生物工艺学思考题.docx

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生物工艺学思考题

50、简述通用试发酵罐的结构

通用式发酵罐：

具有通气和搅拌装置的立式圆筒形发酵罐。

是目前大生产中最常用的发酵罐。

其容积可从几升到几百吨不等。

包括罐体、搅拌系统、传热系统、通气系统。

（1）罐体

（2）搅拌系统包括：

驱动电机、搅拌轴；涡轮搅拌器、搅拌叶；挡板；轴封（端面轴封）

（3）传热系统包括夹层传热、蛇管传热（一般有4组、6组、8组）。

（4）通气系统包括单孔管、多孔环管

1、什么是种龄？

种龄确定的依据？

种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。

/

原则：

对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。

接种：

接入种子罐后直接移种到发酵罐。

双种：

两个种子罐种子接种到一个发酵罐中。

倒种：

一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐

25、为何氧容易成为好氧发酵的限制性因素？

氧是需氧微生物生长所必需的。

氧往往容易成为控制因素，是因为氧在水中的溶解度很低，培养基因含有大量的有机和无机物质，氧的溶解度比水中还要更低。

在对数生长期即使发酵液中的氧浓度达到饱和，若此时终止供氧，发酵液中的溶氧可在几分钟内全部耗尽，使溶氧成为控制因素。

21、什么是菌体的比生长速率？

产物的比形成速率？

基质的比消耗速率？

菌体的比生长速率：

单位重量的菌体瞬时增量

μ=（dx/dt）/x；单位为1/h，其中x—菌体浓度（g/L）

产物的形成比速：

单位时间内单位菌体形成产物（菌体）的量

π=（dp/dt）/x,；单位为1/h，其中p—产物浓度（g/L）

基质的比消耗速率:

单位时间内单位菌体消耗基质的量

=（ds/dt）/x；单位为1/h，其中s—底物浓度（g/L）

20、在发酵过程中无菌空气是如何获得的？

除去或杀灭空气中的微生物，

加热灭菌、辐射杀菌、静电除菌、过滤除菌。

19、什么是湿热灭菌、分批灭菌、连续灭菌？

湿热灭菌：

直接用饱和蒸汽进行灭菌。

分批灭菌：

就是将配制好的培养基放在发酵罐或其他装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行加热灭菌的过程，通常也称为实罐灭菌。

连续灭菌：

培养基在发酵罐外经过一套连续灭菌设备，以比分批灭菌高的温度和较短的时间进行快速连续加热灭菌，并快速冷却，再立即输入预先经过空罐灭菌后的发酵罐中。

2、工业化菌种的要求？

A菌的营养特征。

在发酵过程中，常会遇到要求采用廉价培养基或者来源丰富的原料

B菌的生长温度应选择温度高于40度的菌种

C菌对所采用的设备和生产过程的适应性

D菌的稳定性

E菌的产物得率和产物在培养液中的浓度

F容易从培养液中回收产物

G不易感染它种微生物或噬菌体

H产生菌及其产物的毒性必须考虑

I生产特性要符合生产工艺要求

（1）原料廉价、生长迅速、繁殖能力强、目的产物产量高。

（2）发酵中产生的泡沫少，易于控制培养条件，酶活性高，发酵周期短。

（3）抗杂菌和噬菌体的能力强。

（4）不产生或少产生与目标产物相近的幅产物。

（5）菌种遗传性稳定，不易变异和退化

（6）不产生任何有害的生物活性物质和毒素，保证安全生产。

14、在大规模发酵的种子制备过程中，为什么包括实验室阶段和生产车间阶段？

实验室阶段：

不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。

对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。

对于产孢子的微生物，获得一定数量和质量的孢子或一定数量和质量的菌丝体。

生产车间阶段：

种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。

在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。

菌丝体比孢子要有利：

缩短发酵时间，有利于获得好的发酵结果。

4、、发酵生产用的碳源有哪些？

常用的糖类有哪些，各自有何特点？

碳源:

糖类（淀粉、葡萄糖、蔗糖等）、油脂（动、植物油）、有机酸（琥珀酸、柠檬酸、乳酸、乙酸等）和低碳醇（甲醇、乙醇等）。

糖类:

