妇康颗粒质量标准研究.docx

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妇康颗粒质量标准研究

妇康颗粒质量标准研究

　　【关键词】妇康颗粒；芍药苷；质量标准；高效液相色谱；薄层鉴别

　　摘要：

目的建立了妇康颗粒的质量控制方法。

方法采用薄层色谱法对处方中的生地黄、墨旱莲、益母草和地骨皮进行了定性鉴别；用HPLC法测定芍药苷的含量。

结果在TLC色谱中均能检出生地黄、墨旱莲、益母草和地骨皮；芍药苷含量测定方法的线性范围为0~5μg，芍药苷的平均回收率为%，含量限度芍药苷不少于7mg・g1。

结论所建立的方法能准确地进行定性、定量检测，可作为妇康颗粒的质量控制标准。

　　关键词：

妇康颗粒；芍药苷；质量标准；高效液相色谱；薄层鉴别

　　StudyonQualityStandardforFuKangGranules

　　Abstract：

ObjectiveToestablishthequalitystandardforFuKangGranules.MethodsRadixRehmanniae,Ecliptaprostrate,HerbaLeonuriandCortexLyciiinthisprescriptionwereidentifiedbyTLC,PaeoniflorinwasdeterminedbyHPLC.ResultsRadixRehmanniae,EcliptaAlba,HerbaLeonuricouldbeidentifiedbyTLC.Determinationmethodofpaeoniflorinwaslinearattherangeof　76~6μg,averagerecoverywas%.ThecontentlimitofPaeoniflorinshouldn‘tbelowerthan7mg/methodisaccurateandreproducible,anditcanbeusedforthequalitycontrolofFuKangGranules.

　　Keywords：

FuKangGranules;Paeonifloringualitystandard;HPLC;TLC

　　妇康颗粒是新研制的中成药制剂，具有滋肾清热、固涩安冲的功效。

在临床上用于月经先期、经后淋漓、经期延长等症。

方中主要组成有白芍、生地黄、墨旱莲、益母草、地骨皮和椿皮等。

本实验对生地、墨旱莲、益母草和地骨皮进行了薄层层析鉴别，采用HPLC对白芍中的芍药苷进行了含量测定，建立了妇康颗粒完整的质量标准。

　　1仪器与材料

　　AEL200型精密分析天平；UV1型三用紫外分析仪；薄层铺板器；微量进样器；Waters600E型高效液相色谱仪。

　　益母草对照药材、地骨皮对照药材、墨旱莲对照药材、梓醇（批号：

08089602）、芍药苷、盐酸水苏碱购于中国药品生物制品检定所。

妇康颗粒及缺各味药的阴性对照样品均由江西江中制药有限责任公司技术中心提供。

甲醇为色谱级试剂，其他试剂均为分析纯。

　　2方法

　　薄层色谱鉴别

　　生地黄的鉴别取妇康颗粒20g，加硅藻土3g，研匀，加无水乙醇100ml，置水浴上加热回流1h，冷却后，置冰水浴中30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，滤过，滤液加在已处理好的活性炭柱上，用200ml水洗脱，继用5%乙醇200ml洗脱，弃去上述洗脱液，再用20%乙醇150ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取生地黄药材5g及缺生地黄的阴性对照样品，同法制成生地黄药材对照液及阴性对照溶液。

再取梓醇对照品加甲醇制成每毫升含mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法［1］实验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇水（14∶6∶1）为展开剂，展开约10cm，取出,晾干，再以同一展开剂展开约7cm，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无此斑点。

结果见图1。

　　墨旱莲的鉴别［2］取妇康颗粒15g，加硅藻土3g，研匀，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取至提取液无色，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用乙醚提取2次，30ml/次，水溶液备用，合并乙醚液，置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

另取墨旱莲对照药材2g，加水煎煮2次，15min/次，合并煎液，冷却，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。

再取缺墨旱莲的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法［1］实验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无此斑点。

结果见图2。

　　益母草的鉴别［1］取妇康颗粒15g，加硅藻土5g，研匀，加乙醇80ml，置水浴上回流提取1h，冷却后，置冰水浴中h，滤过，滤液回收乙醇至干，残渣以mol/LHCl20ml使溶解，滤过，滤液加在已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱［001×7型（732）Na型,内径10～15mm，柱长12cm］上，以水洗至流出液近无色，弃去水液，再以2mol/L的氨水溶液150ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

