分子诊断学复习资料doc.docx

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分子诊断学复习资料doc

分子诊断学复习资料

——参照中国医药科技出版社（第二版）编写

1.分子诊断学:

是以分子牛物学理论为基础，利用分子牛物学的技术和方法来研究人体内源性或外源性牛物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、诊断、治疗和转归提供信息和依据。

1主要特点：

宜接以疾病基因为探索对象,属于病因学诊断，对基因的检测结果不仅具有描述性，更具有准确性：

可准确诊断疾病的基因型变异，基因表型异常以及由外源性基因侵入引起的疾病。

灵敏度高，便于早期诊断及疾病预防；以基因分析为基础，特异性高。

2发展简史（三个阶段）

第一个阶段：

准备和酝酿阶段1953年前，蛋白质是生命的物质基础，DNA是遗传物质基础。

（三个实验：

肺炎双球菌转化实验、体外转化实验、噬菌-体转导实验）、

第二个阶段：

DNA双螺旋结构、中心法则、PCR技术

第三个阶段：

2001年，首张人类基因组序列图谱及其他物种基因组序列的公布。

基因组分、蛋白质组学等方面的巨大技术进步，促进进入第三阶段，即以生物芯片技术为代衣的高通量密集型技术。

3主要应用：

感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤的分子诊断，个体化医疗，其他如耐药性、疗效监测，多基因疾病

2•基因：

是有功能的DNA片段，含有合成有功能蛋白质多肽链或RNA所必学的全部核甘酸序列，是遗传的结构和功能单位。

分为结构棊因和调控基因。

1结构基因：

编码蛋白质或RNA的编码序列调控基因：

保证转录功能起调控作用的非编码序列

2操纵子（operon）操纵基因与其控制下的结构基因共同组成的功能单位

3断裂基因：

指基因的内部存在间隔区，间隔区的DNA序列与该基因所决定的蛋H质没有关系。

间隔区又称为内含子。

出现在成熟RNA中的有效区段为外显子。

重叠基因：

指基因的开放阅读框（ORF）存在一个或多个核昔酸重叠的基因

跳跃基因：

乂称转座子，基因在染色体上的位置不固定，能由一条染色体跳到另一条染色体上。

必须基因：

生物体中存在的一些维持生物细胞生长所必需的基因，缺少或突变这些基因均能导致生物体死亡

3•基因组（gnome）：

细胞中一套完整单倍体的遗传物质的总和

基因组结构主要指不同的DNA功能区在DNA分子屮的分布和排列

4.C值：

基因组的大小乂称C值，常用碱基数目或碱展对数目來描述

1C值是特异的，物种不同，差异极大，真核牛物中，一般随着进化，C值增大

2C值矛盾：

又称C值悖论，牛物的进化程度与基因组大小不完全成比例的现彖

5•真核生物基因组

1）基本特征：

①有细胞核基凶组和细胞器棊因组Z分；②核基凶组以线状DNA分子的形式存在于染色质上；③棊因多数为断裂基因，有内含子结构和大量重复序列；④单顺反子，棊因家族；⑤核基凶组由染色体DNA组成，分子量较大，结构复杂，与蛋口质结合。

注意点：

①染色质的基本组成单位是核小体，由组蛋白核心和周围的DNA纽.成。

组蛋HH2A、H2B、H3和H4各2个分子组成核心即组蛋口八聚体②一个基因有n个内含子，则相应有n+1个外显子③重复序列分为4类：

单一序列、轻度重复序列（2—10个拷贝）、中度重复序列（10-12个拷贝）、高度重复序列（1万以上）④多基因家族：

一些有编码功能的重复序列，即指起源相同，序列相似，功能相关的的一组基因，分为基因簇（相对集屮分布在某-染色体的特定区域）和另一类基因家族成员在整个染色体上散在分布，甚至位于不同染色体⑤超基因家族：

由棊因家族和单基因纽成的较大的基因家族，结构不等的同源性，功能不一定相同⑥假基因：

基因家族中有的成员因突变而失活，不能表达出有活性的产物。

6、人类基因组计划（HGP）：

旨在测出人类基因组3（）亿碱基对的核昔酸序列，发现所有人类皋因并确定它们在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息，发展基因组学新技术，探讨人类基因组研究的社会法律与伦理等问题的一个国际性研究项