葡萄糖，所有的微生物都能利用葡萄糖，但是会引起葡萄糖效应

糖蜜，是制糖生产时的结晶母液，它是制糖工业的副产物。

主要含有蔗糖，总糖可达50%～75%。

一般糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜葡萄糖蜜。

淀粉、糊精，缺点：

难利用、发酵液比较稠、一般>2.0%时加入一定的α-淀粉酶。

成分比较复杂，有直链淀粉和支链淀粉等等。

优点：

来源广泛、价格低，可以解除葡萄糖效应。

用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变进行的筛选，称为诱变育种

诱变剂：

物理：

紫外，X射线，β射线，快中子等

化学：

硫酸二乙酯（EDS），亚硝基胍等

4、讨论：

微生物（包括动、植物）可以生产我们所需的一切产品，但是涉及到工业化生产，对于某一种特定的产品，为何只有特定的微生物才具有大量表达的潜力？

A特定的微生物才具有表达该产物的基因B特定的微生物才具有特定的酶系统C特定的微生物才具有相对稳定的遗传性能D特定的微生物具有较高的改良操作性

5、自然界分离微生物的一般操作步骤？

A含微生物材料的选择B材料的预处理C所需菌种的分离D菌种的培养

E菌种的选择和纯化

样品的采取→预处理→培养→菌落的选择→初筛→复筛→性能的鉴定→菌种保藏

7、菌种选育分子改造的目的？

A增加生物合成基因量而增加抗生素产量B导入强启动子或抗性基因而增加抗生素产量C把两种不同的生物合成基因在体外重组后再导入受体内而产生杂交抗生素D激活沉默基因，以其产生新的生物活性物质或提高抗生素产量E把异源基因克隆到宿主中表达，以期彻底改变生产工艺

8、以目前的研究水平，土壤中能够培养的微生物大概占总数的多少？

什么是16sRNA同源性分析？

土壤中能够培养的微生物不到总数的1%

将目的微生物进行16sRNA序列扩增测序，将测到的序列与GENEBANK中已知的细菌序列相比较，根据亲缘关系远近最终确定种属

9、什么叫自然选育？

自然选育在工艺生产中的意义？

自然选育就是不经人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程。

自然选育在工业生产上的意义：

自然选育可以有效地用于高性能突变株的分离。

自然选育虽然突变率很低，但却是工厂保证稳产高产的重要措施。

达到纯化菌种、防止菌种衰退、稳定生产、提高产量的目的

10、什么是正突变？

什么是负突变？

什么是结构类似物？

我们生产上希望看到的，对生产有利的突变称为正突变

我们生产上不希望看到的，表现为菌株的衰退和生产质量的下降的突变称为负突变

在化学和空间结构上和代谢中间产物相似，因而在代谢调节方面可以代替代谢中间物的功能，但细胞不能以其作为自身的营养物质的物质

11、什么是诱变育种？

常用的诱变剂有哪些？

诱变育种是一种以基因突变为理论基础的育种方式

物理诱变剂：

紫外线、快中子

化学诱变剂：

A碱基类似物：

2-氨基嘌呤B与碱基反应的物质：

亚硝酸C在DNA分子中插入或缺失一个或几个碱基物质：

吖啶类物质

生物诱变剂：

噬菌体

12、什么是基因的重组？

什么是基因的直接进化？

二者有何区别？

基因重组是指按人的意志，将某一生物的遗传信息在体外经人工与载体相接，构成重组DNA分子，然后转入另一生物体细胞中，使被引入的外源DNA片段在后者内部得以表达和遗传

13、什么是培养基?

发酵培养基的特点和要求？

培养基是指一切可供微生物细胞生长繁殖所需的一组营养物质和原料

特点：

A培养基能够满足产物最经济的合成B发酵后所形成的副产物尽可能的少C培养基的原料应因地制宜、价格低廉，且性能稳定、资源丰富，便于采购运输，适合大规模储藏，能保证生产上的供应D所选用的培养基应能满足总体工艺的要求

