卷D04输血科技术标准操作规程.docx
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卷D04输血科技术标准操作规程
文件编号：
CQJY/CBT/SOPA/0
重庆市第九人民医院
用血质量管理体系
技术性操作规程
（依据GB/T19001-2008idtISO9001：
2008编制）
编制人：
艾万辉
审核人：
徐育云
批准人：
发布日期：
2013年4月30日
实施日期：
2013年4月30日
CBT-SOP-01-2013
试管法鉴定ABO血型标准操作规程……………………………………………
3
CBT-SOP-02-2013
试管法鉴定RhD血型标准操作规程……………………………………………
7
CBT-SOP-03-2013
微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程………………
9
CBT-SOP-04-2013
盐水法交叉配血试验标准操作规程………………………………………………
13
CBT-SOP-05-2013
凝聚胺交叉配血试验标准操作规程………………………………………………
15
CBT-SOP-06-2013
微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程……………………………………
17
CBT-SOP-07-2013
新生儿溶血病（HDN）血型血清学检查标准操作规程……………………………
20
CBT-SOP-08-2013
红细胞不规则抗体筛选标准操作规程……………………………………………
24
CBT-SOP-09-2013
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程……………………………
27
CBT-SOP-10-2013
输血相容性检测室内质控标准操作规程…………………………………………
29
CBT-SOP-11-2013
输血科室间质评标准操作规程……………………………………………………
32
CBT-SOP-12-2013
输血科试剂质量管理操作规程……………………………………………………
35
CBT-SOP-13-2013
输血科配制自备试剂的标准操作规程……………………………………………
40
CBT-SOP-14-2013
重庆市第九人民医院临床输血操作规程…………………………………………
43
CBT-SOP-15-2013
细胞洗涤离心机（XTL4.7型）标准操作规程……………………………………
46
CBT-SOP-16-2013
台式低速离心机（XKA-2200型）标准操作规程…………………………………
48
CBT-SOP-17-2013
SANYO的MBR-304DR型冰箱标准操作规程…………………………………
51
CBT-SOP-18-2013
XL-200卧式血液速冻箱标准操作规程…………………………………………
53
CBT-SOP-19-2013
DiaMed-ID-Incubator37SⅠ型孵育器标准操作规程……………………………
55
CBT-SOP-20-2013
ID-Centrifuge12SⅡ卡式离心机标准操作规程…………………………………
56
CBT-SOP-21-2013
XJ-8血液解冻机标准操作规程……………………………………………………
57
CBT-SOP-22-2013
Haier的HXC-358型血库专用血液储存冰箱标准操作规程……………………
58
CBT-SOP-23-2013
FYQ型免疫微柱孵育器标准操作规程……………………………………………
60
CBT-SOP-24-2013
TD-3A血型血清学专用离心机标准操作规程……………………………………
62
CBT-SOP-25-2013
封管热合器标准操作规程…………………………………………………………
64
试管法鉴定ABO血型标准操作规程
1、目的
为规范输血科ABO血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。
2、适用范围
本文件适用于本院输血科ABO血型鉴定的操作过程的规范化管理。
3、方法及原理
3.1方法：
试管凝集法
3.2原理：
根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
4、试剂
4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；
4.25%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；
4.3受检者血清或血浆；
4.4受检者5%红细胞盐水悬液;
5、样本采集及处理
用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，由医护人员或专门人员将患者标本送交输血科。
6、操作步骤
6.1正定型：
取洁净小试管3支，分别标明抗A，抗B和抗A+B，用滴管分别加抗A，抗B和抗A+B。
分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。
