无水样品，用25ml纯水溶解至50ml容量瓶中，加0.5mL50g/L水杨醛的甲醇液，混匀，60℃水浴加热15mim，冷却，加2.0mL甲苯，摇匀2mim，离心，取上层混合液作为待测液。

参比液：

精密称取90mg水杨醛吖嗪用甲苯溶解至100mL，取1mL上述溶液用甲苯稀释至100mL。

展开剂：

甲醇/水（2：

1）。

6.1.2.2操作步骤

薄板活化：

将硅烷化硅胶板F254薄层板在105℃－110℃活化30分钟，活化后放置干燥器中备用。

点样：

距底边1.0～1.5cm划基线，用微量进样器吸取10μL待测液进行点样，点样斑点直径控制在2～3mm，自然风干（除去原点残留的溶剂，以免残留溶剂的展开，造成不良影响）。

展开：

用展开剂将密封的层析罐饱和15分钟，将点样后的薄层板置层析缸内，（勿与展开剂接触）预饱和10分钟，然后将点样后的薄层板浸入展开剂中约0.5cm（注意勿使展开剂浸到点样斑点），展开，待上行迁移到规定高度（距基线6～15cm）时取出，置通风处自然风干。

检视：

在365nm紫外灯下观察、标记。

测比移值（Rf）：

Rf=原点至色谱斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离（水杨醛吖嗪Rf为0.3）。

判断：

测试液中水杨醛吖嗪在薄板上显示的任何斑点，不强于参比液（1ppm）的斑点。

6.2USP方法：

6.2.1标准：

小于1ppm

6.2.2溶液的配制：

标准液：

9.38μg/ml的水杨醛吖嗪甲苯溶液。

样品溶液：

转移2.5g样品至50ml离心管，混合溶解，加入500μL1：

20的水杨醛吖嗪甲醇溶液。

摇动，在60℃水浴下加热15分钟。

冷却，加入2.0ml甲苯，插上一个胶管摇动两分钟，离心。

去甲苯溶液的上清液为样品溶液。

6.2.3色谱系统：

吸附剂：

0.25mm二甲基硅烷化层析硅胶

敷用量：

10μL

展开剂：

甲醇：

水2：

1

波长：

365nm

6.2.4操作步骤：

在固定相上点上规定体积的溶液，以获得直径为2-5mm的斑点。

将半放入试验箱，保证斑点在展开剂的上方。

关闭试验箱，令展开剂沿着板上爬，直到展开剂爬到板高度的3/4，取出板用铅笔标记展开剂的边缘位置，放置干燥。

用365nm的紫外光观察斑点，水杨醛吖嗪斑点的层析迟缓因子为0.3，样品溶液的任何斑点都千与标准液。

7.残单：

7.1EP方法:

7.1.1标准：

小于10ppm

7.1.2实验方法：

7.1.2.1测试条件

预柱：

柱长为0.025m,内径为4mm，固定相为色谱级十八烷基硅烷键合硅胶（5μm）；

色谱柱：

柱长为0.25m,内径为4mm，固定相为色谱级十八烷基硅烷键合硅胶（5μm）；

流速：

调节流速，使得NVP的出峰保留时间大约为10分钟；

流动相：

乙腈：

水=10：

90（V:

V）；柱温：

40℃；

进样量：

50μL；检测波长：

235nm；

重现性：

参比液（a）连续重复进样测定六次之后，其最大相对标准偏差为2.0%；

分辨率：

参比液（b）中残单出峰时间与醋酸乙烯酯的出峰时间的间隔色谱峰最小值2.0。

7.1.2.2溶液的制备：

样品液准备：

精密称取0.25g无水样品，用流动相溶解并稀释至10.0mL，充分摇匀备用。

参比液制备：

（a）:

精密称取50mg的乙烯基吡咯烷酮，用甲醇溶解并稀释至100mL，用移液管吸取此溶液1.0mL用甲醇稀释至100.0mL，再用移液管吸取上述稀释液5.0mL，用流动相稀释至100.0mL。

