激光共聚焦显微镜中文说明指导书.docx
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激光共聚焦显微镜中文说明指导书
激光共聚焦显微镜
FV1000
（倒置显微镜IX81）简易使用说明书
开启系统
1.打开计算机.
2.打开激光器.（打开钥匙开关.）
2-1.多线氩离子（458nm,488nm,514nm）ON
2-2氦氖绿（543nm）ON
2-3氦氖红（633nm）ON
3.打开汞灯电源开关.
4.登陆WindowsXP系统.
UserID:
Administrator
Password:
fluoview
5.双击快捷方法：
打开FV10-ASW应用软件.
UserID:
Administrator
Password:
Administrator
*系统软件开启需要等候一定时间.
显微镜镜下观察
微分干涉差观察
1.使用手控面板选择物镜.
（参考④Memo④.）
2.插入起偏镜.
3.插入微分干涉滑块.
4.点击FV10-ASW软件中图标.
Note1:
使用TD滑块控制卤素灯光强；
Note2:
检验滤色片转盘位置是否为“6.DICT”，假如不是，用手柄按下DICT图标
5.标本聚焦
显微镜镜下观察
荧光观察
1.使用手控面板选择物镜.
2.点击FV10-ASW软件中图标.
3.使用手控面板选择荧光滤色片.（参考④Memo④.）
4.标本聚焦.
扫描模式扫描速
获取单张图像（XY平面）（荧光图像）
例：
绿色荧光染色（FITC）
1.点击FV10-ASW软件中按钮
关闭汞灯快门.
同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察荧光染料.
*取消目前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定荧光染料，并反复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板能够用Close按钮.）
7.选择AutoHV,并选择扫描速度.
*伴随扫描速度变慢,在保持相同亮度前提下,背景噪音就会消除.
（也能够使用Kalmanaccumulation方法.
更多信息，参考附录2.）
8.点击XY按钮取得一幅图像.
9.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
10.保留该幅图像:
右击图像管理器中显示图像图标，选择另存为保留该幅图像.
（保留为“xml”类型是FV10-ASW软件专用图像格式.）
1.
点击FV10-ASW软件中按钮
关闭汞灯快门.
同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察荧光染料.
*取消目前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定荧光染料，并反复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板能够用Close按钮.）
7.选择AutoHV,并选择扫描速度.
*伴随扫描速度变慢,在保持相同亮度前提下,背景噪音就会消除.
（也能够使用Kalmanaccumulation方法.
更多信息，参考附录2.）
8.点击XY按钮取得一幅图像.
9.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
10.保留该幅图像:
右击图像管理器中显示图像图标，选择另存为保留该幅图像.
（保留为“xml”类型是FV10-ASW软件专用图像格式.）
获取单张图像（XY平面）（荧光图像）
例：
绿色荧光（Alexa488）＋红色荧光（Alexa546）二重染色序列扫描（这里介绍线序列扫描.）
1.点击FV10-ASW软件中按钮
关闭汞灯快门.
同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察荧光染料.
*取消目前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定荧光染料，并反复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板能够用Close按钮.）
8.选择AutoHV,并选择扫描速度.
*伴随扫描速度变慢,在保持相同亮度前提下,背景噪音就会消除.
（也能够使用Kalmanaccumulation方法.
更多信息，参考附录2.）
9.点击XY按钮取得一幅图像.
10点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
11.保留该幅图像:
右击图像管理器中显示图像图标，选择另存为保留该幅图像.
（保留为“xml”类型是FV10-ASW软件专用图像格式.）
（XY平面-单标+微分干涉差）
1.点击FV10-ASW软件中按钮
关闭汞灯快门.
同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察荧光染料.
*取消目前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定荧光染料，并反复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板能够用Close按钮.）
4.选择TD1.
（XY平面-单标+微分干涉差）
8.选择AutoHV,并选择扫描速度.
*伴随扫描速度变慢,在保持相同亮度前提下,背景噪音就会消除.
（也能够使用Kalmanaccumulation方法.
更多信息，参考附录2.）
9.点击XY按钮取得一幅图像.
10.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
11.保留该幅图像:
右击图像管理器中显示图像图标，选择另存为保留该幅图像.
（保留为“xml”类型是FV10-ASW软件专用图像格式.）
（XYZ扫描-双标）
1.采取13和14页步骤1到7.
确定Z轴上限和下限以下.
2.输入StepSize大小（点击OP按钮能够使用推荐值）,并选择
.
3.点击XYRepeat按钮开始扫描.
4.点击
按钮上移焦点位置.
（参考④Memo④.）
5.当图像显示抵达上限时,点击Set按钮确定.
6.点击
按钮下移焦点位置.
（参考④Memo④.）
7.当图像显示抵达下限时,点击Set按钮确定.
8.点击Stop按钮停止扫描.
（XYZ扫描-双标）
9.选择AutoHV,并选择扫描速度.
*伴随扫描速度变慢,在保持相同亮度前提下,背景噪音就会消除.
（也能够使用Kalmanaccumulation方法.
更多信息，参考附录2.）
10.选择Depth按钮.
11.点击XYZ按钮取得图像.
12.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
13.保留该幅图像:
右击图像管理器中显示图像图标，选择另存为保留该幅图像.
