生物化学实验预习及实验报告范例.docx
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生物化学实验预习及实验报告范例
预习报告示范
实验还原糖和总糖的测定
实验二：
（Fehling试剂）直接（热）滴定定糖法
一、实验目的和要求
1．初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2．正确掌握滴定管的使用方法和热滴定终点的判断方法。
二、实验原理
思考
（一）基本原理
还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖、麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子（Cu2+、Hg2+、Ag+等）还原，而还原糖本身则被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于还原糖的定性和定量测定。
（二）本实验反应原理
1、Fehling试剂（又称作酒石酸铜溶液）介绍：
A液：
由硫酸铜和次甲基蓝组成
1、硫酸铜的作用是什么？
1、Cu2+用于将来被还原成Cu+
2、次甲基蓝的作用是什么？
2、氧化还原指示剂
B液：
由氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾组成
3、氢氧化钠的作用是什么？
3、一、生成Cu（OH）2↓，二、创造碱性反应环境
4、酒石酸钾钠的作用是什么？
4、用以生成可溶性络合物酒石酸钠铜
5、亚铁氰化钾的作用是什么？
5、生成可溶性复盐，以便于观察滴定终点
用前将A、B两液等体积混合时，依次反应：
（1）2NaOH+CuSO4=Cu（OH）2↓（天蓝色）+Na2SO4
（2）在碱性溶液中：
酒石酸钠铜为可溶性络合物。
2、酒石酸铜与还原糖热滴定时的反应：
（1）红色氧化亚铜沉淀生成：
在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解
（2）反应生成的氧化亚铜沉淀与斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐：
6、为什么要生成可溶性复盐？
6、便于观察滴定终点
（3）亚甲基蓝为氧化-还原指示剂指示滴定终点
7、为什么亚甲基蓝可为滴定终点指示剂？
7、因为亚甲基蓝氧化能力比Cu2+弱，因此Cu2+会先被还原。
当Cu2+被全部还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型的亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即指示到达滴定终点。
（4）根据样液消耗量即可计算出还原糖的含量。
三、实验用品
思考
答案
用品量
实际用量
（一）、实验材料：
红薯粉（可换淀粉）
班级：
16g
（二）、实验试剂：
（1）Fehling试剂A液:
分别称取15gCuSO4·5H2O和0.05g亚甲基蓝于烧杯中；
加50~100mL蒸馏水将它们溶解；
转移到1000mL容量瓶中；
定容到1000mL。
8、为什么要分开配制A、B液？
什么时候混合较佳？
用品：
电子天平、100/200mL烧杯1、玻棒、1000mL容量瓶、蒸馏水
计算：
5×3×3×n，适当放大（一般多配1/3左右）
配1000mL
CuSO4·5H2O
=（g）
亚甲基蓝
=（g）
（2）Fehling试剂B液:
先称取50g酒石酸钾钠和+75gNaOH，溶于水；
再称取4g亚铁氰化钾，溶解
分别转移到1000mL容量瓶中；
定容到1000mL。
9、为什么贮存于具橡皮塞玻璃瓶中？
用品：
100/200mL烧杯2、1000mL容量瓶
配1000mL
酒石酸钾钠
=（g）
NaOH=（g）
亚铁氰化钾
=（g）
（3）0.1%葡萄糖标准溶液：
G在98~105℃下干燥至恒重为无水葡萄糖；
准确称取1.000g无水葡萄糖，用少量蒸馏水溶解；
转移到1000mL容量瓶中，加水约置750ml
往容量瓶中加入5-8mL浓HCl；
定容1000ml。
10、G为什么在98~105℃下干燥？
葡萄糖中的水分是吸湿水还是结晶水？
8、因为葡萄糖中的水分是吸湿水，在98~105℃下可以使之汽化除去，并且该温度不致使葡萄糖碳化。
称量瓶或表面皿或培养皿1套
烘箱，10mL移液管
G=（g）
浓盐酸
=（mL）
标准液葡萄糖浓度
C=g/mL
11、为什么加5-8mL浓HCl？
可以防止微生物生长。
（4）6mol/L盐酸溶液*：
配100mL6mol/L盐酸：
吸取258.00mL36%的发烟盐酸，定容到100mL。
12、这样配出的盐酸是标准浓度吗？
可用量筒量取吗？
200mL容量瓶，10mL移液管
配200mL
（5）I-IK溶液
分别称取5gI和10gIK于烧杯中，溶解，定容至100ml。
可用容量瓶取蒸馏水，烧杯中溶解后即可分装。
为什么？
因为是定性试剂。
25/50ml滴瓶×6
配200mL
I=（g）
IK=（g）
（6）10%NaOH
称取50gNaOH，溶于500ml蒸馏水中。
冷却至室温。
13、盛于什么容器中？
用滴瓶分装，实验完成后该如何处理滴瓶？
塑料试剂瓶500ml×1，50ml滴瓶×4
配500mL
NaOH=（g）
（7）0.1%酚酞指示剂
称取0.1g酚酞溶于100ml蒸馏水中。
25/50ml滴瓶×4
配100mL
酚酞=（g）
（8）蒸馏水。
14、根据反应原理，指出这些试剂中哪些是定量试剂，哪些是定性试剂。
*36%浓盐酸摩尔浓度=[1.1789×36%]/[36.5×1000mL/L]=11.6275mol/L
浓盐酸的36%-38%是指质量浓度，密度是1.19g/ml。
摩尔浓度=[1190g×36.5%（假设的盐酸浓度）]/[36.5（HCL的分子量）×1000mL/L]=11.9mol/L.