1）主要任务：

人类的DNA测序，包括序列图谱、遗传图谱、物理图谱、转录图谱等的绘制2）测序策略：

经典的逐步克隆法、全棊因组鸟枪法3）人类基因组概貌：

①GC含量：

平均41%（33%—65%）②CpG岛：

即二核甘酸

CG③染色体的重组率④棊因突变率：

男性多见⑤重组序列的含量，包括SINE、LINE、LTR、卫星DNA、Tn等⑥单核背酸多态性（SNP）含量⑦基因数量：

2、6万一3、9万个⑧蛋白质数量：

选择性剪接较多，使得蛋白质多而复杂⑨疾病基因⑩人基因组序列：

99、99%相同4）人类基因组多样性：

同一人种或不同人种基因组存在或多或少的差异。

通常DNA分子中某一特定位点的变异频率低于1%为基因突变，高于1%为DNA分子多肽。

人类DNA分子多肽性的产生有以下儿种主要方式：

①重复序列单元的拷贝数变异，如微卫星DNA多态性②转座因子导致的分子多肽，如Alii序列多态性③单个核昔酸的变异即SNP

7、原核生物基因组

1）—•般特点：

①基因组相对较小，通常为一条双链DNA分子②功能相关的基因高度集中，构成操纵子③重复序列少，大多数的蛋白质基因保持单拷贝形式，而RNA基因常是多拷贝④没有内含子，基因是连续的⑤多顺反子，构成转录单位⑥绝人部分DNA都是川于编码蛋口质的，只有很少不编码序列⑦DNA分子屮有各种功能区多顺反子（polycistron）：

操纵子中常常有一至多个功能相关的结构基因串连一起，受同一个调控区调控，转录在同一个mRNA分子中。

8、质粒是多数细菌和某些真核生物细胞的染色体外的双链环状DNA分子

1）遗传特性：

①双链环状DNA分子，且为共价闭合环状DNA（cccDNA）②质粒复制有赖于宿主细胞的复制，但

其自身棊因可控制合成的吋限及拷贝数③垂直传递④不影响宿主细胞代谢，但可能

赋予宿主细胞新的表型⑤治理的复制方式为半保留复制。

单向/双向，单向，双向。

2）特性：

①质粒的不相溶性：

两种不同质粒如果利川同一复制和维持机制，会在复制和随后向子代细胞分配的过程

中相互竞争，因而不能在同一宿主细胞内稳定存在，其中一种质粒将被丢失的现彖。

这两种质粒属于同一不相容群（InC）。

②质粒的稳定性：

质粒在宿主细胞内能稳定存在不被丢失称为质粒的稳定性。

③质粒的转移性。

4质粒的选择性标记。

3）①质粒的拷贝数：

在正常生长条件下，每个宿主细胞或每条染色体所对应的平均质粒数。

由其携带的复制子决

定。

②复制子是一个复制单位，包括复制起点及其相关的调控元件。

③质粒的复制由复制子少调节因子协同作用来启动。

4）松弛型质粒：

以RNA为调节因子的质粒的复制不需任何自身编码的蛋门质，完全山宿主细胞提供的寿命较长的酶及其他蛋白质因子來完成，这些质粒的复制不受猶主细胞的控制，以所谓的“松弛”方式进行。

属髙拷贝质粒。

严紧型质粒：

携带与蛋白质调节因子相互作用的复制子的质粒。

属低拷贝质粒。

9.转座因子：

又称可转座元件，指能在基因组中从一个位点移至另一位点的DNA序列。

1）①转座现象或移位：

指山可移动I大I子介导的遗传物质重排现象。

②转座作用结果：

a.导致宿丄细胞基因组DNA的插入突变或基因重排，是毗邻基因失活或表达水平下降。

b.转座因子被认为是基因组进化的重要推动力量，还可作为遗传学研究及基因工程的工具。

2）原核生物转座因子的种类：

插入序列（IS）、转座子（Tn）、可转移性噬菌体。

1IS：

a.IS两端有正向重复序列（DR）和反向重复序列（IR）；b.IR结构的对称使IS既可正向插入靶位点,也可反向插入靶位点；c.IS的中间位编码序列，仅编码与转座有关的酶，含有依赖p因子的转录终止信号及终止密码,从而导致插入位点的基因失活或表达水平下降。

