不同种类浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响毕业论文.docx
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不同种类浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响毕业论文
毕业论文
题目：
不同种类、浓度的激素配合使用对
银斑百里香无菌苗生长的影响
学院：
农业与生物技术学院
专业：
园艺
目录
河西学院本科生毕业论文（设计）诚信声明2
河西学院本科生毕业论文（设计）开题报告3
论文进度安排和采取的主要措施8
主要参考资料和文献8
不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响10
摘要10
引言10
1.试验材料与方法11
1.1供试材料11
1.2培养基配制11
1.3培养条件11
1.4接种条件及培养方法11
2.结果与分析11
2.1不同浓度的NAA与6-BA配合使用对银斑百里香的影响11
2.1.1NAA与6-BA配合使用对银斑百里香种子发芽率的影响12
2.1.2NAA与6-BA配比对银斑百里香无菌苗生长的影响13
2.2不同浓度的2,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香的影响14
2.2.12,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香种子的影响14
2.2.22,4-D和6-BA配合使用对百里香无菌苗生长状况的影响15
3.讨论与结论16
4.参考文献17
附录：
18
河西学院本科生毕业论文（设计）题目审批表18
河西学院农业与生物技术学院指导教师指导毕业论文情况登记表19
河西学院毕业论文（设计）指导教师评审表20
河西学院本科生毕业论文（设计）答辩记录表21
致谢22
河西学院本科生毕业论文（设计）诚信声明
本人郑重声明：
所呈交的本科毕业论文（设计），是本人在指导老师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。
对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明。
本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
作者签名：
二O一二年六月十日
河西学院本科生毕业论文（设计）开题报告
论文题目
不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响
学生姓名
张亚萍
所属学院
农业与生物技术学院
专业
园艺
年级
2008级
指导教师
张春梅
所在单位
河西学院
职称
副教授
开题日期
2011年3月
选题的根据：
选题的理论、实际意义并综述有关本选题的研究动态和自己的见解
1.选题的理论、实际意义
百里香（Thymusmongolicus），俗称“地椒、地花椒”，是唇形科半灌木。
全球百里香属植物有400多个种与亚种，100多个栽培品种。
中国有12种，2变种，主要分布于我国西北高原，包括甘肃、陕西、青海、宁夏、新疆、北京、东北及河北、山西北部、内蒙古多石山地、黄土丘陵和沙地上（刘军2010）。
百里香属植物为世界名贵香料植物和芳香植物，是国际标准化组织（InternationalStandardOrganization，ISO）1970年就公布并被世界许多国家承认的香辛料之一（樊明涛等2001）。
不但可以鲜食、做调味保健品（曹军胜2002），而且全草入药，含有黄酮类成分，是一种广谱性药物，具有行气止痛、防暑避暑、补肝明目、滋胃润肺、利尿排水、抗病毒、杀菌、通经、抗痉挛、驱蠕虫、升血压、刺激白血球等功效，是强力的天然“抗生素”（赵颖等2009）。
由于含有芳香精油，还可用于香水、香皂、化妆品等日用工业品，在医药、传统日用化工及精细化工等领域得到广泛应用。
此外，百里香属为旱生植物，多生于沙质坡地、砾石坡地、沙质草地等瘠薄土壤之上，适应性强，冬季可抵御-30℃以下的低温，夏季能耐受40℃以上的高温，具有抗性强、耐旱、耐寒、耐瘠薄、耐风蚀、耐盐碱等优良的生态特性。
根系发达，细根如网，繁殖能力强，种群数量大，单株覆盖面积可达0.8-1.2㎡，常形成大面积的百里香草原，是不可多得的优良地被植物。
百里香花期长，花色艳丽，繁殖力强，可建植花坛性质草坪、疏林草坪、游憩草坪，养护管理粗放，更换周期长，在城市园林绿化中具有广阔的应用前景，是将来城市多样绿化地被植物的一个重要发展方面。