（三）、实验仪器及设备
名称
规格
台套数
使用
电子天平
1
公用
烘箱
1
公用
电热恒温水浴锅
2
公用
调温电炉
n/2
每两组共用
称量瓶/培养皿
1套
公用
100ml烧杯/150ml锥形瓶
5
公用
250mL锥形瓶
2+11n*
2个公用
*每组至少需6个才能轮换使用
100ml容量瓶
2+2n
2个公用
1000ml容量瓶
3
公用
200ml容量瓶
2
公用
5ml移液管
4
公用
10ml移液管
n+3
3支公用，每组1支
移液管架
1
公用
100mL量筒
1
公用
50/100ml漏斗
n
试剂瓶若干
500mL塑料试剂瓶
1
公用
25/50/100mL棕色滴瓶
6
公用
25/50/100mL滴瓶
4+4
公用
吸耳球
n
滴定管
n/2+2n
n/2：
每两组共用
玻璃棒
n或2n
白瓷板
n
定量滤纸
2n
先每组发一张
吸水纸
若干
玻璃珠
若干
四、实验程序
步骤
注意事项及问题
答案
仪器、药品及用量
实际用量
班级用量
（n=共16组）
（一）、样品中还原糖的提取：
（本步骤不做，仅供了解、参考与思考）
从实验目的和实验材料角度考虑，老师为什么取消这一步骤的实验？
1、准确称取红薯粉2g于100-200ml烧杯/锥形瓶中；
电子天平、100-200ml烧杯/锥形瓶×1
红薯粉样品重量
=（g）
红薯粉2×n=2n（g）
电子天平1台
250ml锥形瓶×1×n
2、加入85%乙醇50~60ml，混匀；
50/100ml量筒×1，玻棒×1
50/100ml量筒4个，公用
玻棒×1×n=n支
3、50℃恒温水浴保温30min，不时搅拌；
提前加热到50℃。
恒温水浴锅
2台
4、过滤；
漏斗×1，滤纸×1，100/200ml烧杯/锥形瓶×1
漏斗×1×n=n个
定量滤纸×1×n=n张
100/200ml烧杯/锥形瓶×1×n=n个
5、滤渣再用85%乙醇提取二次，合并提取液；
三次提取液总量不能超过100ml。
为什么用乙醇提取？
相似相溶
6、定容至100ml。
100ml容量瓶×1
100ml容量瓶×1×n=n个
（二）、样品中总糖的水解及提取：
1、称取红薯粉1g（换淀粉，称0.5g）于250ml锥形瓶中
如果样品的测定从第一步开始开始平行处理3个样，直到测定，我们做的是重复还是平行？
重复与平行是同一个概念吗？
电子天平、250ml锥形瓶×1
样品重量
m=g
红薯粉1g×n=ng
电子天平1台（公用）
250ml锥形瓶×1×n=n个
样品真需要象指导中要求的一样精确称取1.000g吗？
为什么？
2、加入6mol/LHCl10ml，蒸馏水15ml
6mol/LHCl的作用是什么？
为什么不用发烟盐酸？
10ml移液管×2支（公用）、、玻棒×1~2支、
移液管架1个（公用）
10ml移液管2支（公用）
移液管架1个（公用）
玻棒×1×n=n支
6mol/LHCl10ml×n=10nmL
3、沸水浴中加热30min
沸水浴锅需提前准备好。
恒温水浴锅2台（公用）
4、检验水解程度：
取1~2滴水解液置于白瓷板上，加1滴I-IK溶液检验
检验样品以1滴为宜。
白瓷板×1
滴管×1
25/50/100mL棕色滴瓶6个（公用）
白瓷板×1×n=n个
滴管×1×n=n支
25/50/100mL棕色滴瓶6个（公用）
检验样品以1滴为宜。
为什么？
随着水解进程，检验依次会出现什么现象？
为什么？
5、水解毕，冷却至室温
6、中和：
加入1滴酚酞指示剂，以10%的NaOH中和至溶液成微红色
为什么要中和？
是进行滴定中和吗？
25/50/100mL滴瓶4个（公用）
100mL滴瓶8个（两组共用）
25/50/100mL滴瓶4个（公用）
100mL滴瓶8个（两组共用）
酚酞指示剂100mL
10%NaOH500mL
7、将样品水解溶液定容至100ml
100ml容量瓶×1
100ml容量瓶×1×n=n个
8、将7中的溶液过滤
漏斗×1，定量滤纸×1，100/200/250ml烧杯/锥形瓶×1
漏斗×1×n=n个
定量滤纸×2×n=2n张
100/200/250ml烧杯/锥形瓶×1×n=n个
9、稀释：
取滤液10ml，定容至100ml，
10ml移液管×1，100ml容量瓶×1
10ml移液管×1×n=n支
100ml容量瓶×1×n=n个
10、结果：
得到稀释1000倍的总糖水解液
（三）、碱性酒石酸铜溶液的标定
1、准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加3粒玻璃珠
玻璃珠的作用是什么？
