学年高中生物第一部分微生物的利用大肠杆菌的培养和分离同步备课教学案.docx

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学年高中生物第一部分微生物的利用大肠杆菌的培养和分离同步备课教学案

第1课时　大肠杆菌的培养和分离

考试要求

知识内容

考试属性及要求

考情解读

大肠杆菌的培养和分离

加试

1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的画线培养。

3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。

一、微生物培养的基本条件

1.微生物基础知识

（1）微生物的特点：

结构简单，形体微小。

通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。

体内一般不含叶绿素，不能进行光合作用。

（2）细菌的外形与大小

①外形分类

②大小：

单细胞不分枝的原核微生物，细胞微小而透明。

通常用适当染料染色后，再显微镜观察。

（3）细菌的繁殖：

细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20分钟分裂一次。

（4）菌落

①概念：

单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。

（如图）

②作用：

细菌的菌落特征因种而异，菌落是鉴定菌种的重要依据。

2.培养基的种类

（1）按物理性质分类

种类

是否含凝固剂

用途

固体培养基

是

主要用于微生物的分离与鉴定等

液体培养基

否

主要用于扩大培养或工业生产

（2）按培养基的用途分类

种类

制备方法

用途

选择培养基

加入某种化学物质

从众多的微生物中分离所需微生物

鉴别培养基

加入某种试剂

鉴别不同种类的微生物

3.无菌技术

（1）含义：

无菌技术不仅能防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，保持微生物的纯培养，而且在分离、转接时亦能防止其他微生物污染。

（2）无菌操作

①对实验空间、操作台可用紫外线或酒精消毒，操作者的手用酒精消毒。

②实验用的培养器皿和培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，接种环用灼烧方法灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

1.结合所学知识，完成下图横线上大肠杆菌的结构名称，然后思考：

（1）大肠杆菌与酵母菌相比，在结构上最主要的区别是什么？

答案　大肠杆菌是原核生物，与酵母菌相比，最主要的区别是没有由核被膜包被的细胞核。

（2）大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但也有一些菌株对人体是有害的，可以侵袭肠黏膜并产生毒素。

但是，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。

（3）应用：

大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具。

2.判断下面培养基的各种成分能提供的营养物质类别

成分

FeSO4

蔗糖

（NH4）2SO4

维生素

提供的营养

无机盐

碳源

氮源

生长因子

小贴士　1碳源的种类是判断微生物同化作用类型的依据，能利用无机碳源的生物是自养型的，只能利用有机碳源的生物是异养型的。

含氮的有机物如蛋白质既可作为氮源，也可作为碳源。

“细菌喜荤，霉菌喜素”，细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制。

霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁。

2其他条件：

在提供几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质及氧气的要求。

例如：

培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素；培养霉菌时需要将培养基的pH调至中性偏酸；培养细菌时需要将pH调至中性或微碱性；培养厌氧型微生物时需要提供无氧的条件。

