医院检验中心17KS测定操作规程.docx
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医院检验中心17KS测定操作规程
医院检验中心17—KS测定操作规程
[试剂]
试剂名
成份及贮存
量
Reagent1
KOH（1mol/L、5.6%）
550ml
Reagent2
96%乙醇
165ml
Reagent3
显色剂（1.3一二硝基酚）2~8℃保存
40ml
Reagent4
KOH（6mol/L、26.8%）
100ml
DHEA标准液
2-8℃贮存
2ml
滤柱
50支
试管
带盖玻璃试管
54支
25%HCL
乙醚
[试剂准备]
乙醚每个试验4ml，分离漏斗中放入200ml乙醚和50ml蒸馏水.加盖振摇.避免压力过高.应开盖几次然后将水除去。
[标本收集及准备]
需24h尿液，加25%乙酸可延长稳定性（这样保持PH5）充分混匀尿液记录尿量，留取100ml以备分析。
[分析步骤]
A.第一次测试前仔细阅读手册。
B.在开始第3步骤时.17-OH和17-KS可同时平行操作。
C.一次测定不能超过20Tests。
D.第4步骤之后实验中断、标本需2~8℃过夜。
E.标本避免光线直照。
F.为保持较好的实验，每次试验中应带质控。
[操作步骤]
1.水解
1.1每支试管标记实验号及质控,外加试剂空白和标准。
1.2每管加5ml标本和质控。
1.3空白和标准管加5ml蒸馏水。
1.4每管加1.0ml25%HCl混匀。
1.5沸水浴10分钟,10分钟后冷却至室温。
1.6测定管水解之后如沉淀出现,则应离心。
2.滤柱准备
2.1滤柱标记:
测定、质控、空白及标准。
2.2去盖、加7ml蒸馏水、加盖，混匀，不让树脂下沉，去盖，扭去头让柱流入到废液溶器中。
3.柱的吸附
3.1柱中加入水解标本，让其完全流经，去除洗出液。
3.2每柱加2×5.0mlReagent1.加第二次前,须完全流经.去除柱头的水滴.去除洗出液。
4.洗涤
4.1将柱放入标记好的收集管中。
4.2每柱加3×1.0mlReageut2.每次须完全流经,去柱。
4.3充分混匀洗出液,沉定物不影响测定。
注意:
此步骤后中断,2℃~8℃过夜
5.标准及试剂空白
5.1每个标本、质控、3标准及空白准备一根抽提试管。
5.2分别吸取1.0ml洗出液到相应的抽提管中。
5.3标准管中加10、20、50ulDHEA标准溶液。
6.显色反应和乙醚抽提
6.1每管中（标本、质控、标准和试剂空白）0.5mlReagent3和1.5mlReageut4。
6.2盖紧,混匀。
6.335℃孵育30′（避光、不超过35℃）。
6.4以冰或冷水浴迅速冷却至室温。
6.5开盖加4.0ml水洗过乙醚,立即盖紧盖子。
6.6混匀架上振动抽提管3-4′注意:
充分混匀,重复性取决于提抽效果,乙醚层变为粉红色（混匀后2分钟）,立即将乙醚层比色。
6.7上层粉红色乙醚层含17-KS。
测定:
520nm波长、比色
[计算]
A=20/S×u（ug17-ks/ml）Mg17-ks/24h=A/1000×3/5×24h尿量
Umol17-ks/24h=mg17-ks/24h×3.467
[参考范围]
<8岁儿童
0-3mg17-ks/24h
（0-10.4umol/24h）
女
7-20mg17-ks/24h
（24.3-69.3umol/24h）
男
10-25mg17-ks/24h
（34.7-86.7umol/24h）
<1>水解:
U
S
B
量
5ml尿
5mlD.water
5mlD.water
25%HCL
1.0ml
1.0ml
1.0ml
───────────────────────
沸水浴10ˊ
<2>滤柱准备：
去盖+7mlD.water加盖、混匀、去盖、去头、去除废液
<3>吸附：
U
S
B
加入水解标本
√
√
√去除洗出液
Reagent12×5.0ml
√
√
√去除洗出液
<4>洗涤：
（准备收集）
U
S
B
Reagent23×1.0ml
√
√
√收集洗出液
───────────────────────
充分混合，此步中断2℃-8℃过夜
<5>标准及空白：
U
S
B
洗出液
1ml
1ml
1ml
DHEA标准溶液
/
20ul
/
<6>显色反应：
乙醚抽提
U
S
B
Reageut3
0.5ml
0.5ml
0.5ml
Reageut4
1.5ml
1.5ml
1.5ml
───────────────────────
35℃避光孵育30′
───────────────────────
水洗乙醚
4ml
4ml
4ml
振动混匀3-4分钟将乙醚层比色、波长520nm
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