5ml移液管×2，250ml锥形瓶×1×3，（10ml移液管×1），玻璃珠
5ml移液管×4（公用）
碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml×3n=15nmL
250ml锥形瓶×3×n=3n个
玻璃珠，若干
2、从滴定管中滴加约9ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中
为什么只加约9ml？
需要做平行吗？
为什么？
25/50ml滴定管×1
25/50ml滴定管8支（两组共用）
3、加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s
为保证尽快沸腾，需先将电炉预热。
可调电炉
可调电炉8个（两组共用）
为什么需使沸腾？
1、加快还原糖与Cu2+的反应速度；
2、防止空气进入，保证还原型亚甲基蓝不被再氧化成氧化型；
3、使得Cu2O不被氧化成CuO。
为什么要保证溶液在2min内沸腾？
且准确沸腾30s？
保持蒸发量基本一致，使碱度不变，减少误差，避免耗糖量增加。
如何简便知道你的测试结果的准确性？
做平行试验，看样液消耗量相差量，不应该超过0.1ml。
4、趁热以1滴G标准液/2s速度滴定，至蓝色褪去为终点
滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能从热源上取下滴定。
标定酒石酸铜消耗的葡萄糖标准液体积：
V1=mL，
V2=mL，
V3=mL
=mL
为什么不能摇动和从热源上取下锥形瓶？
（四）、样品中糖的定量测定
1、样品溶液预测定
为什么要进行预测定？
以确定还原糖浓度是否在0.1%左右，过大则稀释。
浓度过大则增加样品量，增加滴定时间，造成更大误差。
（1）、准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加3粒玻璃珠
玻璃器具前面用过，清洗烘干再用。
碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml×3n=15nmL
（2）、加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s
（3）、趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，待溶液蓝色变浅时以1滴样液/2s速度滴定，至蓝色褪去为终点。
样液消耗体积：
V4=mL，
V5=mL，
V6=mL
=mL
25/50ml滴定管n支
2、样品溶液测定
（1）准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加3粒玻璃珠，
玻璃器具前面用过，清洗烘干再用。
碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml×3n=15nmL
（2）加入比预测时样品溶液消耗总体积少1ml的样液；
为什么？
以保证在1分钟内完成滴定工作，和标准曲线工作条件尽可能一致，减少误差，提高准确度。
（3）加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s；
（4）趁热以1滴样液/2s速度滴定，至蓝色褪去为终点。
样液消耗体积：
V7=mL，
V8=mL，
V9=mL
=mL
五、实验结果及计算
碱性酒石酸铜的标定
预测定
总糖样品测定（%）
总糖
耗糖液体积（ml）
相当葡糖含量（mg）
平均值（mg）
计算公式：
（1）碱性酒石酸铜的标定：
F=C×
F——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于G的量，mg
C——标准G溶液的浓度，mg/ml
——标定时消耗标准G溶液的体积，mL
（2）总糖含量：
m——样品重量，g
——总糖样品溶液的总体积
1000——mg换算成g的系数
实验报告示范
实验还原糖和总糖的测定
实验二：
（Fehling试剂）直接（热）滴定定糖法
一、实验原理
还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖、麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子（Cu2+、Hg2+、Ag+等）还原，而还原糖本身则被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于还原糖的定性和定量测定。
