分析方法验证方案.docx
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分析方法验证方案
异烟肼含量测定分析方法验证方案
验证原因:
验证类型:
新工程验证
再验证
其它
√
预验证
回忆性验证
转移验证
√
方法描述:
本分析方法为中国药典2010版二部方法。
为确保其检测结果准确,对该分析方法的专属性、精细度〔系统精细度、方法精细度、中间精细度〕、线性和围、准确度、耐用性进展评价。
验证依据:
中国药典2010年版分析方法〔295页〕
验证时间:
2010年07月09日~2010年07月10日
验证工程组成员及职责:
部门
成员
职责
QC
仪器设备确实认
QC
分析方法编写
QC
分析测试
QC
数据评估
质量部
审核批准
验证容:
-
序列号
确认测试工程
可承受标准
01
01.1
01.2
仪器设备确实认
高效液相色谱仪确实认
天平确实认
符合仪器设备确实认要求
符合仪器设备确实认要求
02
02.1
具体测试容
系统精细度
配置1份异烟肼工作标准溶液,连续进针6次,记录异烟肼峰面积、保存时间。
异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保存时间RSD≤2.0%。
异烟肼理论塔板数大于4000,拖尾因子在0.9~1.4之间。
02.2
方法精细度
平行配制同一批样品的6份样品溶液,每份溶液进样2针,计算样品含量及其相对标准偏差。
样品含量的RSD≤2.0%。
02.3
线性和围
以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100%,配制20%、60%、100%、140%、180%浓度的工作标准品溶液,每个浓度的标准品溶液进样1次,计算出回归方程和相关系数R。
R≥0.999
02.4
准确度
以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100%,取同一批样品,配制浓度为80%、100%和120%的样品溶液各3份,每份进样2针。
计算其回收率。
该定量方法的回收率应为98.0%~102.0%。
02.5
耐用性
配制异烟酸和异烟肼混合溶液,按以下条件改变方法,稳定后按顺序进样,计算异烟肼的理论塔板数,混合溶液中异烟酸和异烟肼的相对保存时间RRT。
a.改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。
b.改变柱温为23℃和27℃。
c.改变流动相缓冲液与甲醇配比为83:
17和87:
13。
d.同一填料不同色谱柱。
理论塔板数大于4000,拖尾因子在0.9~1.4之间,别离度R>1.5,相对保存时间RRT偏差绝对值不大于20%。
03
03.1
03.2
03.3
03.4
程序及文件
液相色谱仪校正规程
液相色谱仪操作规程
分析天平校正规程
分析天平操作规程
符合要求
符合要求
符合要求
符合要求
验证前准备:
a)人员培训:
培训人
培训时间
培训容
b)仪器设备、标准品和试剂:
仪器设备
仪器名称
型号
编号
校验有效期
高效液相色谱仪
MODEL200
标准品和试剂
名称
级别
厂家
批号
c)样品
名称
厂家
批号
验证过程:
色谱条件
色谱条件
色谱柱:
agilentODS-2长度:
250cm,径:
4.6mm,填料C18,填料粒度:
5µm
检测波长:
262nm,带宽30
柱温:
25℃
进样量:
20µl
流速:
1.0ml/min
流动相A:
0.02mol/l磷酸氢二钠溶液〔用磷酸调pH至6.0〕,流动相B:
甲醇
A:
B=85:
15
停顿时间:
12min
1.系统精细度
1.1.溶液配制
系统精细度溶液:
取异烟肼10mg,置100ml容量瓶中,精细称量,用水溶解并稀释至刻度。
1.2验证过程及结果
系统精细度溶液连续进样6次,记录其异烟肼峰面积、保存时间。
可承受标准:
异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保存时间RSD≤2.0%。
序号
保存时间(min)
峰面积
1
2
3
4
5
6
RSD%
结论:
2.重现性试验〔方法精细度〕
2.1.溶液配制
2.1.1.对照溶液:
取异烟肼工作标准品10mg,精细称量,置100ml容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度。
2.1.2.方法精细度溶液:
取异烟肼样品10mg置100ml容量瓶中,精细称定,用水溶解并稀释至刻度。
