实验诊断学实验报告牡丹江医学院.docx

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实验诊断学实验报告牡丹江医学院

实验诊断学试验操作报告

目录

一、红细胞计数试验

二、血红蛋白测定

三、白细胞计数

四、白细胞分类计数

五、尿比重

六、尿沉渣定性检查

七、尿蛋白检查磺基水杨酸法

八、尿干化学分析

九、尿葡萄糖定性检查（班氏法）

一十、ABO血型测定

红细胞计数试验

实验目的：

通过红细胞计数实验

1、掌握红细胞计数方原理、方法及注意事项。

2、掌握血细胞计数板的结构

试验器材：

血细胞计数板、显微镜、盖玻片、试管、血红蛋白吸管、

生理盐水

实验原理：

一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数一定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞数报告。

操作步骤：

1、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。

2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。

3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，

上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。

4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。

5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。

6、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低

倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。

红细胞计数的区域：

中心大方格中的5个中方格（正中一个和四角各一个）。

计数原则：

数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线（双线）上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。

计算：

答案不唯一，言之有理即可

红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×201×106

或

红细胞数/L=5个中方格内红细胞数÷100×1012

式中×55个中方格换算成1个大方格

×101个大方格容积为0.1ul，换算成1.0uL。

×201血液的稀释倍数

×106由u1换算成L

数据处理：

RBC:

×l012/L

参考值男:

（4～5.5）×1012/L

　　　女：

（3.5～5）×1012/L

新生儿：

（6～7）×1012/L

注意事项：

1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血

凝块应重新采血。

2充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，

不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。

3、中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格红细胞数约为80—100个，

各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大（超过10个细胞以上的）应重混匀再充填。

血红蛋白测定

实验目的：

通过血红蛋白测定

1、氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。

2、掌握红血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。

试验仪器：

试管、微量吸管、分光光度计

实验原理：

血红蛋白中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰化钾氧化成高离子（Fe3+），血红蛋

白转化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子（CN-）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。

用光电比色计在540nm波长比色。

从HicN参考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。

操作步骤：

1、取试剂5毫升加入血液20ul混匀置5分钟

2、用721光电比色仪，540nm波长，试剂为空白调0点比色，读取

光密度，查标准曲线得结果。

计算：

血红蛋白（g/L）=测定管吸光度×367.7

数据处理：

答案不唯一，言之有理即可

Hb：

g／L

参考值男0.40～0.54L/L

女:

0.37～0.48L/L

儿童：

0.35～0.49L/L

新生儿：

0.50～0.60L/L

注意事项：

1、做血红蛋白测定，白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。

白细胞计数

实验目的：

掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。

实验器材：

显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。

实验原理：

用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经过换算求得每升血液内的白细胞数。

操作步骤：

1、取试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。

2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。

3、擦去管尖外部余血、轻轻注入稀释液底部，再吸取上清液清洗3次，摇匀。

4、将计数板与盖玻片用软布擦净，将盖玻片覆盖于计数池上，再

用微量吸管吸取悬液，充入计数池与盖玻片间的细缝隙中，静止2-3分钟，待白细胞下沉。

5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。

计算：

（四个大方格内WBC数/4）×10×20×106=WBC数/20×109/升

数据处理：

答案不唯一，言之有理即可

正常参考值：

成人：

（4-10）×109/升

新生儿：

（15-20）×109/升

6月-2岁：

（11-12）×109/升

白细胞分类计数

实验目的：

掌握白细胞分类计数、原理及技术。

实验器材：

显微镜、染色缸和架，载玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。

实验原理：

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经wright染色后，显微镜下观察，根

据白细胞形态特点逐个分类计数。

得出各种白细胞的相对比值，并注意观察其形态和质量的变化。

操作步骤：

1、取末梢血1滴。

置于载玻片的一端，以边缘平滑的推片制成血涂片，空

气干燥。

2、用蜡笔在血膜两端划线，以防染液溢出，然后将血片放于染色架上。

3、先加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定染色细胞0.5-1分钟。

4、按1：

1或1：

2加缓冲液与染料混匀，染色10分钟左右。

5、在血膜染10分钟后，用缓冲液或接近中性的水冲去洗液，待自然

干燥或滤纸吸干后，用镜油观察。

计算：

1、先用低倍镜观察血片染色情况，白细胞多少和细胞分布情况。

2、选择血涂片的体尾交界处，染色良好的区域，在油镜下计数

100-200个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各自白细胞所占数值（百分率）。

3、白细胞分类计数方法很多，常用的有，完全记录法、半记录法、

分类计数器计数法。

4、每个病人应分类白细胞数，视白细胞总数多少而定。

5、各类细胞所占的百分率乘以白细胞总数/升，既得每升血液中各类白细胞的度。

数据处理：

答案不唯一，言之有理即可

尿比重

实验器材：

比密计、比密桶

实验原理：

尿液比密与所含溶质成正比，溶质越多，尿比密越高，对浮标的浮力越大，

侵入尿液的比重计部分则越小，读数越大；反之，读数越小。

操作步骤：

1、充分混匀尿液后，沿管壁缓慢倒入小量杯中

2、比重计放入杯中使悬浮于中央，勿触及杯壁或杯底

3、比重计停稳后读取尿液凹面相切的刻度，即为被测尿液的比重

注意事项：

1、尿比密计必须经过校正，应用纯水在规定温度下观察比重是否标准

将结果增加0.001，每低3℃则减去0.001

3、尿内含Pr和Glu时的修正：

每10g/L蛋白质将比密减0.003，10g/L葡萄糖将比密减0.004

4、盐类沉淀的处理，将尿标本加温使盐类溶解，测定

数据处理：

答案不唯一，言之有理即可

尿沉渣定性检查

实验操作：

1、取新鲜尿液10ml于试管内1500r/min5分钟。

2、待离心机停后，取出离心管，弃去上清液。

留下0.2ml，轻轻离心使尿沉渣有形成分混匀。

3、取沉淀于玻片上镜检。

结果判断：

用10×10倍，观察其中有形成分管型，10×40倍观察细胞成分和计数，观察10个视野管型计数20个视野。

参考值：

1、细胞成分：

最低-最高值/HP

RBC0-3/HPWBC0-5个/HP

2、管型（透明）：

平均值/LP

3、尿结晶和盐类数量以每一高倍镜视野（＋）（2＋）（3＋）报告

三、注意事项：

1、清晨空腹第一次尿应在1h内送检

2、准备干净，干燥尿杯，留取中段尿，尿液细胞及管型的计数。

Addis1h尿沉渣计数

四、标本收集：

患者先排尿弃去准确收集3h尿液于清洁干燥器内

（标本留取5：

30-8：

30）

五、实验操作：

准备侧量3h尿量，充分混匀取尿液10ml，1500r/min5分钟，用吸管吸取上层尿液9ml留取1ml，吸取混匀尿液1滴注入计数盘中，cal计数10大方格，管型20个大方格。