3.比较消毒和灭菌的不同之处

比较项目

理化因素的作用强度

消灭微生物的数量

芽孢和孢子能否被消灭

消毒

较为温和

部分对人体有害的生活状态的微生物

不能

灭菌

强烈

全部微生物

能

小贴士　1每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。

芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。

芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。

2孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。

一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。

4.几种消毒和灭菌方法及其适用范围

类型

适用范围

操作方法

消

毒

方

法

煮沸消毒法

日常生活

100℃煮沸5～6min

巴氏消毒法

不耐高温的液体

70～75℃煮30min或80℃煮15min

化学药剂

生物活体、水源等

擦拭等，如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源

紫外线

房间、仪器设备

紫外线照射30min

灭菌

方法

灼烧

接种工具、接种时用的试管口或瓶口等

直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧

干热灭菌

耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等

物品放入干热灭菌箱，160～170℃加热1～2h

高压蒸汽灭菌

培养基、培养皿等，生产和实验室常用

高压蒸汽灭菌锅内，100kPa，温度121℃，15～30min

过滤

不耐高温的物质，如尿素、酶等

G6玻璃砂漏斗过滤

1.下列关于大肠杆菌的表述，不正确的是（　　）

A.其细胞质中只有一种细胞器——核糖体

B.在有氧条件下进行需氧呼吸，无氧条件下进行厌氧呼吸

C.除拟核外，在细胞质中还有许多小的环状DNA分子

D.常作为基因工程目的基因的受体菌

答案　D

2.连线无菌技术的方法、类型及对象

二、大肠杆菌的培养与分离操作

1.培养基的配制

我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体培养基上划线进行分离。

以下为本实验中培养基配制步骤，请完成：

（1）称量：

准确称取各成分。

蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL。

（2）融化：

加热融化，用蒸馏水定容到50mL。

配制LB固体培养基时还需加1g琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

（3）调pH：

用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。

（4）灭菌：

在两个250mL的三角瓶中分别装入50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基，加上棉塞。

将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。

（5）倒平板：

灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近进行操作。

其过程（如下图）是：

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

2.细菌的分离方法

（1）划线分离法：

在液体培养基中，只要接种后培养8h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。

可用接种环蘸取菌液在固体培养基上划线，在划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此，划线最后部分的细菌间的距离加大。

将接种后的固体培养基培养10～20h后，可由一个细菌产生单菌落。

如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。

这种方法也可用于分离细菌，将污染的杂菌除去。

（2）涂布分离法：

先将培养的菌液稀释，通常稀释10－5～10－7倍，然后取0.1mL稀释度不同的稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行培养。

在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的菌落。

通常以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为适合。

（3）两种分离法的比较：

划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些。

3.大肠杆菌的培养和分离

（1）实验内容：

将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。

（2）实验步骤

培养基灭菌

↓

倒平板

↓

接种

↓

划线分离

↓

培养观察

50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌

将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面

在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12h

用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿

培养皿倒置（盖在下面），放在37℃恒温培养箱中培养12～24h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落

1.固体培养基经高压蒸汽灭菌后，待培养基冷却到60℃时，需搁置斜面（图甲）或倒平板（图乙），请回答：

（1）如何确定制备的培养基灭菌是否合格？

答案　将未接种的培养基在适宜的温度下放置一定时间，观察培养基上是否有菌产生。

（2）在固体培养基凝固前搁置斜面的目的是什么？

答案　增大接种面积。

（3）平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答案　平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

2.某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？

应当怎样操作才可避免此种现象？

答案　最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。

3.以下接种、分离操作中，正确的是（　　）

A.接种前，在火焰上烧红了的接种环，应先冷却再取菌体

B.划线分离时，应间断式划线

C.接种环可在菌液中多次蘸液

D.菌体放入三角瓶的液体培养基中后，三角瓶的封口膜需重新制作

答案　A

解析　划线分离时的划线一定要是连续的；接种时，接种环只能在菌液中蘸取一次，否则会污染菌液；三角瓶的封口膜不需要重新制作，用刚取下的即可。

4.请结合图示，回答下列有关大肠杆菌分离与纯化的问题：

（1）稀释

用1mL无菌吸管吸取1mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9mL的大试管中，充分混匀，稀释倍；按照同样的方法依次进行稀释制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。

