最低抑菌浓度MIC测定.docx

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最低抑菌浓度MIC测定

附件3.4

最低抑菌浓度（MIC）测定

1.菌悬液的制备

刮取18～20小时的培养物，在管壁上充分研磨后混悬于1ml缓冲液中，借助比浊仪，调菌悬液浓度至104/ml，于1小时用多点接种仪接种（放置室温应大于25℃）。

2.MIC测定

（1）抗菌药物储存液制备

⏹抗菌药物称量及配制：

根据各抗菌药物的纯度称取，以目前所用抗菌药物为例。

抗菌素

纯度

称量（mg）

加溶剂（ml）

储存液浓度（μg/ml）

四环素

100%

3.2

1

3200

大观霉素

63.4%

40.38

1

25600

头孢曲松

81.5%

2.45

1

2000

环丙沙星

84.4

3.8

1

3200

⏹分装与保存：

每管200μl，-70℃可保存一年。

（2）抗菌药物工作液制备

青霉素：

管号

原液

0

11

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

浓度（μg/ml）

3200

1600

800

400

200

100

50

25

12.5

6.25

3.12

1.56

0.78

取量（μl）

200

→

200

→

200→

200

→

200→

200→

200

→

200→

200

→

200

→

200→

200→

200

溶剂（μl）

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

四环素:

管号

原液

0

1

浓度（μg/ml）

3200

1600

800

取量（μl）

200

→

200

→

200

溶剂（μl）

200

200

200

大观霉素：

管号

0

7

6

5

4

3

2

1

浓度（μg/ml）

25600

12800

6400

3200

1600

800

400

200

取量（μl）

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

溶剂（μl）

200

200

200

200

200

200

200

200

头孢曲松:

管号

原液

0

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

浓度

（μg/ml）

2000

200

100

50

25

12.5

6.25

3.12

1.56

0.78

0.4

0.2

取量（μl）

40

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

溶剂（μl）

360

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

环丙沙星：

管号

原液

0

13

12

11

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

浓度（ug/ml）

3200

1600

800

400

200

100

50

25

12.5

6.25

3.12

1.56

0.78

0.4

0.2

取量（μl）

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

溶剂（μl）

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

（3）抗菌药物梯度培养皿的制备

⏹培养皿编号：

按各抗菌药物浓度编号。

⏹将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中，与15ml50℃预温的培养基充分混匀，平放在超净台，半开培养皿盖至培养基凝固后，用塑料袋密封保存于4℃冰箱。

（4）菌悬液接种与培养

⏹多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理，其他配件用酒精消毒处理；使用前必须确认完全烘干。

⏹按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿，接种菌后置超净台直至菌悬液渗入。

⏹置35℃～36℃、5%～10%CO2一定湿度的环境中培养。

⏹记录放置时间。

⏹培养18～24小时观察结果。

（5）结果判读

⏹观察细菌生长情况：

-记录结果读取时间。

-在适宜的光线下，观察对照培养皿的菌落生长情况，并对所有菌株进行初步鉴定（涂片染色和氧化酶试验）。

-比较观察对照平皿和抗菌药物平皿，进行判读：

接种点有1个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。

⏹MIC判读与记录：

-MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为μg/ml。

-记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况，在《WHO参考菌株及MIC实验结果记录表》用（+）表示生长，（-）表示无生长。

-每批实验结果必须由另外一名技术人员复读、签字，以确保结果的准确性。

⏹参考菌株的判读：

-本次测定的参考菌株MIC值在标准MIC值围或在标准MIC值±1个浓度围表明本次试验有效。

-本次测定的参考菌株MIC值超出上述围则表明本次试验无效，需重新配制抗菌药物平皿和测定。

3.β－酰胺酶测定

（1）纸片酸度定量法

⏹将一小片滤纸置于空平皿中：

⏹让滤纸吸足青霉素液（pH值8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液100ml+0.2g溴甲酚紫+5g无缓冲剂的结晶青霉素）：

⏹用接种环将10～20个菌落涂到滤纸上，涂膜直径约为5mm，35℃孵育30分钟：

⏹观察结果：

产生β－酰胺酶的淋球菌使滤纸颜色由紫变黄。

（2）产色头孢菌素法

将头孢硝噻吩纸片置于空平皿中，用接种环将菌落涂到纸片上，3分钟观察有无颜色变化，变红者为β－酰胺酶阳性。

附件3.5

WHO参考菌株及淋球菌临床分离株MIC实验结果记录表

记录时间：

实验人员：

核读人员：

①青霉素（P），②四环素（T）及β－酰胺酶：

平皿号

P1

P2

P3

P4

P5

P6

P7

P8

P9

P10

P11

T1

β－酰胺酶

浓度（μg/ml）

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.5

1

2

4

8

8

A

B

C

D

E

１

２

合计

③大观霉素（S）：

平皿号

S1

S2

S3

S4

S5

S6

S7

浓度（μg/ml）

2

4

8

16

32

64

128

A

B

C

D

E

1

2

合计

④头孢曲松（CE）:

平皿号

CE1

CE2

CE3

CE4

CE5

CE6

CE7

CE8

CE9

CE10

浓度（μg/ml）

0.002

0.004

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.50

1

A

B

C

D

E

1

2

合计

⑤环丙沙星（CI）：

平皿号

CI1

CI2

CI3

CI4

CI5

CI6

CI7

CI8

CI9

CI10

CI11

CI12

CI13

浓度（μg/ml）

0.002

0.004

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.50

1

2

4

8

A

B

C

D

E

1

2

合计

附件3.6

淋球菌临床分离株对各监测药物MIC结果统计表

①青霉素：

浓度（μg/ml）

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.5

1

2

4

8

总数

菌株数

②四环素/β－酰胺酶:

浓度（μg/ml）

8

β－酰胺酶

总数

菌株数

③大观霉素：

浓度（μg/ml）

2

4

8

16

32

64

128

总数

菌株数

④头孢曲松:

浓度（μg/ml

0.002

0.004

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.50

1

总数

菌株数

⑤环丙沙星：

浓度（μg/ml）

0.002

0.004

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.50

1

2

4

8

总数

菌株数

附件3.7

抗菌药物敏感性的判断标准

敏感（S）

中敏（IS）

耐药（R）

四环素

≤0.5

≥1

≥16（TRNG）

大观霉素

≤64

≥128

头孢曲松

≤0.03

0.06-0.5

≥1

环丙沙星

≤0.03

0.06-0.5

≥1

附件3.8

淋球菌临床分离株对各监测药物敏感性结果统计表

β－酰胺酶

药敏情况

抗菌药物

菌数

＋

－

耐药

中敏

敏感

青霉素

大观霉素

环丙沙星

头孢曲松

TRNG

＋

－

四环素

附件3.9

参考菌株的MIC值

参考

菌株

青霉素

四环素

大观霉素

头孢曲松

环丙沙星

MIC

畴

MIC

畴

MIC

畴

MIC

畴

MIC

畴

WHOA

0．008

S

0.25

>128

R

≤0.0005

S

0.016

S

WHOB

0．06

LS

0.25

≤8

S

0.004

S

0.016

S

WHOC

0.5

LS

1

16

S

0.016

S

0.016

S

WHOD

1

R

4

16

S

0.016

S

0.03

S

WHOE

>2

PPNG

1

16

S

0.004

S

0.016

S

WHOF

0.016

S

≤8

≤64

S

≤0.03

S

0.016

S

WHOG

0.5

LS

32

TRNG

≤64

S

≤0.03

S

0.25

LS

WHOH

0.25

LS

≤8

≤64

S

≤0.03

S

2

R

WHOI

2

R

≤8

≤64

S

≤0.03

S

0.5

LS

WHOJ

>2

PPNG

≤8

≤64

S

≤0.03

S

8

HLR

WHOL

2

R

（CMRNG）

≤64

S

0.125

LS

16

HLR

WHOO

32

R

（PPNG）

>1024

R

0.016

S

0.03

S

WHOQ

1

R

（CMRNG）

≤64

S

≤0.03

S

1

R

●S=敏感LS=低敏R=耐药PPNG=产青霉素酶淋球菌

●TRNG=质粒介导的耐四环素淋球菌HLR=高度耐药

附件3.10

淋球菌质控菌株药物敏感性检测结果报告表

质控菌株号：

监测单位名称

实验人员：

实验日期（年/月/日）

质控菌株

敏感性畴

（μg/ml）

青霉素

敏感（S）/低敏（LS）

耐药（R）/PPNG

头孢曲松

敏感（S）

低敏（LS）

环丙沙星

敏感（S）/低敏（LS）

耐药（R）

大观霉素

敏感（S）/

耐药（R）

四环素

TRNG/

非TRNG

1．MIC值

敏感性畴

2.MIC值

敏感性畴

3．MIC值

敏感性畴

4.MIC值

敏感性畴

5．MIC值

敏感性畴

6.MIC值

敏感性畴

附件4

性病病例报告资料分析方案

一、数据来源

（一）性病监测点管理机构：

从中国疾病预防控制信息系统中的《疾病监测信息报告管理系统》、《中国疾病预防控制基本信息系统》选择本监测点报告的性病和人口等相关数据进行分析。

（二）省级性病监测点管理机构：

从中国疾病预防控制信息系统中的《疾病监测信息报告管理系统》、《中国疾病预防控制基本信息系统》分别下载本省国家级性病监测点报告的性病和人口等相关数据，汇总后进行相关指标分析。