要求：

A含有菌体生长所必须的元素和化合物

B含有合成产物所需的特定元素、前体和促进剂等

14、常用的碳源有哪些？

常用的糖类有哪些，各自有何特点？

糖类、油脂、有机酸和低碳醇等

葡萄糖、糖蜜和淀粉糊精等

葡萄糖是最容易利用的碳源，几乎所有微生物都能利用葡萄糖，但过多会过于加速菌体呼吸，致培养基中溶解氧不足

糖蜜是制糖生产时的结晶母液，含有丰富的糖、氮类化合物、无机盐和维生素等，是微生物发酵培养基价廉物美的碳源

淀粉糊精一般要经过菌体产生的胞外酶水解成单糖后再被吸收利用，可克服葡萄糖代谢过快的弊病，价格也低廉。

15、什么是生理性酸性物质？

什么是生理性碱性物质？

无机氮源被菌体作为氮源利用后，培养液中就留下了酸性或碱性物质，这种经微生物生理作用（代谢）后能形成酸性物质的无机氮源叫生理酸性物质，如硫酸胺，若菌体代谢后能产生碱性物质的则此种无机氮源称为生理碱性物质，如硝酸钠。

正确使用生理酸碱性物质，对稳定和调节发酵过程的pH有积极作用。

16、常用的无机氮源和有机氮源有哪些？

有机氮源在发酵培养基中的作用？

铵盐硝酸盐氨水；花生饼粉黄豆饼粉棉子饼粉玉米浆玉米蛋白粉蛋白胨酵母粉鱼粉蚕蛹粉尿素废菌丝体酒糟

A作为菌体生长繁殖的营养

B有的是产物的前体

常用的有机氮源有花生饼粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨等；常用的无机氮源有氨水、铵盐和硝酸盐。

有机氮源在发酵培养基中的作用有：

作为菌体生长繁殖的营养；有些还是某些产物合成的前体

17、什么是前体？

前体添加的方式？

前体是指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物分子中，而其自身的结构没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。

少量多次的流加工艺

18、什么是生长因子？

生长因子的来源？

凡是微生物生长不可缺少的微量有机物质均称为生长因子。

如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生长因子。

有机氮源是生长因子的重要来源。

19、什么是产物促进剂？

产物促进剂举例？

产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产物的添加剂。

Tween大豆酒精提取物植酸质洗净剂聚乙烯醇苯乙醇醋酸+维生素

21、培养基设计的一般步骤？

1.生态模拟

2.查阅文献：

直接、间接的信息。

3.借助优选法或正交试验法精心设计培养基的配方。

4.试验比较：

实验规模一般由定性到定量，由小到大。

摇瓶、反应器培养基研究的两个层次

摇瓶——培养基设计的第一步

反应器—最终的优化的基础配方

22、培养基成分选择考虑的问题？

A菌体的同化能力B代谢的阻遏和诱导

C合适的C、N比DPH的要求

13、种子扩大培养的目的与要求、一般步骤？

（1）目的：

其任务是要得到纯而壮的培养物，获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。

（2）种子的要求：

总量及浓度能满足要求

生理状况稳定，个体与群体

活力强，移种至发酵后，能够迅速生长

无杂菌污染

（3）一般步骤：

休眠孢子→母斜面活化→摇瓶种子或茄子瓶斜面或固体培养基孢子→一级种子罐→二级种子罐→发酵罐

24、讨论：

培养基优化在发酵优化控制中的作用与地位？

P116

25、什么是种子的扩大培养？

种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程

26、种子扩大培养的目的与要求？

其目的首先是出于接种量的需要与菌种的驯化，同时对于缩短发酵时间、保证生产水平也有帮助

A总量及浓度能满足要求B个体与群体的生理状况稳定C活力强，移种后能迅速生长D无杂菌污染

27、种子扩大培养的一般步骤？

斜面-一级种子培养（摇瓶）-二级种子培养（种子罐）-发酵

28、在大规模发酵的种子制备过程中，实验室阶段和生产车间阶段在培养基和培养物选择上各有何特点？

P144145实验室：

不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，对于不产芽孢和孢子的微生物，最终获得一定数量和质量的菌体，对于产孢子的微生物，获得一定数量和质量的孢子