六、计算：

1小时细胞=10个大方格细胞总数×（1000/10）×（3h尿量/3）

1小时Cost计数=（20个大方格管型数/2）×（1000/10）×（3h尿量/3）

式中1000为微升换算成毫升数，10为尿液浓缩倍数

答案不唯一，言之有理即可

七、实验注意事项：

1、尿液新鲜PH值应在6以下。

2、被检尿SG在1.026以下如<1.016的为低渗尿易破坏cell。

3、尿中有磷酸盐时应加少量冰乙酸，但勿加过多，使cell管型溶解。

尿蛋白检查磺基水杨酸法

实验原理：

磺基水杨酸为生物碱试剂，在酸性磺酸根阴离子上蛋白质氨基的阳离子结合成不溶性蛋白盐沉淀。

实验试剂：

磺基水杨酸溶液

三、实验方法：

取试管1只加入澄清尿液2-3ml滴加磺基水杨酸试剂0.1ml立即轻轻摇匀1分钟内观察结果。

实验结果判断：

阴性（－）：

清晰透明

微量（±）：

黑色背景下仅见轻度浑浊

弱阳性（＋）：

明显白雾状浑浊，无颗粒

阳性（＋＋）：

明显浑浊并出现颗粒

强阳性（＋＋＋）：

白雾性不明显浑浊并有小块状物

最强阳性（＋＋＋＋）：

严重浑浊并大量凝块。

尿干化学分析

测试项目：

尿胆原、胆红素、酮体、隐血、

蛋白质、葡萄糖、酸碱度、亚硝酸盐。

实验原理：

1、空白（校正块）：

尿在试纸块上分布的状态及尿本身的颜色，一般都会给测定结果带来误差，设空白块就是为了排除这些产生误差的因素，各项目都使用同一空白块。

2、酸碱度：

通过pH指示剂测定4.5-9的范围内的pH值，正常人的新鲜尿液pH值在5-7之间。

3、亚硝酸盐：

反应依赖于尿中革兰氏阴性细菌把硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐与对氨基苯砷酸反应生成重氮化合物，重氮化合物再与萘基乙二胺二盐酸结合呈现出桃红色。

4、葡萄糖：

根据葡萄糖氧化酶法反应原理，葡糖糖氧化酶特异性氧化β-D-葡糖糖，生成葡糖糖醛酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使指示剂氧化而呈现出蓝色。

5、蛋白质：

根据指示剂蛋白误差法原理，蛋白质与染料结合形成复合物产生变色，特别是对白蛋白的反应比对球蛋白、血红蛋白、本-周氏蛋白和粘蛋白更为灵敏。

6、隐血：

根据血红蛋白接触活性法原理，通过血红蛋白的类过氧化物酶样作用催化分解过氧化物，使邻联甲苯胺氧化呈色。

7、胆红素：

根据偶氮偶合法的原理，2，4-二氯苯氨重氮盐与胆红素进行特异性反应，并与胆红素的浓度相对应产生不同的颜色。

8、尿胆原：

根据偶氮结合法的原理，尿胆原在强酸条件下和重氮盐偶联形成胭脂红色素。

9、酮体：

根据硝普酸钠法原理，硝普酸钠和酮体在碱性条件下相互作用而呈现紫色，特别是乙酰乙酸对此特别灵敏。

实验操作：

1、测试条件：

环境温度（25±5）℃，相对湿度≤80％，推荐最佳测试温度23-27℃.

2、取一试纸条，拿住试纸条印有厂标的一端，把试纸条完全侵入尿样中，2秒钟后取出。

3、在卫生纸上蘸掉试纸条边缘多余的尿液后再放入仪器中进行测定。

项目

参考范围

酸碱度

5.5-7.0

亚硝酸盐

0umol/L

葡萄糖

＜2.8mmol/L

蛋白质

＜0.15g/L

隐血

＜10cells/uL

胆红素

0umol/L

尿胆原

3.2-16umol/L

酮体

0mmol/L

尿葡萄糖定性检查（班氏法）

实验目的：

掌握尿葡萄糖定性的班氏法。

实验原理：

葡萄糖或其他还原性糖的醛基在热碱性溶液中，能将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原为黄色的氢氧化铜，进而形成红色氧化亚铜沉淀。

实验器材：

试管架、中试管、滴管、试管夹、酒精灯、班氏试剂

实验操作：

1、鉴定班氏试剂质量：

取试管一支，加入班氏试剂2.0ml，摇动试管徐徐加热至沸腾，观察试剂有无颜色及性状变化，若试剂仍为透明蓝色，可进行以下实验。

2、加尿液：

向班氏试剂中加离心后的尿液0.2ml（约4滴），混匀。

3、加热沸腾：

继续煮沸1-2min，或置沸水浴5min，自然冷却。

4、判断结果：

见下表Benidict糖定性实验结果判定

答案不唯一，言之有理即可

ABO血型测定

一、实验目的：

掌握ABO血型测定原理及技术。

二、实验原理：

红细胞血型抗原与相应抗体特异性结合，可发生凝集反应，通过正反定

型试验来确定ABO血型。

三、实验器材：

载玻片、微量吸管、抗A抗B试剂

四、实验操作：

玻片法；抗A试剂、抗B试剂分别与受检者全血结合，按照有无凝集判定结果。

五、试验结果：

答案不唯一，言之有理即可

---仪之飞儿