2Tn：

基因组中存在的能自主复制和位移的一些DNA序列。

特点：

乩两端有反向重复序列；b.转座后靶位点重复序列是正向重复序列；c.编码与转座有关的蛋白；d.可以在基因组中移动。

3）转座类型：

复制型转座、非复制型转座。

复制型转座：

转座因子在转座过程中能够复制，结果是供体与受体都有一个拷贝的转座因子。

需转座酶和解离酶。

非复制型转座：

转座因子不复制，直接从一个位点移到另一个位点，结果是供体失去一个转座因子而受体得到一个转座因子。

需转座陋。

10.病毒基因组：

1>特点：

①只有一种核酸，4种类型，为双链DNA、单链DNA、双链RNA、单链RNA②核酸大小差别较大（1.3><10咕卩~3.6><10®）③具有启动子和操纵子结构④具有重叠结构

2>结构：

①帽子和poly（A）尾结构，对RNA起保护作用，并于病毒感染性有关

2黏性末端：

基因组双链两端具有能够互补的单链DNA部分

3末端正向重复序列：

乂称末端冗余，指病毒双链DNA分子两端有一段相同的核背酸

4末端反向重复序列（ITR）：

指病毒基因组两端的反向互补垂复序列

5重叠基因：

指两个或两个以上基因的ORF共有一段DNA序列

6分段基因：

指病毒基因组由儿条不同的核酸分子组成，多兀于tDNA病毒，RNA病毒及双链RNA病毒

7CTR：

即长末端重复序列，逆转录病毒逆转录后生产的dsDNA'P，两端有CTR结构

11•核酸分子杂交基本原理：

利川核酸变性和复性的性质，使具有一定同源性的两条核酸单链在•定条件下按照碱基互补配对原则形成异质双链的过程。

（分子杂交可以发生在同源或异源的DNA链与DNA链之间，也可在RNA链与DNA链之间形成）

12•核酸变性（denaturation）：

指维系核酸双链互补碱基对之间的氢链断裂变成单链的过程，并不涉及共价键的断裂。

（黏度减小，浮力密度增人，260nm处紫外吸收增加，活性降低）（热变形，酸碱变性，化学变性）

Tm（meltingtemperature）：

通常把热变性过程中DNA变性一半所需要的温度成为融解温度。

DNA的Tm值在

82〜95°CZ间

Tm影响因素：

DNA的均一性，碱基组成，溶液的离子强度，pH,变性剂

13.DNA复性（mnatiimtion）：

当变性条件缓慢去除后，两条彼此分开的互补单链重新缔合成双螺旋结构的过程。

（许多理化性质恢复，但热变性后骤然冷却，DNA则不可复性）

1退火（annealing）：

热变性后，将温度缓慢降低而使DNA逐渐冷却即可复性的过程。

2复性过程分两步：

成核作川（nucleation）和拉链作川（zippering）

成核作用：

两条核酸单链随机碰撞形成暂时局部双链，如果局部双链周I韦I碱基不能配对，则迅速解离，重新碰撞直到找到止确的互补序列，这个过程称为成核作用。

拉链作用：

在成核的基础上，两条单链的其余部分碱基迅速互补配对，就像拉链那样形成完整的双链分子。

3复性速度用Cotm衡量,Co：

单链DNA的起始浓度（mol/L）,t为时间（s）,CotI/2表示单链DNA的起始浓度与复性一半所需时间Z和，与复性速度成反比，与DNA复杂度有关影响因素：

DNA的分子大小和复杂度，离子强度，DNA的浓度，温度

14•探针（probe）：

广义上指的是能特异性与特定靶分子发生相互作川，并能被某些方法所检测的分子

核酸探针：

指能与特定靶基因序列发生特异性互补结合，并可川特殊方法检测的被标记的已知核酸序列

15•核酸探针的种类：

基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针、寡核背酸探针

1）基因组DNA探针：

①制备方法：

a.分子克隆b.采用聚合臨链反应扩增特定的基因纽DNA片段②优点：

制备方法简便、省时、易得，稳定不易降解，标记方法多样也较成熟

2）cDNA探针：

©cDNA（complementaryDNA）：

扌旨与mRNA互补的DNA分子，它是以mRNA为模板，遵循碱基上补配对原则，由逆转录酶催化合成②优点：

棊因组DNA优点，不存在内含子和其他高度重复序列，尤其适用于基因表达研究（但制备困难）

3）RNA探针：

杂交效率高，杂交分子稳定，不存在高度重复序列，非特异性朵交较少，不易标记，易降解

4）寡核苛酸探针：

①特点：

a.根据实验需要合成b.长度一般为20〜50MC.可以识别靶分子的单个碱基变化d.特异性不高，杂交信号不强②设计原则：

a.探针长度一般20〜50Mb.剪辑成分，G（c含量在40%〜60%为宜c.不应存在大于4bp的互补序列d.避免同一•碱基垂复出现多于4次e.同源性不应超过70%或有连续8个上碱基同源

