完整微生物检验方法验证方案.docx
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完整微生物检验方法验证方案
（完整）微生物检验方法验证方案
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文件类别：
验证文件编号：
VF—PR—17-A
部门：
生产部
微生物限度检查方法（平皿法）
验证方案
版次□新订□替代
起草人:
起草日期：
年月日
验证小组审阅
方案批准人批准日期:
年月日
验证实施日期年月日
复印数份批准人：
分发至：
质控部
一、验证方案的制定
二、验证方案的起草与审批
三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案
1．验证目的和原理
2．验证方法步骤
3．试验实施
3.1试验前的准备
3。
2验证试验操作
3.3试验结果
4．验证结果评价分析
5．附件
微生物限度检查方法（平皿法）验证文件
一、验证方案的制定
验证项目名称
微生物限度检查方法（平皿法）验证
编号
VF-PR-17-A
验证小组组员
成员职务
姓名
主要工作职责
组长
方案设计责任人
副组长
方案实施负责人
组员
操作人
操作人
操作人
操作人
验证方案组织实施进度
步骤
实施日期
二、验证方案的起草与审批
1验证方案的起草
验证项目名称
微生物限度检查方法（平皿法）验证
编号
VF—PR—17-A
起草部门
起草人签名
日期
生产部
年月日
质控部
年月日
2．验证方案的审核与批准
验证方案审核人:
审核日期：
年月日
验证方案批准人：
批准日期:
年月日
三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案
1．验证目的和原理
1.1验证目的
为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案.验证过程应严格按照本方案规定的内容进行,若因特殊原因确需要变更时,应报验证委员会批准。
1.2原理
通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性.
2．验证方法步骤
2.1验证前的准备进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。
2。
3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查"对检品中微生物的抑制性,试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。
3．试验实施
3.1试验前的准备
3。
1.1主要仪器设备:
高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、恒温培养箱、霉菌培养箱.
3.1。
2操作环境：
操作间应该安装空气除菌过滤层流装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或防置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压,不低于4。
9pa。
3.1。
3试验样品：
尿素维生素E乳膏:
批号批号批号
3。
1.4稀释液和试剂:
PH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液无菌十四烷酸异丙酯
3.1.5器具无菌培养皿：
（直径90mm）无菌移液管（5ml）
3.1。
6验证用微生物名称及其编号
实验菌株的来源:
菌株名称
内控编号
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成
3。
1。
7培养基
名称
生产商
培养基批号
配制日期
有效期
营养琼脂
培养基
改良马丁琼
脂培养基
3.2验证试验操作
3.2.1试验菌的制备和稀释
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至良马丁流体培养基中，23～28℃下培养24～48小时.将黑曲霉接种至改良马丁琼脂培养基中,在23~28℃下培养5～7天小时。
将上述培养物用0。
9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50～100cfu的菌悬液。
3.2.2用不同类别的微生物考察供试液及检验程序的抑菌性，将试验分为4组
A样品试验组准确取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。
然后加入45℃的PH7。
0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml,振摇5～10分钟,萃取，静置使油水明显分层,取其水层作为1:
10的供试液.
用移液管准确吸取1。
0ml供试液至平皿中；并在每个平皿中接种50～100cfu试验菌，立即倾注营养琼脂培养基，每个试验菌平行接种2个平皿，按照平皿法测定其菌数.
B菌液组在平皿中注入1ml的菌液立即倾注营养琼脂培养基，以测定所加的菌数。
C供试品对照组取规定量的供试液，按菌落计数方法测定供试品的本底菌数.
D稀释剂对照组取相应稀释液1ml加入试验菌，使最终菌浓度为每ml供试液含50～100cfu试验菌，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌落数。
3。
2.3培养将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～50℃下培养48小时将白色念珠菌、黑曲霉在23~28℃下培养72小时，点计菌落数.并将结果记录于附件1。
3.3试验结果
3.3.1稀释剂对照组菌的回收率
接入菌种
尿素维生素E乳膏批号
菌落计数（cfu/皿）
回收率
稀释剂对照组
菌液组
大肠埃希菌
平均值
金黄色葡萄球
平均值
枯草芽孢杆菌
平均值
白色念珠菌
平均值
黑曲霉
平均值
表中：
回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数×100%.
3。
3.2试验组的菌的回收率
接入菌种
尿素维生素E乳膏批号
菌落计数（cfu/皿）
回收率
试验组
供试品对照组
大肠埃希菌
平均值
金黄色葡萄球
平均值
枯草芽孢杆菌
平均值
白色念珠菌
平均值
黑曲霉
平均值
表中：
回收率=（试验组的平均菌落数－供试品对照组的平均菌落数的值）÷菌液组的平均菌落数×100％。
4．验证结果评价分析
质控部负责各项验证、试验结果记录,验证小组根据验证、试验结果进行评价（附件2），起草验证报告（附件3），报验证委员会。
（附件4）
验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书（附件5）。
对验证结果的评审应包括：
（1）验证试验是否有遗漏？
（2）验证实施过程中对验证方案有无修改？
修改原因、依据以及是否经过批准？
（3）验证记录是否完整？
（4）验证试验结果是否符合标准要求?
偏差及对偏差的说明合理？
是否需进一步补充试验？
5．附件
附件1
产品试验组的微生物生长检查记录：
菌种名称
产品试验组计数结果（cfu/皿）
平均值
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
供试品对照组的微生物生长检查记录
菌种名称
供试品对照组计数结果（cfu/皿）
平均值
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
稀释剂照组的微生物生长检查记录
菌种名称
阳性对照计数结果（cfu/皿）
平均值
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
菌液组
菌种名称
阳性对照计数结果（cfu/皿）
平均值
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
测试人/测试日期:
复核人/复核日期：
附件2
验证结果评价表
验证名称
微生物限度检查方法
（平皿法）验证
编号
VF—PR-17-A
验证
结果
评价
及建议
确
认
验证小组:
年月日
附件3
验证报告
年月日至年月日，验证小组根据批准的编号为“VF-PR—17-A”的微生物限度检查方法（平皿法）验证文件对微生物限度检查法进行了相关的一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：
1．验证方案在实施过程中未做修改；
2．验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内；
3．验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实；
4．验证结果符合设计要求和GMP原则要求,可以投入使用。
以上情况,请验证委员会审批！
验证小组
年月日
附件4
试验报告审批表
验证名称
微生物限度检查方法
（平皿法）验证
编号
VF—PR-17-A
验证内容
审阅会签
质
量
部
审核人：
年月日
验证委员会意见:
批准人：
年月日
附件5
上海安都药业有限公司
验证格证书
编号：
VF2005-017
项目名称：
微生物限度检查方法（平皿法）验证
根据我国药品GMP规范要求，依据
我厂《验证管理制度》，经对该项目进行
验证，结果符合要求。
特发此证.
有效期:
自年月日至年月日
签发人：
年月日
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