（2）划线或涂布

①划线分离法

a.操作：

在旁，左手拿培养皿，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上划线。

b.划线方法：

划线和划线。

c.平行划线时，第一次划线及每次划线之间都要灼烧接种环，划线结束后也要灼烧接种环，目的分别是什么？

②涂布分离法

a.将浸在盛有酒精的烧杯中。

b.取不超过0.1mL的，滴加到培养基表面。

c.将蘸有少量酒精的玻璃刮刀在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。

d.用玻璃刮刀将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

（3）培养：

将接种的平板于培养箱或温室中37℃培养12～24h。

答案　

（1）无菌水　10　

（2）①a.酒精灯火焰　b.平行　连续

c.如表所示

第一次灼烧

每次划线之前灼烧

划线结束时灼烧

目的

杀死接种环上原有的微生物

杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线后菌种数目减少

杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者

②a.玻璃刮刀　b.菌液　（3）倒置

一题多变

判断正误：

（1）大肠杆菌是革兰氏阴性菌，对人无害（　　）

（2）扩大培养大肠杆菌常用LB液体培养基（　　）

（3）利用涂布分离法分离细菌时，需要先将培养的菌液进行梯度稀释（　　）

（4）在“大肠杆菌的培养和分离”实验中所用棉花为脱脂棉（　　）

（5）下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果

①每一次划线后都要将接种环灼烧（　　）

②除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端（　　）

答案　

（1）×　

（2）√　（3）√　（4）×　（5）①√　②×

1.划线分离法和涂布分离法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是（　　）

A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释

B.划线分离法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作

C.涂布分离法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养

D.都能在培养基表面形成单个菌落

答案　D

解析　划线分离法不需要进行梯度稀释；划线分离法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；涂布分离法需要将不同稀释度的菌液涂布到琼脂固体培养基的表面；划线分离法和涂布分离法都能在培养基表面形成单个菌落。

2.下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是（　　）

A.①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行

B.步骤①中，待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖

C.步骤③中，每次划线前都需对接种环进行灼烧处理

D.划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养

答案　B

解析　由图可知，步骤①是倒平板，步骤②是用接种环蘸取菌液，步骤③是进行平板划线，步骤④是培养。

①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A项正确；倒完平板后应立即盖上培养皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B项错误；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，C项正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，有利于培养基表面的水分更好地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D项正确。

3.在划线分离法操作中，错误的是（　　）

A.将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红

B.将烧红的接种环在酒精灯火焰旁边冷却

C.接种环在平板上的划线位置是随机的

D.在蘸取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰

答案　C

解析　接种环灼烧及接种前后试管口要通过火焰，其目的是为了防止杂菌污染，将接种环先冷却再接种可以避免高温烫死菌种，因此A、B、D都是正确的；在平板上划线时，要划三至五条平行线，而不是随机划线，因此C选项错误。

4.下列关于消毒和灭菌的理解，不正确的是（　　）

A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子

B.消毒和灭菌实质上是完全相同的

C.接种环用灼烧法灭菌

D.常用的灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法

答案　B

解析　消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或其中一部分对人体有害的微生物，不包括芽孢和孢子。

灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

5.

（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。

（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行处理（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能。

（3）若用涂布分离法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的。

（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。

（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。

对于固体培养基应采用的检测方法是。

（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

答案　

（1）温度　酸碱度

（2）灭菌　消毒　损伤DNA的结构

（3）比例合适

（4）鉴定（或分类）

（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生

（6）灭菌

课时作业

[基础过关]