6.2反定型：
另取洁净小试管3支，分别标明A，B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A，B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。
立即以1000r/min离心1min。
6.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
7、结果判断：
凝集为阳性（+），不凝集为阴性（-），ABO定型结果如下表
ABO正反定型结果
标准血清+被检者红细胞
血检者
标准红细胞+被检者血清
血型
抗A
抗B
抗A+B
A细胞
B细胞
O细胞
+
-
+
A
-
+
-
-
+
+
B
+
-
-
-
-
-
O
+
+
-
+
+
+
AB
-
-
-
8、干扰：
8.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放冰箱保存，以免细菌污染。
8.2试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除去存在于红细胞中的抗体及可溶性抗原。
8.3试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
8.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
8.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20～24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。
8.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止假阳性或假阴性结果。
8.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
8.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
9、凝强度判断:
观察结果应仔细，首先注意有无凝集，再按下述情况说明凝集强度：
9.14＋：
红细胞凝聚成一大块，血清透明清晰。
9.23＋：
红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
9.32＋：
红细胞凝集分散成多个小块，可见游离红细胞。
9.41＋：
肉眼可见大颗粒，周围有较多红细胞。
9.5±：
镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多红细胞。
9.6混合凝集视场（MF,mixedfield）：
镜下可见数个红细胞凝集，大多数红细胞分散分布为MF。
阴性（－）：
镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
10、质量控制：
单克隆抗-A（B）试剂应在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性及效价，试剂红细胞的质控执行《输血科试剂质控标准操作规程》，每天常规血型鉴定前先做室内质控（具体执行《输血科室内质量控制的标准操作规程》），结果在控后方可将常规检查的报告发出。
11、医学解释：
11.1血以成为临床上必不可少的治疗手段。
输血必须输入ABO同型血，否则输入的红细胞可能迅速被破坏，导致严重的溶血反应，常常威胁生命甚至造成死亡。
所以在临床工作中必须杜绝ABO血型不合的血液输入人体，这以显得十分重要。
11.2肾、皮肤等器官或组织移植时，必须保证供体与受体之间ABO血型符合，否则将发生排斥反应，造成移植术失败。
11.3ABO血型不合所致的新生儿溶血病，可导致流产、死胎或因出生后抢救不及时而致死等。
目前早期诊断仍依赖于ABO血型血清学检查。
11.4ABO血型在人群中的分布，可用作遗传距离和聚类的分析，现以知道中国人氛围北方、南方两大群，前者以较高B基因，后者以较高O基因为特征。
11.5其他：
如亲子鉴定，法医学上对可疑血迹、精斑、毛发等ABO血型鉴定。
12、最常见的误差来源：
12.1自制分型血清抗体效价太低、亲和力不强，造成定型不准。
12.2患者纤维蛋白原升高或异常蛋白质血症（如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症），可产生缗钱状假凝集。
新生儿脐带血中喊有华顿胶（Whartonjally）或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。
12.3病人输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物，可引起红细胞聚集，易误认为凝集。
12.4血清中存在不规则抗体，如A2和A2B型患者血清内有A1抗体，能凝集A1红细胞。
此外还有I抗体等。
有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物质可中和抗体血清的抗体，从而抑制反应，造成假的不凝集。