生产车间：

种子培养在种子罐中进行，最终获得一定数量的菌丝体

29、什么是接种量？

对于细菌、放线菌及霉菌常用的接种量是多少？

接种量是指移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例

移入种子的体积

接种量＝————————

接种后培养液的体积

30、什么时发酵级数？

发酵级数对发酵有何影响，影响发酵级数的因素有哪些？

种子罐级数是指制备种子需逐级扩大培养的次数

种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并可减少由于多次移种而带来染菌的机会。

但也必须考虑尽量延长菌丝体在发酵罐中生物合成产物的时间提高生产率。

产物的品种、生产规模、工艺条件。

31、什么是种龄？

事宜种龄确定的依据？

接种龄是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。

通常以菌丝体处于生命力极为旺盛的对数生长期，且培养液中菌体量还未达到高峰时较为合适。

一般要经过多次试验、考察其在发酵罐中的生产能力来确定最适的接种龄。

32、读书报告：

结合具体的产品理解种子质量控制的方法，以及认识种子质量对发酵的影响？

P148

33、接种、倒种、双种？

接种是种子罐中培养的菌丝体移入另一个种子罐或发酵罐

倒种是以适宜的发酵液倒出适量给另一发酵罐做种子

双种是两只种子罐接一只发酵罐

34、什么是菌体的生长比速？

产物的形成比速？

基质的消耗比速？

维持消耗？

P150比生长速率：

单位重量的菌体瞬时增量

形成比速：

单位时间内单位菌体形成产物的量

消耗比速：

单位时间内单位菌体消耗基质的量

采用连续补料培养来维持基质消耗

35、什么是Monod方程其使用条件如何？

各参数的意义与求解？

当培养基中不存在抑制细胞生长的物质时，细胞的生长速率与基质浓度关系（Monod方程式）如下：

μ=μmaxS/（Ks+S）

μ：

菌体的生长比速

S：

限制性基质浓度

Ks：

半饱和常数

μmax:

最大比生长速度

Monod方程的参数求解（双倒数法）：

将Monod方程取倒数可得：

1/μ=1/μmax+Ks/μmaxS或

S/μ=S/μmax+Ks/μmax

这样通过测定不同限制性基质浓度下，微生物的比生长速度，就可以通过回归分析计算出Monod方程的两个参数。

36、什么是初级代谢产物？

什么是次级代谢产物？

初级代谢产物：

微生物合成的主要供给细胞生长的一类物质

次级代谢产物：

对细胞的代谢功能没有明显的影响，一般是在稳定期形成的一类化合物

37、什么是一类发酵？

二类发酵？

三类发酵？

一类发酵：

产物形成与底物利用直接相关，为生长联系型，又称简单发酵型，产物直接由碳源代谢而来，产物生成速度的变化与微生物对碳源利用速度的变化是平行的，产物生成与微生物的生长也是平行的。

在这些发酵过程中，菌体的生长、基质的消耗、产物的生成三个速度都有一个高峰，三高峰几乎同时出现。

二类发酵：

产物形成与底物利用间接相关，为部分生长联系型，又称中间发酵型，产物不是碳源的直接氧化产物，而是菌体代谢的主流产物。

它的特点是在发酵的第一时期碳源大量消耗用于菌体的迅速增长而产物的形成很少或全无，第二时期碳源大量消耗用于产物的高速合成及菌体的生长。

三类发酵：

产物形成与底物利用不相关，为非生长联系型，又称复杂发酵型，产物的生成在菌体生长和基质消耗完以后才开始，与菌体生长不相关，与基质消耗无直接关系，所形成的产物为次级代谢产物。

38、什么是连续培养？

什么是连续培养的稀释率？

由于新鲜培养基不断补充，所以不会发生营养物的枯竭，另一方面，发酵液不断取出，发酵罐内的微生物始终处于旺盛的指数生长期，罐内细胞浓度X、比生长速率μ、以及t,pH等都保持恒定。

D=F/VD稀释速率F料液流速V发酵液的体积

稀释率（D）:

补料速度与反应器体积的比值（h-1）

39、解释连续培养富集微生物的原理？

杂菌积累的速率=杂菌进入速率-杂菌流出速率+杂菌生长速率。

在基质浓度为S的情况下杂菌Z能以比D大的生长速率μz下生长，杂菌的积累速率为dZ/dt=μzZ-DZ，μz比D大的多，故dZ/dt是正的，杂菌Z开始积累，结果造成系统中基质浓度下降到S‘,此时杂菌的比生长速率μz=D，从而建立了新的稳态。