16核酸探针的标记，两大类

1）放射性核素：

最常用，灵敏度和特界性极高，但半衰期短，检测时间长，污染环境

非放射性核素：

稳定、安全、经济、检测时间短，但灵敏度

2）理想标记物：

①高灵敏度②标记物与探针结合后，不影响碱基对的特异性，杂交体的稳定性及其Tm值。

3检测方法应高灵敏度、特异、假阳性率低④标记物与探针结合后稳定，保存时间长⑤标记物对环境无污染、对人体无损伤、价格低廉。

17放射性核素的标记常用32P35S3H,25I,31I

1）类型特点：

©32P：

比放射活性3.4X1014Bg/nunol.最常用。

放射性强，释放的0粒子能量高，穿透能力强，灵敏度高，半衰期仅14.4d,射线散射严重而影像分辨率，影响结杲分析。

②％比放射活性5.55X1013Bg/mmol.释放的B粒子较叩稍低,半衰期87.Id,灵敏度比叩低,散射作用弱，分辨率较高，适用于原位杂交。

@3H：

比放射活性1.07X1012Bg/mmob释放的B粒子能量较低,半衰期12.1年,采用延长曝光时间的方法可产生本底低，分辨率高的结果，金庸与细胞原位杂交，可反复使用，对坏境影响人。

4125］、m1：

释放B粒子和丫射线，具有较高敏感性，较强分辨率，危害性大。

2）标记法：

采用体外标记法，包括化学法和酶法

化学法：

利用标记物分子和探针分子上活性基团间的化学反应，将标记物结合到探针分子的标记方法。

酶法：

预先将标记物标记在核井酸分子上，经过酶促反应将标记号的核井酸分子或标记基因掺入或交换到探针分子屮的方法，有切口平移法，随机引物法，末端标记法，PCR标记法。

1切口平移法：

DNaselMg2+随机切割3，—OH引物EcoliDNA聚合酶IdNTP切除亍端的核甘酸合成互补单链

2随机引物法：

随机引物是人工合成的由6个核莒酸残基构成的寡核背酸片断的混合物。

Klenow酶

3末端标记法：

1）3,端标记法：

限制性内切酶、klenow臨2）5,端标记法;T4噬菌体多核甘酸激酶（PNK）标记法、碱性磷性磷酸酶（ALP）切除亍端的磷酸基团PNK作用转移

18•非放射性核素标记：

生物素、地高辛、光敬生物索、荧光索、酶标法（ALPHRP）

19•核酸探针的检测：

放射性：

①放射自显影②液休闪烁计数法

非放射性：

偶联反应、显色反应（酶促显色法、荧光法、化学发光法）

20•核酸分子杂交的类型：

固相杂交和液相杂交两大类

1）①液相杂交：

将待测核酸样品和核酸探针同时放入杂交液中进行反应，然后分离杂交分子和过量的未杂交探针，再对杂交结果进行检测

②固相杂交：

预先将待测的靶核酸链固定在固相支持物上，然后与溶解于杂交液屮的核酸探针进行杂交反应,洗去支持物上未参加反应的游离核酸探针，再检测杂交信号，分析结果。

2）常用固相杂交：

SouthernEP迹杂交NorthemEP迹杂交、菌落原位杂交、斑点杂交、狭缝杂交、原位杂交

3）SouthernEP迹杂交:

指经凝胶电泳分离的待测DNA片断转印并结合到一定固相支持物，然后川标记的探针DNA分子检测靶DNA的一种方法。

基本过程：

限制性核酸内切酶消化待测DNA-琼脂糖凝胶电泳分离DNA片断一DNA变性并转卬到固相支持物上一预杂交一与特异DNA探针杂交一杂交信号检测及结果分析

常用固相支持物：

尼龙膜、硝酸纤维素膜。

（1）Northern印记杂交：

指待测RNA（主要是mRNA）从凝胶转印到固相支持物上，与标化的DNA探针进行杂交的卬迹技术。

与Sowthern卬迹杂交不同点：

a.RNA易被环境中存在的RNA酶降解，应避免RNA酶污染b.RNA需要在变性剂存在下进行电泳，保持其单链状态，防止RNA分子形成二级结构，不能用碱变性c.印迹前将含有变性剂的凝胶用水浸泡除去。

21.聚合酶链反应（Polymerasechainreaction,PCR）技术是指生物技术领域屮最重要的卩U项技术之一（细胞融合技术，分子克降技术，蛋白工程技术，基因扩增技术）特异，敏感，高效，简便，重复性，移易化等优点。

22.PCR的原理：

模拟体内DNA半保留复制过程，通过变性，退火，延伸，三步反应的循环完成，靶基因的双链DNA通过变性解链为旳链，特异的引物通过退火与单链DNA模版结合，在靶DNA的指导下引物的3'端延伸靶DNA的互补链完成一个循环，理论上每次循环结束后靶DNA扩增一倍，即靶DNA数目以才儿何级数方法。

（1）反应体系：

模版DNA,四种dNTP,引物，TaqDNA聚合酶、缓冲液（含Mg2+）

（2）变性（denaturation）:

模版DNA经加热至95°C左右一定时间后，使模版DNA双链或经PCR扩增形成的双链

DNA解离，使Z成为单链。

退火（annealling）:

将下降至适宜温度（一般较Tm低5°C）引物与变性的DNA单链在碱基互补的基础上形成

引物，模版杂交双链。

延伸（cxcnsion）:

将温度上升至在70°C左右时，TapDNA聚合卿催化以引物为起点的从5'—3'端DNA链延伸反应，随着4种dNTP的掺入，合成新的DNA互补链。

（3）动力学:

y=A（l=R）n估算PCR产量，A为起始模板量，R为扩增效率

23•扩增产物的检测与分析

（1）凝胶电泳：

琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳。

（2）PCR产物的酶切技术：

PCR限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）

（3）PCR单链构象多态性分析PCR-SSCP

（4）核酸探针杂交分析

（5）PCR-酶联免疫吸附法

（6）PCR产物测序

25.PCR衍生技术：

巢式PCR,逆转录PCR,多重PCR,锚定PCR,反向PCR,免疫PCR,原位PCR,定量PCR

（QPCR）

26•荧光定量PCR技术：

（1）慕木原理：

棊于荧光能量传递技术，通过对PCR扩增反应每个循环结束吋产物荧光信号的检测，对起始模版进行定量分析。

2）实时荧光定量（reallimeFQ-PCR）：

在荧光定量PCR反应中，引物的荧光化学物质，在每经过一个循环后，产生一个荧光强度信号，利川荧光信号累积及荧光强度变化实现对整个PCR过程实现监测。

荧光阈值：

设定在荧光扩增曲线上处于荧光信号指数扩增阶段是的任意一个值，一般荧光阈值设置在3-15个循环内Ct值：

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数，与模板的起始拷贝数的对数存在线性关系

3）荧光定量PCR技术：

荧光染料法和荧光探针法

常用染料:

SYBBGreenl

探针法：

TaqMan技术，lightCycler探针技术，分子信标技术，复合探针法

各法原理图见P86-88

P90表5-4不同核酸扩增技术比较

27.实验区分为四个独立的工作区域：

试剂贮存和准备区，标本制备区，扩增区，扩增产物分析区

四个基本原则：

1.四个区域必须是相互独立的，2.各区的仪器设备及物品必须是专川的，3.各区不能直通，应没有缓冲间，4.产物分析区产安装排风扇或其他抽风装置

十六字口诀：

各区独立，注意风向，因地制宜，方便工作。

还应设立临床标本接收区

28•室内质量控制（IQC）室外质量控制（EQC）

IQC：

包括测定前的质量控制，统计学质量控制，质量控制的评价等

29.DNA序列测定：

即DNA-级结构的测定，指用人工的方法测定并分析核酸的碱基组成及排列顺序。

它是研究

基因结构，功能及其关系的前提，是临床疾病的分子诊断最为精确的判定依据

四种常用方法：

Sanger双脱氧链末端终止法，Manxam-Glibert化学降解法，焦磷酸测序技术，杂交测序法各原理及图见P100,103,105,106

自动化测序与传统方法比较

1.