二、指标计算

（一）发病率

1.性病总发病率

性病总发病率（/10万）=5种性病总报告病例数/当地平均人口数×10万。

当地平均人口数＝（年初人口数+年末人口数）/2

2.分病种发病率

分性病病种发病率（/10万）=某种性病报告病例数/当地平均人口数×10万

3.分性别发病率

男性性病发病率（/10万）＝男性性病报告病例数/当地男性平均人口数×10万

女性性病发病率（/10万）＝女性性病报告病例数/当地女性平均人口数×10万

4.分年龄别发病率

某年龄别发病率（/10万）＝某年龄别性病报告病例数/当地该年龄别平均人口数×10万

5.胎传梅毒发病率

胎传梅毒发病率（/10万）＝胎传梅毒报告病例数/当地活产数×10万。

（二）标化发病率

用于不同地区之间性病发病率比较，要求采用直接法进行标化，即以标准人口的年龄别人口数，或标准人口的年龄别构成进行计算。

标化发病率（/10万）＝被标化地区性病预期发病数/标准人口总数×10万。

被标化地区性病预期发病数＝∑（标准人口某年龄别人口数×被标化地区该年龄别发病率）

或

标化发病率（/10万）＝∑（被标化地区某年龄别按标准人口年龄构成的分配发病率）

被标化地区某年龄别按标准人口年龄构成的分配发病率（/10万）＝标准人口某年龄别构成比×被标化地区该年龄别发病率

（三）增长率

1.增长率

报告病例数的增长率（%）＝（本期性病报告病例数-上期性病报告病例数）/上期性病报告病例数×100%。

报告发病率的增长率（%）＝（本期性病报告发病率-上期性病报告发病率）/上期性病报告发病率×100%。

2.年平均增长率

年均增长率（%）＝

其中a1为年初的发病数或发病率，an为年末的发病数或发病率，（n-1）为开（n-1）方。

（四）构成比

1.年龄构成

某年龄组的构成比（%）＝某年龄组的性病报告病例数/各年龄组性病报告病例数总和×100%

2.病种构成

某性病的构成比（%）＝某性病的报告病例数/5种性病报告病例数总和×100%。

（五）性别比

性别比＝男性性病报告病例数︰女性性病报告病例数。

三、分析容

（一）时间分布

1.某季/年性病报告病例数与上年同期比较

季分析：

分析5种性病本年某季的报告病例数较上年同季的增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表1。

表1.某年某季性病病例数汇总及与上年同季比较

病种

本年某季

上年同季

病例数

增减

（％）

病例数

构成（%）

病例数

构成（%）

梅毒

一期

二期

三期

隐性

胎传

淋病

生殖道沙眼衣原体感染

尖锐湿疣

生殖器疱疹

合计

年分析：

分析5种性病本年的报告病例数、报告发病率较上年增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表2。

表2.本年性病病例数、发病率与上年同期比较

病种

本年

上年

病例数/发病率增减

（％）

病例数

构成（%）

发病率（1/10万）

病例数

构成（%）

发病率（1/10万）

梅毒

一期

二期

三期

隐性

胎传

淋病

生殖道沙眼衣原体感染

尖锐湿疣

生殖器疱疹

合计

2.本年某季性病报告病例数与本年上季相比

分析5种性病本年某季报告病例数较本年上季增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表3。

表3.某年某季性病病例数汇总及与本年上季比较

病种

本年某季

本年上季

病例数

增减

（％）

病例数

构成（%）

病例数

构成（%）

梅毒

一期

二期

三期

隐性

胎传

淋病

生殖道沙眼衣原体感染

尖锐湿疣

生殖器疱疹

合计

3.本年截止本期累计发病数与上年同期累计发病数比较

分析5种性病从本年1月1日截止本期的累计发病数与上年1月1日截止上年同期累计发病数的增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表4。

表4.本年截止本期累计发病数汇总及与上年同期比较

病种

本年初截止本期的累计

上年初截止上年同期累计

病例数

增减（％）

病例数

构成（%）

病例数

构成（%）

梅毒

一期

二期

三期

隐性

胎传

淋病

生殖道沙眼衣原体感染

尖锐湿疣

生殖器疱疹

合计

4.本年按季报告病例数及年发病趋势线图

季分析：

按发病日期，以线图的形式绘制出本年度从第1季度至本季度的性病报告病例数线图，在同一图中绘制出历年从1至4季度的性病报告病例数线图比较发病趋势。

年分析：

绘制历年至本年的5种性病发病率线图。

（二）人群分布

1.性别

季分析：

分析男女两性5种性病的报告发病数及与上年同期比较（见表5），并计算男女两性性病报告发病数的性别比。

表5某年某季不同性别性病报告病例数汇总及与上年同期比较

病种

男性（病例数）

女性（病例数）

本年（某季）

上年（同季）

增减（%）

本年（某季）

上年（同季）

增减（%）

梅毒

淋病

生殖道沙眼衣原体感染

尖锐湿疣

生殖器疱疹

合计

年分析：

分析男女两性5种性病的报告病例数及与上年比较（见表5），计算男女两性性别比。

分析男性和女性的性病构成比及发病率（见表6），可以在同一个图表中以直条图的方式表达。

同时分析历年男性与女性的性病发病趋势，绘制趋势线图。

表6某年不同性别性病报告病例数、构成及发病率汇总

病种

男性

女性

病例数

构成（%）

发病率

（1/10万）

病例数

构成（%）

发病率

（1/10万）

梅毒

淋病

生殖道沙眼衣原体感染

尖锐湿疣

生殖器疱疹

合计

2.年龄

年龄分组一般以5岁为一组进行划分，性病分析的年龄组划分要求：

0-，1-，5-，10-，15-，20-，25-，30-，35-，40-，45-，50-，55-，6