所以，加强百里香在城市园林绿化应用方面的研究，对于丰富甘肃乃至全国城市园林绿化树种选择具有重要意义。
目前，许多国外的百里香品种已经在我国台湾、福建、深圳、武汉、南京、上海和安徽等省市广泛栽培。
与国外品种相比，我国本土的野生百里香适应性较强，病虫害较少，栽培成本低，因而是一种开发潜力较大的可持续利用的芳香植物。
综上所述，中国野生百里香属植物资源丰富，分布广，经济价值高，兼有较高的食用、
药用和化工应用价值，同时还有香化，绿化和环保等作用。
目前对河西地区百里香的生境、分布特点、种质资源等至今还没有人进行过系统调查，品种选育更是空白，生产上采用的品种仍为半野生或农家品种。
百里香的栽培非常粗放，对其栽培技术方面的研究甚少。
因此，研究河西地区百里香高产栽培技术和在沙产业开发中的应用，可改善生态环境，固土护坡，环境保护等意义重大，应用前景十分广阔。
2.研究动态
银斑百里香是河西地区普遍生长的一种植物，属于百里香属唇形科半灌木。
它资源丰富，经济价值高，兼有较高的食用、药用和化工应用价值，同时还有香化，绿化和环保等作用，市场前景广阔。
但是现在对河西地区银斑百里香的研究和应用甚少。
为了加快开发利用银班百里香，本文研究了不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响，筛选出了最适宜无菌苗生长的激素配比，为其今后的大面积利用和组织培养奠定基础。
2.1国内的研究动态
杨莉等（2010）以腋芽诱导的百里香（ThymusvulgarisL．）不定芽进行增殖培养条件筛选，采用NAA和6-BA组合进行试验，结果表明，高浓度的6-BA不适合不定芽的增殖，NAA0.25mg/L＋6-BA0.25mg/L的组合不仅能使不定芽快速增殖，而且不定芽增殖的综合质量也好，无畸形叶片产生。
不定芽增殖最适宜的培养基为MS＋NAA0.25mg/L＋6-BA0.25mg/L，增殖系数高达5.97。
不定芽在不同的培养基上的增殖效果也不一样，在21d时液体光照的培养基增殖系数达到最大，生物量也达到最大；而固体培养基虽然在35d时增殖系数高达19.59。
从不定芽增殖的过程中可以看出，在液体光照培养基中培养21d的不定芽，用来提取精油是比较合适的。
在21d时，培养基的电导率和pH值已不适应不定芽的继续增殖，此时可以通过添加培养基和营养物质来改善不定芽的生长条件，让其继续增殖，以利于后续扩大生产。
魏艳等（2007）以百里香顶芽和腋芽为试材，MS为基本培养基；MS+6-BA1.5mg/L+IBA0.1mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖为增殖培养；l/2MS+IBA0.5mg/L+0.7%琼脂+2%蔗糖
生根培养基，对河北地区百里香进行了组织培养。
赵颖等（2009）为了得到优良水土保持及资源型植物百里香的组织培养快繁技术，以MS培养基为基础，加入不同浓度的植物激素对百里香的茎尖和嫩枝进行组织培养。
结果表明：
不同浓度的6-BA和NAA对百里香芽尖分化与增殖的影响有明显差异，激素用量低于或
高于最适浓度时分化率下降，百里香组培芽增殖的最适培养基为MS+BA0.6mg/L+NAA
0.2mg/L。
其最适生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L。
李晓东等（2009）试验建立了一种普通百里香的快速繁殖方法。
以带腋芽的茎段为外植体，比较了不同浓度的IAA和6-BA组合对不定芽的诱导和增殖的效果，以及不同浓度的IBA和多效唑组合对枝条生根的影响。
试验表明：
6-BA可以有效促进普通百里香腋芽（T．vulgaris）的增殖，但是高浓度的6-BA会使芽畸形，主要表现在叶片畸形和玻璃化现象上。
而在培养基中适当降低6-BA浓度，可以使芽伸长。
如果更换培养基可提高芽增殖效率，不定芽在MS＋IAA0.25mg/L＋6-BA0.25mg/L培养基中28d质量增加了30倍左右，因而在短时间内就可以获得大量普通百里香（T．vulgaris）枝条。
有关普通百里香（T．vulgaris）的组织培养，国内还鲜有报道。
刘军（2010）在亚洲百里香不定芽和愈伤组织的诱导实验研究中，以百里香的茎段、叶片等外植体进行体外培养，利用多种不同培养基成功诱导出亚洲百里香（Thymusserpyllumvar.asiaticusKitag）的不定芽和愈伤组织。
从结果来看，愈伤组织的诱导较为困难，特别是继代培养的褐化死亡现象需进行研究。
在愈伤组织诱导中2,4-D与NAA的浓度比在0.8~1.6之间时诱导此种百里香的愈伤组织的效果较好；2,4-D与NAA浓度比大于或等于2时不能诱导出该种百里香的愈伤组织；2,4-D与NAA的浓度比小于0.8时也不能诱导出该种百里香的愈伤组织。