12.5婴儿尚未产生自己的抗体（出生3~6个月后方逐渐产生），或有从母亲获得的血型抗体，故新生儿不宜用血清作反向定型。
12.6老年人血型抗体水平会下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病、遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。
可出现反向定性错误。
12.7用近期内输过血的患者血液做对照红细胞，其红细胞是多种红细胞的混合物。
12.8病人红细胞已经被大量抗体包被（如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞），或红细胞悬浮于含高浓度蛋白的介质中，红细胞都回自发地发生凝集。
12.9有些人红细胞膜有遗传或获得性异常，易发生多凝集（较罕见）。
12.10A或B的弱抗原易判断为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。
12.11由于患白血病或某些恶性肿瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原变弱。
婴儿及老年人的红细胞抗原较青壮年弱，在实验室内保存过久的红细胞及部分衰老的红细胞抗原性也会减弱。
11.12当用血清配制红细胞悬液时，若血清中有高浓度血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。
11.13红细胞被细菌污染。
12.14嵌合体（chimera）现象，此处指混和细胞群，见于异卵双生子。
如有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。
12.15用了不洁的玻璃器皿或使用了严重污染的血清、红细胞可出现假阳性。
试管沾染了洗涤剂会造成假阴性。
12.16红细胞与血清的比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。
12.17将出现的溶血现象（阳性）误认为阴性结果。
12.18温度过高会造成假阴性。
因为ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4~22℃，如达37℃凝集力即下降。
12.19弄错标本、试剂、标签，或出现记录错误。
13、相关文件
13.1《全国临床检验操作规程》第三版；
13.2试剂盒说明书。
13.3输血科《输血实验室管理程序》。
13.4《临床输血质量管理指南》田兆嵩主编。
试管法鉴定RhD血型标准操作规程
1、目的
为规范输血科RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。
2、适用范围
本文件适用于本院输血科RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。
3、方法及原理
3.1方法：
试管凝集法
3.2原理：
Rh血型抗体多系不完全抗体，属IgG型。
因分子短小，与红细胞上的抗原作用后，不能使红细胞靠拢凝集。
木瓜酶能破坏红细胞表面上的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞之间的排斥力，红细胞得以靠拢，在不完全抗体的作用下，红细胞便出现凝集。
4、试剂
市售IgG型抗D标准血清；受检者5%红细胞盐水悬液。
5、标本采集及处理
同ABO血型检查。
6、操作步骤
6.1取小试管1支，用蜡笔标记，加入抗D血清1滴，再加5%受检者红细胞盐水悬液1滴，混匀，立即以1000r/min离心1min。
6.2将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
7、结果判断：
受检管凝集，表示受检红细胞上有D抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有D抗原，Rh（D）阴性。
8、临床意义
8.1Rh血型与输血。
Rh阴性患者如输入Rh阳性血液，可刺激患者产生免疫性抗体，当第二次再接受Rh阳性血液时，即发生溶血性输血反应。
Rh阴性妇女如孕育过Rh阳性胎儿，当输入Rh阳性血液时亦可产生溶血性反应，严重者可导致死亡。
8.2Rh血型与妊娠。
Rh阴性母亲孕育了Rh阳性胎儿后，在胎盘有小的渗漏时，胎儿血液可渗入母体血循环中，母体受到胎儿红细胞的刺激可产生相应的抗体。
此种免疫性抗体能通过胎盘而破坏胎儿红细胞，如果第一胎所产生抗D抗体效价较低，一般对胎儿无明显影响。
如再次妊娠Rh阳性胎儿时，抗D效价很快升高。
此抗体通过胎盘进入胎儿体内而发生新生儿溶血病。
9、质量控制：
单克隆抗-D试剂应在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性及效价，具体执行《输血科试剂质控标准操作规程》，每天常规血型鉴定前先做室内质控（具体执行《输血科室内质量控制的标准操作规程》），结果在控后方可将常规检查的报告发出。
10、注意事项
⑴ Rh血型系统的抗体多由获得性免疫产生，血清中很少有天然抗体，故不需要做反定型。