1.所有细菌都具有的特征是（　　）

A.都是异养生物

B.仅在有水条件下繁殖

C.仅在有氧条件下生长

D.生存温度都超过80℃

答案　B

解析　细菌的生长所必需的营养元素：

碳源、氮源、无机盐、水、生长因子，其中碳源、氮源、无机盐、生长因子因细菌种类的不同，所需的种类也不一样，而水是所有微生物生长共同所需的物质。

细菌按同化作用可分为自养型和异养型两种；按异化作用可分为需氧型和厌氧型。

2.下列说法正确的是（　　）

A.为微生物的生长繁殖提供营养基质的是固体培养基

B.培养基只有两类：

液体培养基和固体培养基

C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基

D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落

答案　D

解析　培养基是微生物生长繁殖的营养基质，根据培养基的物理性质不同，可将培养基分成固体培养基、液体培养基和半固体培养基；液体培养基不加凝固剂。

3.平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是（　　）

A.接种时再拿起来方便

B.在皿底上标记日期等方便

C.正着放置容易破碎

D.防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基造成污染

答案　D

解析　平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高。

将平板倒置，可以使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染。

4.下列操作与消毒灭菌无关的是（　　）

A.接种前用肥皂清洗双手，再用酒精擦拭双手

B.接种前用火焰灼烧接种环

C.培养基在60℃左右时搁置斜面

D.在酒精灯的火焰旁完成倒平板的操作

答案　C

5.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。

下列叙述错误的是（　　）

A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒

B.接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌

C.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染

D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境

答案　B

解析　对接种环等金属用具进行灼烧灭菌，应放在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰处。

6.下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是（　　）

A.获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染

B.单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法

C.培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌

D.倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落

答案　C

解析　微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A项正确；通常可以采用涂布分离法或划线分离法进行单菌落的分离，以消除污染的杂菌，B项正确；培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，但对于培养基中有高温易分解的成分，就不能用此方法，如培养基中的尿素等物质，C项错误；倒平板后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而造成污染，D项正确。

7.获得纯净培养物的关键是（　　）

A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌

B.接种纯种细菌

C.适宜环境条件下培养

D.防止外来杂菌的入侵

答案　D

[能力提升]

8.牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的说法不正确的是（　　）

A.不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用

B.在微生物生长温度范围内保持固体状态

C.琼脂凝固点低，利于微生物的生长

D.琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强

答案　C

解析　在液体培养基中加入凝固剂如琼脂后，制成琼脂固体培养基，它是实验室中最常用的培养基之一，固体培养基中可形成肉眼可见的单个细胞繁殖而来的子细胞群体，即菌落，用于微生物的分离、计数和菌种鉴定等。

琼脂作为一种理想的凝固剂，是由其性质决定的，琼脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强。

琼脂在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，所以在微生物生长温度范围内保持固体状态。

9.以下关于制备固体培养基的叙述中，错误的是（　　）

A.操作顺序为计算、称量、融化、倒平板、灭菌

B.灭菌前可能需要调pH

C.待培养基冷却至60℃左右时进行倒平板

D.待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置

答案　A

解析　操作顺序应为计算、称量、融化、灭菌、倒平板。

10.在“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（　　）

A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

答案　D

解析　A项错，高压灭菌加热结束后，让其自然冷却后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物；B项错，倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖；C项错，接种环灼烧灭菌之后，应待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；D项对，在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。

11.从自然菌样中筛选较理想菌种的一般步骤是：

采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想菌种的第一步是从适宜的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。

培养耐盐菌的菌样应从环境中采集。

（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。

对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择的培养基，并在条件下培养。

（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。

获得图A效果的接种方法是，获得图B效果的接种方法是。

（4）配制培养基时各种成分在融化后分装前必须进行，接种前要进行。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在条件下进行。

答案　

（1）高盐　

（2）以淀粉为唯一碳源　高温

（3）涂布分离法　划线分离法

（4）pH调整　高压蒸汽灭菌　无菌

解析　要采集菌样必须考虑该微生物的生理特性和土壤特点。

培养微生物则要考虑它对营养的需要和对氧气、pH的不同要求。

根据图A和B不难得出A和B的接种方法。

配制培养基的步骤包括配制培养基、调节pH、分装、包扎、灭菌、搁置斜面等。

12.有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。

某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。

回答下列问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的培养基上。

从功能上讲，该培养基属于（A.固体　B.液体　C.纯化　D.选择）培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和高压蒸汽灭菌。

无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

答案　

（1）原油　D　

（2）划线分离法和涂布分离法　（3）强　（4）干热灭菌　　火焰

解析　

（1）可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为选择培养基。

欲筛选出能降解原油的菌株，则培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存。

（2）分离纯化菌种时，接种的方法有划线分离法和涂布分离法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单菌落，以便于纯化菌种。

（3）降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。

（4）实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌（如接种环）、干热灭菌（如培养皿）和高压蒸汽灭菌（如培养基）等。

无菌技术要求整个实验操作都要在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物