生产菌X在此基质浓度下比原有的比生长速率小的速率μx生长。

μx

40、为何融氧容易成为好氧发酵的限制性因素？

溶氧是需氧微生物生长所必需的。

氧在水中的溶解度很低，对数生长期若停止供氧，发酵液中的溶氧能够在几分钟内耗竭，使溶氧成为限制因素。

41、比耗氧速度和呼吸强度的概念？

比耗氧速度：

单位质量的细胞（干重）在单位时间内消耗氧的量即比耗氧速率（呼吸强度）来表示：

QO2=（QO2）max×CL/（K0+CL）

QO2比耗氧速率（mmolO2/g菌·h），CL溶解氧浓度，K0氧的米氏常数（mol/m3），（QO2）max最大比耗氧速率（mmolO2/g菌·h）

42、临界饱和溶氧浓度、临界溶氧浓度、氧饱和度的概念？

临界氧浓度是指不影响呼吸所允许的最低溶氧浓度。

氧饱和度=发酵液中氧的浓度/临界溶氧浓度

43、微生物的临界溶氧浓度一般多少，发酵过程中的氧容易不容易满足？

细菌和酵母为3%-10%，放线菌为5%-30%，霉菌为10%-15%。

容易满足

44、影响微生物需氧的因素有哪些？

菌种特性：

好气程度、菌龄、数量、菌的聚集状态絮状或小球状

培养基的性能：

基础培养基组成、配比，物理性质：

黏度表面张力等。

细胞浓度直接影响培养液的摄氧率，在分批发酵中摄氧率变化很大，不同生长阶段需氧不同，对数生长后期达最大值。

培养基的成分和浓度显著影响微生物的摄氧率，碳源种类对细胞的需氧量有很大影响，一般葡萄糖的利用速度比其他的糖要快。

45、发酵液中的体积氧传递方程？

其中Kla的物理意义是什么？

以单位体积的液体中所具有的氧的传递面积为a（m2/m3）

OTR=KLα（C*–CL）

KLα以氧浓度为推动力的容积氧传递系数，反映了设备的供氧能力

46、如何调节摇瓶发酵的供氧水平？

往复，频率80-120分/次，振幅8cm

旋转，偏心距转速250rpm

装液量，一般取1/10左右：

250ml15-25ml

500ml30ml

750ml80ml

47、如何调节通气搅拌发酵罐的供氧水平？

一般认为，发酵初期较大的通风和搅拌而产生过大的剪切力，对菌体的生长有时会产生不利的影响，所以有时发酵初期采用小通风，停搅拌，不但有利于降低能耗，而且在工艺上也是必须的。

但是通气增大的时间一定要把握好。

48、如何测定发酵液中的溶氧浓度，以及发酵罐的Kla?

基于极谱原理的电流型测氧覆膜电极。

平衡法KLa（c*-cL）=QO2X

49、氧的供需研究与反应器设计与放大的关系？

发酵过程放大难度在于放大时不可能同时做到几何相似、流体运动学相似和流体动力学相似。

当在小试研究时某一个对生产产生影响的重要因素没有被观察到，而这个因素恰恰在放大时称为关键因子，就会造成整个发酵过程的失败，小型发酵罐转速可调，大型发酵罐转速往往不可调

50、发酵过程中溶氧浓度监控的意义？

当OUR（r）与DO反向变化时,表明其限制因素为细胞水平的菌体代谢问题,当OUR（r）与DO同向变化时,表明其限制因素为工程水平的氧传递问题。

此时溶氧处于临界氧以下（这一结论）可客观地、动态地把握临界氧水平及氧平衡的制约因素。

A有些操作故障或事故引起的发酵异常现象也能从溶氧的变化中得到反应

B中间补料是否得当可以从溶氧的变化中看出

C可以发现是否污染杂菌

D作为质量控制的指标

51、微生物生长可分为几个阶段？

次级代谢产物在什么阶段开始合成？

可粗分为停滞期、对数生长期、生长稳定期、死亡期

可细分为延迟期、指数生长期、减速期、静止期、衰亡期

52、发酵过程的参数检测有什么意义？

生产中主要检测到参数有哪些？

在发酵生产中需要一些能在过程中出错或超过设定的界限时发出警告或作自动调节。

36、发酵过程为什么要补料？

补些什么？

在分批培养过程中补入新鲜的料液，以克服营养不足而导致的发酵过早结束的缺点。

在这样一种系统中可以维持低的基质浓度，避免快速利用碳源的阻遏效应；可以通过补料控制达到最佳的生长和产物合成条件；还可以利用计算机控制合理的补料速率，稳定最佳生产工艺。