另取益母草药材3g及缺益母草的阴性对照样品，同法制成益母草药材对照液及阴性对照溶液。

再取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每毫升含3mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法［1］实验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇盐酸醋酸乙酯（8∶3∶1）为展开剂，展开，取出,晾干，喷以稀碘化铋钾溶液。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无此斑点。

结果见图3。

　　地骨皮的鉴别取项下的乙醚提取后的水溶液，用醋酸乙酯提取3次，10ml/次，合并醋酸乙酯提取液，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，加中性氧化铝2g，在水浴上拌匀、干燥，装入中性氧化铝小柱上，用醋酸乙酯30ml洗脱，弃去洗脱液，再用醋酸乙酯无水乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

另取地骨皮对照药材5g，加水煎煮两次，15min/次，合并煎液，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，滤过，回收甲醇至干，残渣加水15ml溶解，用乙醚提取2次，15ml/次。

弃去乙醚液，水溶液同法制成对照药材溶液。

再取缺地骨皮的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法［1］实验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯醋酸乙酯甲酸（10∶3∶1）为展开剂，展开，取出,晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无此斑点。

结果见图4。

　　含量测定

　　色谱条件色谱柱：

PinnacleODS柱，流动相：

甲醇水冰醋酸，柱温：

25℃，流速：

ml/min；检测波长：

230nm。

在上述条件下，芍药苷与其他组分达到基线分离。

结果见图5。

　　对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷对照品适量，加50%乙醇制成每毫升含50μg的溶液。

　　供试品溶液的制备取本品装量差异项下内容物，研细，混匀，称取g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜滤过，即得。

　　线性关系考察精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷对照品mg，置100ml量瓶中，加50%乙醇适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0，，，，，，ml，置10ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得各对照品溶液，分别精密吸取上述各对照品溶液5μl，注入液相色谱仪测定峰面积。

以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：

Y=6929　，r=7。

结果表明，芍药苷在0~5μg与峰面积具有良好的线性关系。

　　精密度实验精密吸取芍药苷（50μg/ml）对照品溶液5μl,重复进样5次,计算得芍药苷峰面积的RSD为%。

　　稳定性实验取同一供试品溶液，分别于于配制后0，2，4，8，12h依法测定峰面积，结果表明，供试品溶液在12h内基本稳定，芍药苷峰面积的RSD为%。

　　重现性实验精密称取同一批号妇康颗粒样品5份，制备供试品溶液按上述方法测定峰面积，计算得芍药苷的质量分数为mg/g，RSD为%。

　　回收率实验采用加样回收法。

精密称取已知含量的同一批号g，按高中低浓度法分别精密加入一定量的芍药苷对照品溶液，按上述供试品溶液的制备方法及色谱条件进行测定，结果芍药苷的平均回收率为%，RSD=%。

　　样品测定结果分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪。

结果见表1。

表1妇康颗粒中芍药苷的测定结果

　　根据含量测定的结果确定妇康颗粒的含量限度为：

本品的内容物含芍药苷不得少于7mg・g1。

　　3讨论

　　妇康颗粒中生地黄、墨旱莲、益母草和地骨皮的定性鉴别，采用TLC法，并分别与各自的阴性对照液进行了对照实验，结果没有干扰，斑点明显，专属性好，收到良好效果。

　　系统适用性实验：

精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定，测得供试品中芍药苷的色谱峰的保留时间与对照品中芍药苷色谱峰的保留时间一致，平均保留时间为min；最小理论塔片数2154；最小分离度；重复性；平均拖尾因子，实验表明：

本法所用的色谱条件与系统适用性参数均符合药典规定。

　　超声时间的选择：

取本品装量差异项下的内容物g4份，按照项下方法处理，分别超声处理15，30，45，60min，测定。

结果表明，超声处理时间30min，芍药苷含量最大，并趋于稳定，故选择超声提取时间为30min。

　　本品为8味药的复方制剂，干扰芍药苷含量测定的成分较多，经方法学实验，结果表明：

利用50%乙醇为溶剂，超声处理提取，再采用HPLC法，检测波长为230nm，即可。

方法简单可行，重现性好。

　　参考文献

　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：

化学工业出版社，2000：

附录ⅥB，565.

　　［2］中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂，第4册［S］.1991：

31.

　　［3］中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂，第14册［S］.1997：

195.