员铭等（2007）在铺地百里香增殖培养基优化研究中，研究了IBA、6-BA、蔗糖及活性炭不同含量配合使用对铺地百里香增殖快繁培养的影响，筛选出铺地百里香最佳增殖培养基为MS+IBA1.0mg/L+6-BA0.1mg/L+蔗糖20%。
沙红（2004）在几种药用芳香植物组织培养快速繁殖的研究中对百里香（Th.serpyllum）进行了组织培养，试验表明：
其最佳增殖培养基为MS+BA1.5mg/L+IBA0.08mg/L，平均增殖
倍数4.24；最佳生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，附加0.5mg/LIBA，2%蔗糖浓度，生根率可达100%。
赵庆臻（2002）对五脉百里香进行了组培快繁尝试，采用野生带腋芽茎段作为组培材料。
虽百里香属植物的组培快繁研究已历时多年，但组培技还未得到广泛应用。
魏春雁（1998）对于兴安百里香叶和嫩茎进行了愈伤组织诱导培养，认为MS+2,4-D2.0mg/L培养基效果最好。
1.2国外的研究状况
20世纪80年代，Furmanowa等（1992）对Th.vulgaris进行了组织培养，并获得了再生植株。
Mendes.M.L.等（1999）以百里香（Th.mastichinaL.）茎段为外植体，MS为基本培养基，认为0.1mg/LBAP有利于百里香的增殖，1mg/LNAA有利于生根。
3.自己对本试验的见解
近十多年来，人们开始采用组织培养的方法获得银斑百里香的无菌幼苗或者诱导愈伤组织，筛选出不同培养目的下的优良激素组合。
此方法具有很多的优点：
1.采用组织培养
可大大地缩短生产周期；2.组织培养不受环境条件的影响，可周年生产，提高了产量和经济效益；3.百里香具有经济价值、营养价值和化工应用价值，同时还有香化，绿化和环保等作用；此外，银斑百里香可采用枝、茎、叶、根和种子等作为外植体；国内外对不同地区的百里香都有研究，但河西地区的银斑百里香的资源丰富，但研究尚未展开，其它百里香品种的研究现状为基础研究与应用研究脱节（张继等2010）。
鉴于此，对银斑百里香的资源有待开发利用，尤其在组织培养方面的研究即培养基的优化研究应备受重视。
论文的主要内容、基本要求及其主要的研究方法：
1.论文主要内容
1.1试验材料与方法
1.1.1试验材料
银斑百里香（T.vulgaris‘SilverPosie’）种子（于2011年9月采自张掖市大满乡）。
1.1.2试验验方法
以MS培养基为基本培养基，NAA设0.1mg/L、0.15mg/L、0.2mg/L、0.25mg/L四个
浓度，6-BA设0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L四个浓度，2,4-D设0.3mg/L、0.6mg/L、
0.9mg/L、1.2mg/L四个浓度。
研究不同种类、浓度的生长激素配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响。
接种7d后检查，移除被污染培养基，统计生长情况。
1.2结果与分析
1.2.1不同浓度的NAA与6-BA配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响
1.2.2不同浓度的2,4-D和6-BA配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响
1.3结论与讨论
2.论文基本要求
2.1试验实施
试验设在河西学院生命科学实验楼组织培养实验室内，试验于2011年3月下旬-2011年12月结束。
2.2选题要求
（1）选题后，认真查阅相关文献，阅读领会毕业论文的内容和要求，制定试验计划、工
作计划和进度表，做好各种准备工作。
（2）定期向指导教师汇报工作进展情况，遇到的疑难问题争取及时得到教师的指导。
（3）毕业论文打印要字迹清楚，撰写要符合本专业毕业论文撰写规范。
3.论文主要研究方法
组织培养的方法；
论文进度安排和采取的主要措施：
1.2010年5月至2011年2月，查找相关资料
2.2011年3月至2011年4月，文献综述撰写；
3.2011年4月至2011年6月，实验设计；
4.2011年9月至2011年11月，实验实施；
5.2011年11月至2011年12月，毕业论文初稿的撰写；
6.2012年6月，论文答辩。
主要参考资料和文献：
曹军胜.百里香保健酱油的研制[J].中国酿造,2002,29-30.
段继功.红枸杞百里香保健茶[J].中国土特产,1994,（6）:
32.