（保留为“xml”类型是FV10-ASW软件专用图像格式.）
*能够经过调用扫描状态来实现该设置.更多信息,参考附录5.
4.点击按钮
出现光谱设置窗口.
5.设置CHS1光谱带宽为10nm,以此为例.
（参考附录4相关改变光谱带宽方法.）
6.点击XYRepeat按钮开始扫描.
7.在观察图像同时,移动光谱带到图像
最亮位置状态.
（参考附录4相关改变光谱带宽方法.）
注:
移动光谱带位置要保持光谱带宽为10nm不变.
8.调整图像.
（参考附录1.）
9.点击Stop按钮停止扫描.
10选择AutoHV,并选择扫描速度.
*伴随扫描速度变慢,在保持相同亮度前提下,背景噪音就会消除.
（也能够使用Kalmanaccumulation方法.更多信息，参考附录2.）
11设定要扫描波长范围,光谱带宽和步距.
•Start=开始波长
•End=结束波长
•Resolution=光谱带宽
•StepSize=步距
12选择Lambda按钮.
13点击XYL按钮取得图像.
14点击SeriesDone按钮,“2DViewLiveImage（x）”2D界面就出现.
15.保留该幅图像:
右击图像管理器中显示图像图标，选择另存为保留该幅图像..
（保留为“oib”和"oif"类型是FV10-ASW软件专用图像格式.）
1.双击资源管理器中要选择打开文件.
1.点击按钮
并选择
.
2.要保留此图像,右击此图像,选择Save
Display并命名.
（百分比尺使用）
1.点击按钮
.
2.点击图像同时,拖放此百分比尺到一个特定位置.
3.点击手柄左端或右端,移动鼠标.改变百分比尺大小
4.选择百分比尺并右击选择属性设置.
5.设置具体百分比尺属性.
改变文本,颜色,字体等.
（3D图像重建）
以一定角度观察3D图像
1.点击按钮
.
2.创建3D图像.
3.拖动鼠标以一定角度观察图像.
→要保留此图像,进行下一页第6步操作.
观察3D图像某个横截面
4.点击按钮
并选定
.
5.拖动鼠标观察某个垂直横断面.→要保留此图像,进行下一页第6步操作.
（3D图像重建
保留上一页中第3、5选项图像
6.点击按钮
.
7.会创建一个2D图像（带文件名）.
8.保留该幅图像:
右击图像管理器中显示图像图标，选择另存为保留该幅图像.
（保留为“xml”类型是FV10-ASW软件专用图
1.
点击按钮
.
2.创建3D图像.
3.拖动鼠标以一定角度观察图像.
动画播放
4.点击并控制按钮实现图像围绕着X-轴旋转.
再次点击停止旋转.
点击并控制按钮实现图像围绕着Y-轴旋转.
再次点击停止旋转.
点击并控制按钮
实现图像围绕着Z-轴旋转.
再次点击停止旋转.
例:
绿色荧光（AlexaFluor488）和绿色荧光（YOYO-1）双标
1.
打开一幅AlexaFluor488单标取样XYL图像.
2.为AlexaFluor488选定一个封闭区域.
3.从Processing下拉菜单中选择
SpectralDeconvolution图标.
4.双击ROI1区域.
5.点击SaveProfile图标.
6.输入保留名字而且点击OK按钮将
AlexaFluor488光谱记载到数据库中.
7.对于YOYO1单标,反复1-6步.
8.打开一幅AlexaFluor488和YOYO1双标XYL图像.
9.从Processing下拉菜单中选择
SpectralDeconvolution图标.
10.双击数据库中记载AlexaFluor488和YOYO1图标.
11.检验处理类型设置为“Normal”而且点击Execute按钮.
12取得图像.
XY或XYZ图像每个通道存为
TIFF格式文件
XY或XYZ通道合并图像存为
TIFF格式文件
带有百分比尺图像存为BMP格式文件
动态图像存为AVI格式文件
1.右击图像管理器中显示图像图标,选择另存为保留该幅图像..
2.设置Saveas类型为TIFF并保留.
*存为BMP和JPEG格式也能够.
1.右击图像管理器中显示图像图标,选择另存为保留该幅图像..
2.设置Saveas类型为TIFF并保留.
3.检验要合并通道并保留.
*存为BMP和JPEG格式也能够.
**********************************************************************************
1.右击该幅图像.2.选择SaveDisplay并以新文件名保留该幅图像.
1.右击该图像.
2.选择SaveasAVI并以新文件名保留该图像.
保留到CD-R
1.插入一张CD-R光盘.
2.点击OK.
3.选择文件并拖放到CD-R窗口.
4.点击"WritethesefilestoCD."
5.点击Next.
6.开始刻录.
7.点击Finish按钮结束.
关闭系统
1.选择File/Exit,退出FV10-ASW软件.
2.退出WindowsXP.
（1）选择Start/ShutDown.
（2）在ShutDown窗口中,选择ShutDown并点击OK按钮.
3.关闭激光器.
（关闭钥匙开关.）
3-1.多线氩离子（458nm,488nm,
514nm）OFF
3-2.氦氖绿（543nm）OFF
3-3.氦氖红（633nm）OFF
4.关闭汞灯电源.
附录1共聚焦原理和调整原理
附录2
④④获取图像怎样降低背景噪音④④
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