放射性核索（传统）

放射口显影酶反应方法凝胶电泳

标化物不同：

荧光染料（自动）

2.加样方式不同：

3.监测手段不同：

扫描仪

PCR循环测序反应方法集束话的毛细管电泳

特点：

简便，快速，结果准确可靠，安全无污染，测序能力增强

30、生物芯片技术：

指通过微加工和微电子技术，在固相基质表面集成了成T上万密集排列的分子微阵列，以实现对组织、细胞、核酸、蛋白质及其他生物分子进行高效、准确、高通最检测（微阵列芯片、微流体芯片）

常用：

基因芯片、蛋口质芯片、组织芯片、液相芯片、微缩芯片实验室等。

31、基因芯片（GeneChip）：

乂称DNA芯片，DNA微阵列；将人量的基因片段有序的、高密度的固定排列在载体上制成点阵，称Z为芯片。

其原理：

经过标记的待测样品DNA通过与芯片上特定位置的探针按碱基配对原理杂交后，经激光聚集荧光检测系统等对芯片进行扫描，通过检测杂交信号强度來获取样品分子的数量和序列信息，丿kl计算机软件进行数据比较和分析，从而对基因序列及功能进行人规模、高通量研究。

主要包括四个基本技术环节：

芯片微阵列制备、样品制备及标记、样品与基因芯片的杂交、信号的检测及分析。

32、蛋白质芯片：

指固定于支持节制上的多肽或蛋白质构成的阵列。

据川途分：

蛋白质功能芯片、蛋白质检测芯片。

据载体分：

蛋白质微阵列、微孔板蛋白芯片、三位凝胶块芯片。

还可分：

抗体芯片、抗原芯片、肽芯片、小分子芯片、适配体芯片。

33、组织芯片：

也称组织微阵列（TMA）,将成百上千个不同纽织标本按预先设计的顺序排列固定在一•张载玻片上

所成的微阵列。

34、液相芯片：

乂称悬浮阵列，流式荧光技术，是基于XMAP技术的新型生物芯片技术平台。

其核心技术是把微

小的聚苯乙烯微球用荧光染色的方法进行编码，然后将每种颜色的荧光编码微球共价交联上针对特定检测物的寡核莒酸或蛋白质探针。

优点：

①仅需少量样本即可同吋定性、定量检测同一-样本中的多种不同口的分子——最突出优点②高通量、高效率③灵每攵度高④线性范围宽⑤重复性好⑥操作简单⑦灵活性好

35、微缩芯片实验室：

又称微型牛物（全：

这个字不认识）分析系统（U—TAS）

把生物和化学等领域所（波0L•谱：

不认识）及的样品制备，生物化学反应和检测分析的整个过程集成化，并缩微到一张芯片上口动完成，形成所谓的微型全分析系统。

36、分子诊断法：

（目的物：

病原微牛物的DNA或RNA）

对病原体特异性核酸序列的杂交，对病原体基因序列的限制性内切酶酶谱分析，限制性片段长度多态性连锁分析，对病原体基因保守序列的扩增检测基因芯片技术，支链DNA技术依赖核酸序列的扩增,连接酶链式反应等。

乙型肝炎病毒：

PCR

临床意义：

HBV感染的早期诊断，监测治疗效果，判断病情，指导制订合理的治疗方案。

其他方而结核分枝杆菌TB：

TBDNA检测可采用PCR,FQ—PCR,竞争性PCR,免疫杂交PCR等，PCR—SSCP血红蛋白病两类：

①由于珠蛋白一级结构的变化所导致的显常血红蛋白病；②由于珠蛋白多肽链的组成比例改变和珠蛋白含量降低所导致的地中海贫血

镰状细胞贫血：

P珠蛋白基因中第六位密码子的序列由原來的GAC改变为GTG,使对应的氨基酸由原来的谷氨酸一绻氨酸用RE酶切法诊断

地中海贫血：

分为a地贫，B地贫，Y地贫，§地贫，地贫，YB地贫等，表型基凶型见P195表11・2第一章：

概念三个阶段

第二章：

一些基木概念及各基因组特点质粒转坐囚子基因多态性SNP

第三章：

各酶概念及作用特点载体概念分类常用载体及筛选方法基本结构分子