⑵ Rh血型鉴定严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻弹动试管，不可用力摇动。
11、相关文件
11.1《全国临床检验操作规程》第三版；
11.2试剂盒说明书。
11.3输血科《输血实验室管理程序》
11.4《临床输血质量管理指南》田兆嵩主编。
微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程
1、目的
为规范输血科ABO和RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。
2、适用范围
本文件适用于本院输血科ABO正反血型和RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。
3、职责：
输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、试验方法及原理
4.1试验方法：
微柱凝胶免疫测试法
4.2原理：
本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。
当抗原抗体反应，则红细胞发生凝集形成红细胞免疫复合物。
离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
4.2.1ABO血型基础
血型
抗原
与抗血清反应
与A1，B细胞反应
抗-A
抗-B
抗-A,B
A1
B
A
A
++++
0
++++
0
+/++++
B
B
0
++++
++++
+/++++
0
AB
AB
++++
++++
++++
0
0
O
H
0
0
0
+/++++
+/++++
4.2.2Rh血型
Rh血型系统包括的主要血型抗原：
C,c,E,e,DCde=R1Cde=R2CcDdee=R1r与抗-D阳性反应的红细胞为Rh阳性。
5、样本采集和处理：
受血者血样为EDTA-K2抗凝血。
抽取受血者静脉血1～2ml于专用管（紫色头管）内，离心分离出血浆。
将细胞配成0.8%的悬液备用。
6、试剂：
6.10.9%的生理盐水；
6.2长春博迅公司的血型定型试剂卡；
6.3长春博迅公司的0.8%的A、B型试剂红细胞悬液；
7、仪器：
7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；
7.2长春博迅公司的FYQ型免疫微柱孵育器；
7.3长春博迅公司的TD-3A型血型血清学专用离心机；
8、操作程序：
8.1工作准备：
8.1.1将0.8%A、B型试剂红细胞悬液室温平衡。
准备样本，标记卡。
8.1.20.8%样本红细胞制备：
将8μl压积红细胞加到1ml生理盐水中充分混匀。
8.1.3将50μlA1、B标准反定细胞加入血型卡的第5-6管中，将待检者血浆或血清50μl加到血型卡的第5-6管中。
将0.8%样本红细胞分别加入到血型卡的第1-4管中，各50μl。
8.1.4将血型卡放入TD-3A型血型血清学专用离心机离心5分钟后，判断结果，并作好记录。
9、结果判断：
－100%的红细胞沉在微管的底部
+/-100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内
1+80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内
2+80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内
3+80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内
4+凝集的细胞全部处于微管的顶部
d.p.双群
Hemo.溶血
4+3+2+1++/--溶血双群
10、方法确认：
10.1ABO系统抗体以外其他血型抗体可通过抗体筛查来检查。
用O型细胞可检查血浆、血清样本有无其他血型抗体。
方法简便，快速准确检出临床意义抗体。
10.2结果清楚明确，凝集在上层为阳性，沉积在下层为阴性，血型配血结果清晰明了，结果易判定。
10.3结果稳定、可保存、可拍照、可存入计算机。
可复检。
10.4操作简明，凝胶卡中已有抗血清，加入样本细胞即可定型。
避免因忘记加抗血清引起的错误。
10.5可检出不完全抗体。
避免了ABO以外血型抗体引起的输血反应。
同时本卡不存在抗人球被中和问题，避免了费时费力的洗涤过程和假阴性。
10.6样本用量少，有利于新生儿及少血液量样本的检测。
10.7结果重现性好，血型配血操作可实现标准化，血型配血可自动化。
11、质量控制:
每批血型鉴定卡和试剂红细胞使用前进行质量确认，具体执行《输血科试剂质控标准操作规程》，每天常规血型鉴定前先做室内质控（具体执行《输血科室内质量控制的标准操作规程》），结果在控后方可将常规检查的报告发出。
12、注意事项：
12.1每日实验前，先取出标准细胞和微柱凝胶卡，放置一段时间到室温，以防冷凝集。
12.2实验前将卡离心3-4分钟。
必须标注血型卡。
12.3血型卡封口已损坏时，管中干涸，或有气泡时，卡不可使用。
12.4红细胞浓度要在 0.8%左右，不可太浓或太稀。
12.5纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样充分离心。