发酵基质和缓冲液等。

PH、溶氧、尾气分析和空气流量的在线测量

53、发酵过程糖代谢、氮代谢有什么规律，为什么？

糖代谢：

特别是快速利用的糖，分解成小分子酸、醇，使pH下降。

糖缺乏，pH上升，是补料的标志之一

氮代谢：

氨基酸被利用后产生NH3，pH会上升；尿素被分解成NH3，pH上升。

微生物生长和产物合成与糖代谢有密切关系。

糖的消耗反映产生菌的生长繁殖情况，反映产物合成的活力。

菌体生长旺盛糖耗一定快，残糖也就降低得快通过糖含量的测定，可以控制菌体生长速率，可控制补糖来调节pH，促进产物合成，不致于盲目补糖，造成发酵不正常。

氮利用快慢可分析出菌体生长情况，含氮产物合成情况。

但是氮源太多会促使菌体大量生长。

有些产物合成受到过量铵离子的抑制，因此必须控制适量的氮。

通过氨基氮和氨氮的分析可控制发酵过程，适时采取补氨措施。

发酵后期氨基氮回升，这时就要放罐，否则影响提取过程。

54、测定菌的生长采取哪些方法？

不同种的微生物各采取什么方法合适？

计数法：

细菌，孢子，酵母菌等单细胞微生物

重量法：

用于单细胞、多细胞及丝状体微生物

生理指标法：

用于科学研究

55、抗生素、酶的单位的定义

56、抗生素效价的测定可采用哪几种方法？

稀释法、比浊法、扩散法

57、生物法测定抗生素效价有什么优点？

本法是利用抗生素抑制敏感菌的直接测定法，所以符合临床使用的实际情况，灵敏度很高，不需特殊设备

58、高浓度磷抑制次级代谢产物合成的机理是什么？

磷浓度过高会抑制相应酶的活性，使菌体生长旺盛，但产物产量很低，代谢向另一方向转化

59、发酵过程为什么要补料？

补些什么？

分批发酵中可防止糖量过多造成细胞生长过旺，供氧不足。

通过补料控制可调节菌的呼吸，以免过程受氧的限制。

发酵基质、缓冲液等

60、补料过多或过少对发酵有什么影响？

补料过多会造成细胞生长过旺，供氧不足，导致菌体生产力下降，同时改变发酵液流变学性质。

补料过少则使菌体过早进入衰退期，引起菌体衰老和自溶。

投料过多造成菌体细胞大量生长，无法稳定的产生发酵产物，导致菌体生产力下降，同时改变发酵液流变学性质。

如果补料过少,则使菌体过早进入衰退期，引起菌体衰老和自，同样使生产力下降。

61、准确判断发酵终点有什么好处？

依据哪些参数来判断？

提高产物产率，充分合理利用养分，降低成本。

产物浓度、过滤速度、菌丝形态、氨基酸、PH、溶氧、发酵液的黏度和外观

62、发酵过程中pH会不会发生变化为什么？

发酵过程中pH是不断变化的

（1）糖代谢特别是快速利用的糖，分解成小分子酸、醇，使pH下降。

糖缺乏，pH上升，是补料的标志之一

（2）氮代谢当氨基酸中的-NH2被利用后pH会下降；尿素被分解成NH3，pH上升，NH3利用后pH下降，当碳源不足时氮源当碳源利用pH上升。

（3）生理酸碱性物质利用后pH会上升或下降

（4）某些产物本身呈酸性或碱性，使发酵液pH变化。

如有机酸类产生使pH下降，红霉素、洁霉素、螺旋霉素等抗生素呈碱性，使pH上升。

（5）菌体自溶pH上升，发酵后期，pH上升

（6）杂菌的污染，pH下降

63、pH对发酵的影响表现在哪些方面？

PH的变化会影响各种酶活、菌对基质的利用速率和细胞的结构，从而影响菌的