菲林试剂是将碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合后，生成可溶性的酒石酸钾钠铜；在加热条件下，还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解。
氧化-还原指示剂亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，在溶液中二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型的亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液消耗量可计算出还原糖的含量。
二、实验用品
（一）、器材（需要给出数量）
电热恒温水浴锅、调温电炉、烘箱
100ml烧杯、250mL锥形瓶、100ml容量瓶、1000ml容量瓶、5ml移液管、10ml移液管、吸管、50/100ml漏斗、吸耳球、滴定管、玻璃棒、白瓷板、定量滤纸、玻璃珠若干
（二）、试剂
（1）碱性酒石酸铜甲液：
15gCuSO4·5H2O+0.05g亚甲基蓝+H2O，溶解；定容1000ml。
（2）碱性酒石酸铜乙液：
50g酒石酸钾钠+75gNaOH，溶于水；+4g亚铁氰化钾，溶解；定容1000ml。
（3）0.1%葡萄糖标准溶液：
G在98~100℃下干燥至恒重；准确称取1.000g无水葡萄糖，蒸馏水溶解；
加水约750ml时，加入5mlHCl；定容1000ml。
（4）I-IK溶液：
5gI+10gIK，溶于100ml蒸馏水中。
（5）6mol/LHCl：
258.00ml浓HCl（36%），稀释至500ml。
（6）10%NaOH：
50gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
（7）0.1%酚酞指示剂：
0.1g酚酞溶于100ml蒸馏水中。
（三）、材料
红薯粉（换淀粉，酸水解）
三、实验操作步骤
（一）、样品中总糖的水解及提取：
准确称取红薯粉（换淀粉0.5g）1g于250ml锥形瓶中；加入6mol/LHCl10ml，蒸馏水15ml；沸水浴中加热30min；检验水解程度：
取1~2滴水解液置于白瓷板上，加1滴I-IK溶液检验。
水解毕，冷却至室温；中和：
加入1滴酚酞指示剂，以10%的NaOH中和至溶液成微红色；定容至100ml。
将上述溶液过滤后稀释：
取滤液10ml，定容至100ml。
得到稀释1000倍的总糖水解液。
（二）、碱性酒石酸铜溶液的标定及样品中糖的定量测定：
操作步骤：
碱性酒石酸铜溶液的标定
样品溶液预测定
样品中糖的测定
1
2
3
4
5
6
7
8
9
准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加3粒玻璃珠
从滴定管中滴加约9ml葡萄糖标准溶液；加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s
趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液
加入比预测时样品溶液消耗总体积少1ml的样液；加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s
趁热以1滴G标准液/2s速度滴定，至蓝色褪去为终点。
四、实验记录及计算结果
碱性酒石酸铜的标定
总糖预测定
总糖样品测定（%）
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
耗糖液体积（mL）
相当葡糖含量（mg）
平均值（mL）
计算公式：
1、碱性酒石酸铜的标定：
F=C×
F——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于G的量，mg
C——标准G溶液的浓度，mg/ml
——标定时消耗标准G溶液的平均体积，mL
2、总糖含量：
m——样品重量，g
——总糖样品溶液的总体积mL
——测定时消耗样品溶液的平均体积，mL
1000——mg换算成g的系数
五、结果与讨论
（就实验中出现的问题、思考的问题、取得实验好或不理想结果的原因、需要注意的事项、改进的地方等进行讨论）
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