实验室常规试剂配制.docx

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实验室常规试剂配制

实验室常用试剂、缓冲液的配制

1MTris-HCl（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度1MTris-HCl

配制量1L

配制方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温

度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5MTris-HCl（pH8.8）

组份浓度1.5MTris-HCl

配制量1L

配制方法1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温

度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10×TEBuffer（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA

配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

3M醋酸钠（pH5.2）

组份浓度

配制量

配制方法

PBSBuffer

组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

10M醋酸铵

组份浓度10M醋酸铵

配制量100ml

配制方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚

配制方法

1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作

均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡

使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下

放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完

全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层

后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分

层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）。

氯仿可使蛋白

质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配制方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后，移入棕色玻

璃瓶中4℃保存。

10%（W/V）SDS

2NNaOH

组份浓度2NNaOH

配制量100ml

配制方法

1.量取80ml去离子水置于100～200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100ml。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5NHCl

组份浓度2.5NHCl

配制量100ml

配制方法1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

5MNaCl

组份浓度5MNaCl

配制量1L

配制方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

20%（W/V）Glucose

组份浓度20%（W/V）Glucose

配制量100ml

配制方法

1.称取20gGlucose置于100～200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

SolutionI（质粒提取用）

组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose

配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml）。

SolutionII（质粒提取用）

组份浓度

配制量

配制方法

SolutionIII（质粒提取用）

组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH

配制量500ml

配制方法1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。

2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500ml。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

0.5MEDTA（pH8.0）

组份浓度0.5MEDTA

配制量1L

配制方法1.称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

1MDTT

组份浓度1MDTT

配制量20ml

配制方法1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22mm滤膜过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

10mMATP

组份浓度10mMATP

配制量20ml

配制方法1.称取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

组份浓度10mMATP

配制量20ml

配制方法1.称取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

30%（W/V）Acrylamide

组份浓度30%（W/V）Acrylamide

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L，用0.45mm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：

丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

40%（W/V）Acrylamide

组份浓度40%（W/V）Acrylamide

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L，用0.45mm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：

丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

10%（W/V）过硫酸铵

组份浓度

配制量

配制方法

5×Tris-GlycineBuffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）

组份浓度0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%（W/V）SDS

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

5×SDS-PAGELoadingBuffer

组份浓度

配制量5ml

配制方法1.量取下列试剂，置于10ml塑料离心管中。

2.加去离子水溶解后定容至5ml。

3.小份（500ml/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25ml的2-ME加到每小份中。

5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。

考马斯亮蓝R-250染液

组份浓度0.1%（W/V）考马斯亮蓝R-250,25%（V/V）异丙醇,10%（V/V）冰醋酸

配制量1L

配制方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。

2.量取250ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。

3.加入100ml的冰醋酸，搅拌均匀。

4.加入650ml的去离子水，搅拌均匀。

5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。

考马斯亮蓝染色脱色液

组份浓度10%（V/V）醋酸,5%（V/V）乙醇

配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.充分混合后使用。

凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用）

组份浓度50%（V/V）甲醇,10%（V/V）醋酸

配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

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