12.6反定管先加样，以便标准细胞与血清或血浆反应。
先加细胞后加血浆。
12.7正反定型对照，确定结果及A亚型。
正定型结果若为弱阳性，应怀疑为ABO亚型，可重做完全测试，正反结果不符时，请设计实验分析。
12.8质控（ctl）为阳性时，请先用生理盐水洗细胞，再做血型。
12.9严格按标准程序操作可检出弱抗原，血型亚型。
12.10某些药物，疾病可导致弱阳性及正反定型不符。
12.11细菌及异常血清蛋白可影响结果。
12.12禁用严重溶血标本，它会强烈干扰结果的判读。
严禁使用非抗凝血标本配制红细胞悬液，以免出现假阳性结果。
12.13被酶处理过的红细胞会产生非特异性凝集，禁用被污染的标本和材料。
12.14卡配套的专用离心机，以确保结果的准确。
13、医学解释：
13.1输血已成为临床上必不可少的治疗手段。
输血必须输入ABO同型血，否则输入的红细胞可能迅速被破坏，导致严重的溶血反应，常常威胁生命甚至造成死亡。
所以在临床工作中必须杜绝ABO血型不合的血液输入人体，这以显得十分重要。
13.2肾、皮肤等器官或组织移植时，必须保证供体与受体之间ABO血型符合，否则将发生排斥反应，造成移植术失败。
13.3ABO血型不合所致的新生儿溶血病，可导致流产、死胎或因出生后抢救不及时而致死等。
目前早期诊断仍依赖于ABO血型血清学检查。
13.4ABO血型在人群中的分布，可用作遗传距离和聚类的分析，现以知道中国人氛围北方、南方两大群，前者以较高B基因，后者以较高O基因为特征。
13.5其他：
如亲子鉴定，法医学上对可疑血迹、精斑、毛发等ABO血型鉴定。
14、相关文件
14.1.全国临床检验操作规程》第三版；
14.2试剂盒说明书。
14.3输血科《输血实验室管理程序》。
14.4《临床输血质量管理指南》田兆嵩主编。
盐水法交叉配血试验标准操作规程
1、目的
为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。
2、适用范围
本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。
3、职责：
输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、试验方法及原理：
4.1试验方法：
盐水介质配血法
4.2原理：
天然类血型抗体与对应红细胞抗原相遇，在室温下的盐水介质中出现凝集反应。
通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞以及受血者红细胞与供血者清之间有无凝集现象，判断供血、受血者之间有无ABO血型不合的情况。
5、样本采集及处理
血样本为血浆（EDTA-K2抗凝）。
抽取受血者静脉血3~4ml，3000转/分离心2分钟，分离出血浆，并将红细胞配成2%盐水悬液。
将供血者血样以同样方法分离血清（血浆），并配制2%红细胞悬液。
配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。
6、操作步骤：
6.1取洁净小试管2支，1支标明受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）；另1支标明供血清（DS）+受血者细胞（PC）。
6.2按标记主侧管放受血者血清1滴，加供血者红细胞悬液1滴。
次侧管放供血者血清1滴，加受血者红细胞悬液1滴，混匀，以1000r/min离心1min，轻轻侧动试管，观察结果。
6.3观察结果：
先观察试管上层液有无溶血，再斜持试管轻轻侧动或轻轻弹动，观察管底反应物有无凝集（必要时用显微镜观察）。
冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。
7、结果判断：
ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血、无凝集表示无输血禁忌，可以输血。
异型配血时，主测无凝集，次测凝集，无溶血，可以输给少量。
输异型血时，如次测不凝集，不可以输血，应重新复查血型或追查其原因。
8、质量控制：
每天常规实验前先做室内质控（具体执行《输血科室内质量控制的标准操作规程》），结果在控后方可将常规检查的报告发出。
9、注意事项：
9.1季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。
9.2复核血型：
配血时应复核受血者和供血者血型，必要时要查对以前配血记录。
9.3同型之间交叉配血不合的处理：
①与个别同型供血者不能配合，可另选同型供血者进行配血。
②当受血者与多个同型献血员配血不合时，首先要想到受血者血型鉴定有无差错，应用标准的抗A、B、O型人的血清和标准A、B、O型红细胞进行复查。
其次，要注意是否为非特异性凝集，并进行确定。
如果血型鉴定无误，又不能证明假阳性，则应进行ABO亚型的鉴定，选择同型的人进行输血。
如为免疫性抗体造成的配血不合，要用不规则抗体筛选红细胞和（或）谱细胞检查病人的血清，确定免疫抗体的性质，选择不含与此抗体相应
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