（b）:

精密称取10mg乙烯基吡咯烷酮和0.5g醋酸乙烯用甲醇溶解，并稀释至100.0mL，用移液管吸取上述溶液1.0mL，用流动相稀释成100.0mL。

7.1.2.3标准曲线的绘制：

精密称取0.01gN-乙烯基吡咯烷酮至100ml容量瓶，用水溶解，并稀释至刻度线，取0.1ml，0.2ml，0.5ml，1ml，5ml，10ml分别稀释至100ml，制成0.1ppm，0.2ppm，0.5ppm，1ppm，5ppm，10ppm的溶液。

分别进样50μL，以所得峰面积对浓度做图，的到一条直线y=mx其中：

y代表峰面积x代表浓度，m为比例系数。

7.1.2.4计算方法：

根据样品的峰面积由标准曲线得出样品溶液的残留单体外标浓度。

按以下公式计算：

样品的残留单体浓度（ppm）=C2/C1

式中：

C1：

样品浓度

C2：

外标物的浓度

7.2USP方法：

7.2.1标准：

小于0.001%

7.2.2实验方法：

7.2.2.1测试条件：

流动相：

甲醇：

水=1：

4

色谱系统：

检测器：

UV235nm

柱：

保护柱：

4.0mm*25mm封尾L7柱

分离柱：

4.0mm*25mm；5μm封尾L7柱

柱温：

40oC

进样量：

50μL

7.2.2.2溶液的配制：

系统适应性溶液：

取10mgN-乙烯基吡咯烷酮和500mg醋酸乙烯酯至100ml容量瓶，拥挤春溶解并稀释至刻度线，取此溶液1ml至100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度线。

标准储存液：

5μg/ml的N-乙烯基吡咯烷酮甲醇溶液。

标准液：

用流动相稀释标准储存液至0.255μg/ml。

样品溶液：

25mg/ml的聚维酮流动相溶液。

7.2.2.3录制谱图，并计算相应的N-乙烯基吡咯烷酮的峰面积。

7.2.2.4结果的计算：

用下面公式计算N-乙烯基吡咯烷酮的百分含量：

N-乙烯基吡咯烷酮的百分含量=（rU/rS）*（CS/CU）*100

rU样品溶液中的N-乙烯基吡咯烷酮的峰面积。

rS标准液中N-乙烯基吡咯烷酮的峰面积。

CS标准液中N-乙烯基吡咯烷酮的浓

CU样品溶液中N-乙烯基吡咯烷酮的浓度。

82-P:

8.1EP方法

8.1.1标准：

小于3%

8.1.2实验方法：

8.1.2.1测试条件：

预柱：

长0.025m,内径为3mm的封端十八烷基甲硅烷硅胶（5μm）；

色谱柱：

长0.25m,内径为3mm的封端十八烷基甲硅烷硅胶（5μm）；

流速：

调节流速，使得α-P的出峰保留时间大约为11分钟；

流动相：

纯化水，用磷酸调节PH至2.4；

进样量：

50μL；

检测波长：

205nm

柱温：

30℃

重现性：

重复六次测定参比液之后，其最大相对标准偏差为2.0%

8.1.2.2溶液的配制：

待测液准备：

精密称取待测样品100mg，用纯水溶解并稀释至50.0mL。

参比液制备：

精密称取α-P100mg，用纯水溶解并稀释至100.0mL。

取上述溶液3.0mL至50.0mL容量瓶，用纯水定容至刻度，摇匀备用。

8.1.3计算：

8.1.3.1校正因子F=A1/C1

式中：

A1：

外标物峰面积

C1：

外标物的重量，mg

8.1.3.2样品中α-P的含量（外标）

A2/（F*C2）*100%

式中：

A2：

样品出峰峰面积，mv．s

C2：

样品的重量，mg

8.1.3.3判断：

样品峰面积要小于等于参比液色谱图的主要峰面积的3.0%。

9重金属：

9.1EP方法：

9.1.1标准：

小于10ppm

9.1.2实验方法：

9.1.2.1待测液的配制：

（1）将2.0g样品与0.5gMgO混合均匀，并灼烧至均匀的白色或灰白色。

如果灼烧30分钟后仍然有色，可以待降温后用玻璃棒搅拌后再次灼烧。

（2）将灼烧残渣于800℃下烘1小时。

（3）收集残余物溶解于5ml盐酸和5ml水的混和溶液中，并将溶液分成两份。

（4）取一份，在其中加入0.1ml酚酞试液，再加入浓氨水，直至显示粉红色，冷却后再加入冰醋酸至无色，再加入0.5ml冰醋酸。

如需要过滤得到的液体，并洗涤滤纸。

（5）将步骤（4）得到的试液稀释至20ml。

（6）取此溶液12ml备用。

9.1.2.2空白液的配制：

10ml纯化水加入2ml待测液配制步骤（5）的试液。

9.1.2.3参比液的配制：

（1）将2.0g样品与0.5gMgO混合均匀，加入2ml10ppm的铅标准溶液，在100～105℃下烘干，并灼烧至均匀的灰白色。

（2）将灼烧残渣于800℃下烘1小时。

（3）收集残余物溶解于5ml盐酸与5ml水的混和溶液中，并将溶液分成两份。

（4）取一份，在其中加入0.1ml酚酞试液，再加入浓氨水，直至显示粉红色，冷却后再加入冰醋酸至无色，再加入0.5ml冰醋酸。

如需要过滤得到的液体，并洗涤滤纸。

（5）将步骤（4）得到的试液稀释至20ml。

（6）取10ml所得溶液，并加入2ml的待测液。

6.4分析：

在上述各溶液中分别同时加入2mlPH为3.5的缓冲溶液并摇匀，然后加入1.2ml硫代乙酰胺混合液，并摇匀。

2分钟后观察各个比色管中的溶液。

9.1.2.4结果判断：

6.6.1前提条件：

若参比液与空白液相比，不显浅棕色；或者监测液与参比液不匹配，那么实验无效。

6.6.2判断：

若所有测试溶液的褐色都比参比液的浅，则说明被测物符合要求。

与空白液比较，铅标准液应为浅棕色。

备注：

1硫代乙酰胺试液的配制：

取硫代乙酰胺4g，加水使溶解至100ml，置冰箱中保存，临用前取混合液（由1mol/LNaoH溶液15ml，纯化水5ml及甘油20ml组成）5.0ml加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加热20秒，冷却，立即使用。

2标准铅溶液的配制：

精密称取在105℃干燥至恒重的硝酸铅0.1598g，置1000ml容量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，临用前，精密量取贮备液10ml，置100量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10ug的pb）。

3PH为3.5的醋酸盐缓冲溶液的配制见其SOP。

9.2USP方法：

9.2.1标准：

小于10ppm

9.2.2实验方法：

由于此方需使用剧毒的氰化物股本实验不做此方法的比较。

10水分：

10.1EP方法：

10.1.1标准：

小于5.0%

10.1.2实验方法：

10.1.2.1滴定甲醇中的水分（确定终点）

加无水甲醇（分析纯）于反应瓶中，至淹没电极裸露端即可。

开动电磁搅拌器，用卡尔·费休试剂滴定甲醇中的含水份，滴定主电流表指针偏转40uA处，保持1分钟不变，视为终点。

（不记录卡尔·费休试剂消耗的体积。

）

10.1.2.2卡尔·费休试剂的标定（测定水当量）

用双链球加压使卡尔·费休试剂到达滴定管的满刻度，再用微型注射器（100微升）取30uL蒸馏水（标准水），从加料口橡皮塞中注射于反应瓶中，原有的棕色即可变