用此方法配置同一批号的样品溶液6份。
2.2.验证程序及结果
工作标准品溶液进2针,样品溶液各进2针。
记录异烟肼峰面积,计算样品含量。
可承受标准:
异烟肼含量的RSD≤2.0%。
样品批号:
称样量〔mg〕
峰面积
含量%
RSD%
1
2
平均值
结论:
3.线性和围
3.1.溶液配制
3.1.1.a供试品溶液:
取异烟肼50mg,置100ml容量瓶中,精细称量,用水溶解并稀释至刻度,混匀,即得。
3.1.2.线性点溶液:
精细移取a供试品溶液5ml、2ml、1ml、分别置10ml容量瓶中,用水稀释至刻度,得到浓度约为50ug/ml〔d供试品溶液〕、100ug/ml〔c供试品溶液〕、250ug/ml〔b供试品溶液〕、500ug/ml〔a供试品溶液〕的线性点溶液,再精细移取1mlb供试品溶液1ml置100ml容量瓶中,用水稀释至刻度,得到浓度约为2.5ug/ml〔e供试品溶液〕。
3.2.验证程序及结果
按色谱条件分别对线性点溶液进展分析,每个溶液进样1次。
以浓度为*轴,主峰峰面积平均值为Y轴,画出线性图,求出回归方程,计算线性相关系数R。
可承受标准:
R≥0.999
工程
〔*1〕
〔*2〕
〔*3〕
*4〕
〔*5〕
线性点溶液浓度(ug/ml)
异烟肼峰面积
线性围〔ug/ml〕
线性回归方程
相关系数R
结论:
4.准确度
4.1.溶液配制
4.1.1.对照溶液:
取异烟肼10mg,置100ml容量瓶中,精细称量,用水溶解并稀释至刻度,混匀,即得。
4.1.2.准确度溶液:
以对照溶液浓度为100%,配置80%、100%和120%浓度的准确度溶液。
即分别取同一批异烟肼样品8mg、10mg、12mg至100ml容量瓶中,精细称量,用水溶解并稀释至刻度。
每个浓度的准确度溶液配制3份。
4.2.验证程序及结果
按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进展分析,每个溶液各进2针,按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量,计算其回收率。
可承受标准:
该定量方法的回收率应为98.0%~102.0%。
回收率RSD≤2.0%。
样品批号
相应含量
称样量〔mg〕
峰面积
实测量〔mg〕
回收率%
1
2
平均值
80%
100%
120%
结论:
5.耐用性
5.1.溶液配制
5.1.1.混合溶液:
精细称取10mg异烟酸和10mg异烟肼样品置100ml容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,混匀,即得。
5.2.验证过程及结果
按以下条件改变方法,原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样,计算异烟肼的理论塔板数,拖尾因子。
计算相对保存时间RRT偏差绝对值。
a.改变柱温为23℃和27℃
b.改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。
c.改变0.02mol/l磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH至6.0)与甲醇配比为87:
13和83:
17。
d.选用同一填料的两个不同色谱柱比拟
可承受标准:
理论塔板数大于4000,拖尾因子在0.9~1.4之间。
别离度R>1.5,相对保存时间RRT偏差绝对值不大于20%。
条件
异烟肼理论塔板数
异烟肼拖尾因子
原条件
a
0.9ml/min
1.1ml/min
b
23℃
27℃
c
87:
13
83:
17
d
色谱柱1
色谱柱2
条件
异烟酸
RRT
偏差绝对值%
原条件
a
23℃
27℃
b
0.9ml/min
1.1ml/min
c
87:
13
83:
17
d
色谱柱1
色谱柱2
结论:
验证结论:
验证结果见表
验证工程
可承受标准
验证结果
判定
系统精细度
异烟肼的峰面积及保存时间的RSD%均不大于2.0%。
异烟肼理论塔板数大于4000。
方法精细度
RSD%不大于2.0%
线性和围
线性回归系数R应大于0.999
准确度
回收率在98.0%-102.0%之间
耐用性
理论塔板数大于4000,拖尾因子在0.9~1.4之间。
别离度R大于1.5,相对保存时间RRT偏差绝对值不大于20%
偏差及处理:
分析方法验证过程中出现的所有偏差都要记录并有效评估和处理。
再验证
再验证周期为3年。
验证负责人/日期
审核人/日期
批准人/日期