FURMANOWAM，OLSZOWSKAO．MicropropagationofThyme［J］．In：
BajajYPS（Ed）BioteclmologyinAgriculture
andForestry,1992
（2）;230-243.
黄健,马莉,姚雷等,七种百里香精油的主成分分析及其化学型[J].上海交通大学学报（农业科学版）,2009,27（3）:
207-209.
李晓东,王永飞,马三梅等,普通百里香的组织培养与快素繁殖[J].湖北农业科学,2009,48（6）:
1294-1297.
刘军.亚洲百里香不定芽和愈伤组织的诱导[J].内蒙古科技与经济,2010,207（5）:
56-57.
刘云斌.百里香天然资源及其园林应用[J].林业实用技术,2005,
（2）:
43-44.
Mendes.M.L,InvitrocloningofThymusmastichinaL.[J].FieldgrownPlantsActaHorticulture,1999,502:
303-306.
樊明涛,陈锦屏.百里香提取物抑菌特性的研究[J].微生物学报,2001,41（4）:
499-504.
沙红.几种药用芳香植物组织培养快速繁殖的研究[A]硕士学位论文[C].新疆:
新疆农业大学,2004.
魏春雁.百里香研究[M].长春:
吉林科学技术出版社,2004:
12-89.
魏艳,聂艳霞,赵惠恩等.百里香的组织培养[J].植物生理学通讯,2007,43（3）:
516.
员铭,吕国华.铺地百里香增殖培养基优化研究[J].北方园艺,2007（9）:
198-199.
张继,田玉汝,刘忠旺等.百里香属植物研究进展[J].北方园艺,2010
（1）:
226~228.
赵颖,武玲.百里香的组织培养与快速繁殖技术[J].内蒙古林业科技,2009（5）;44-45.
周俊辉,周厚高,刘花全.植物组织培养中的内生细菌污染问题[J].广西植物,2003,23
（1）:
41-47.
赵庆臻,阎华超,程霜等.地椒的组织培养及植株再生[J].植物生理学通讯,2002,38（4）:
357.
指导教师意见：
签名：
年月日
教研室意见
负责人签名：
年月日
学院意见
负责人签名：
年月日
不同种类、浓度的激素配合使用对银斑百里香
无菌苗生长的影响
张亚萍
指导老师张春梅
（河西学院农业与生物技术学院甘肃张掖734000）
摘要：
以银斑百里香种子为试材，研究了不同浓度的NAA（萘乙酸）和2,4-D（2，4二氯苯氧乙酸）与6-BA（6-苄基氨基嘌呤）配合使用对银斑百里香无菌苗生长的影响。
结果表明，NAA在0.15（mg/L）和2,4-D在0.45（mg/L）是银斑百里香种子萌发成无菌苗的适宜浓度；MS+NAA（0.15mg/L）+6-BA（0.6mg/L）和MS+2,4-D（0.45mg/L）+6-BA（0.6mg/L）的培养基中银斑百里香无菌苗生长最佳。
关键词：
银斑百里香；植物生长激素；无菌苗
EffectsonDifferentthegrowingofAsepticseedlingsontheThymusvulgaris‘SilverPosie’
ZHANGYa-ping
Tutor:
ZHANGChun-mei
（CollegeofAgricultureandBiologyTechnology,HexiUniversity,ZhangYe,Gansu734000）
Abstract:
ThepaperwastostudytheeffectsofvariousconcentrationofplantgrowthhormonessuchasNAA,2,4-Dand6-BAonseedsofThymusvulgaris‘SilverPosie’.TheresultsshowedthatthemediumofMS＋NAA（0.15mg/L）＋6-BA（0.6mg/L）andMS＋2,4-D（0.45mg/L）＋6-BA（0.6mg/L）weresuitableforinducingseedings.Inaddition,NAA（0.15mg/L）and2,4-D（0.45mg/L）wereoptimumconcentrationforinducingtheseedingsofThymusvulgaris‘SilverPosie’.
Keywords:
Thymusvulgaris‘SilverPosie’;plantgrowthhormones;seedlings
引言
百里香（Thymusmongolicus），俗称“地椒、地姜、地花椒、麝香草”，是唇形科半灌木芳香植物。
原产于地中海南岸，全球约300-400个种，我国有11个种，2个变种，主要分布于西北高原，包括甘肃、陕西、青海、宁夏、新疆、北京、东北及河北、山西北部、内蒙古多石山地、黄土丘陵和沙地上（刘云斌2005）。
是世界许多国家承认的香辛料之一（樊明涛等2001），不但可以鲜食、做调味保健品（曹军胜2002;刘军2010），而且，因含有黄酮类成分而全草入药，是一种广谱性药物，具有行气止痛、防暑避暑、补肝明目、滋胃润肺、利尿排水、抗病毒、杀菌、通经、抗痉挛、驱蠕虫、升血压、刺激白血球等功效，是强力的天然“抗生素”（赵颖等2009），在医药、传统日用化工及精细化工等领域得到广泛应用，具有极好的开发利用价值。
通过植物组织培养方法快速繁殖百里香，不但加速品种繁殖速度，还可扩大种质资源，保持优良品种的种性。
种子是建立植物无菌体系的良好外植体（魏春雁2004），但百里香结实量低，种子败育多（周俊辉等2003）。
本试验以银斑百里香种子为试材，探讨了不同种类、浓度的激素配合使用，对银斑百里香种子萌发的影响和无菌苗生长的影响，为银斑百里香获得无菌苗、诱导愈伤组织和资源的奠定坚实的基础。
1.试验材料与方法
1.1供试材料
银斑百里香（T.vulgaris‘SilverPosie’）（黄健等2009）种子，于2011年9月采自张掖市大满乡。
1.2培养基配制
供试药品有NAA、6-BA、2,4-D，各设四个浓度梯度为：
A为NAA设0.1、0.15、0.2、0.25mg/L四个浓度，B为6-BA设0.4、0.6、0.8、1.0mg/L四个浓度，C为2,4-D设0.15、0.3、0.45、0.6mg/L四个浓度。
基本培养基为MS培养基，琼脂含量0.6%，培养基灭菌前pH调至5.8。
根据配比将激素NAA、2,4-D和6-BA配合使用。
1.3培养条件
培养温度（25±2）℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000Lx，培养30d后调查其生长状况。
1.4接种条件及培养方法
将采集的银斑百里香种子用纱布包好，在自来水上冲洗10min，沥干水分后置于超净工作台上。
将冲洗干净的种子用75％酒精浸泡消毒处理45s，取出后用无菌水冲洗3次，移入活性氯含量为8%～9%的NaClO振荡消毒4min，将种子再次取出置于无菌水中振荡重复冲洗5次，而后沥干置于接种盘上备用。
在无菌操作室中，将灭菌后的银斑百里香种子，接种于含有不同浓度NAA、2,4-D与6-BA配比的MS培养基中，每处理重复3次，每重复接种10瓶，随机抽取10株进行数据的采集。
随时移除被污染培养基。
2.结果与分析
2.1不同浓度的NAA与6-BA配合使用对银斑百里香的影响
2.1.1NAA与6-BA配合使用对银斑百里香种子发芽率的影响
以MS为基本培养基，使用不同浓度的NAA和6-BA配合使用，15-20d后统计银斑百里香种子的发芽情况（见表1）。
表1NAA、6-BA对银斑百里香种子发芽率（%）的影响
Table2TheeffectsofNAAand6-BAonthegerminationrateofThymusvulgaris‘SilverPosie’seed
处理
发芽时间（月-日）
重复1
重复2
重复3
平均发芽率%
0.05
显著水平
0.01
显著水平
A1B1
10-5
18
16
12
0.5111
a
AB
A1B2
10-6
20
12
23
0.6111
ab
AB
A1B3
10-6
18
16
17
0.5667
ab
ABC
A1B4
10-5
20
17
15
0.5778
ab
ABC
A2B1
10-5
18
24
16
0.6444
a
A
A2B2
10-5
20
20
18
0.6444
a
A
A2B3
10-5
18
19
18
0.6111
ab
AB
A2B4
10-5
21
18
19
0.6444
a
A
A3B1
10-5
18
16
16
0.5556
ab
ABC
A3B2
10-6
12
21
20
0.5889
ab
AB
A3B3
10-5
16
16
17
0.5444
ab
ABC
A3B4
10-6
16
14
18
0.5333
abc
ABC
A4B1
10-6
14
16
17
0.5222
abc
ABC
A4B2
10-6
12
14
16
0.4667
bc
BC
A4B3
10-6
16
15
15
0.5111
abc
ABC
A4B4
10-8
9
12
14
0.3889
c
C
Ck
10-8
4
1
0
0.0556
d
D
注：
表中所列数字为对应培养基中种子的发芽个数。
由表1可知，在NAA与6-BA各浓度配合使用下，对发芽率的影响A4B4和对照外其它各组合均无显著差异性
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