2基因工程的两个基本特点是.docx

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2基因工程的两个基本特点是

填空题

1基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

2基因工程的两个基本特点是：

（1）____________，

（2）___________。

3．基因克隆中三个基本要点是：

___________；_________和__________。

4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。

5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。

6．部分酶切可采取的措施有：

（1）____________

（2）___________（3）___________等。

7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。

8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。

9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：

（1）____________；

（2）________________的活性。

10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。

11．EGTA是____________离子螯合剂。

12．测序酶是修饰了的T7DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。

13．切口移位（nicktranslation）法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。

14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。

15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA-RNA杂种双链中的___________水解掉。

16．基因工程中有3种主要类型的载体：

_______________、_____________、______________。

17．就克隆一个基因（DNA片段）来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：

_______________、_____________、______________。

另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。

18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫_______________。

19．pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于______________，它的四环素抗性基因来自于_______________，它的氨苄青霉素抗性基因来自于_______________。

20．YAC的最大容载能力是_______________，BAC载体的最大容载能力是_______________。

21．pSCl01是一种_______________复制的质粒。

22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。

pUC系列的载体是通过_______________和_______________两种质粒改造而来。

它的复制子来自_______________，Amp抗性基因则是来自_______________。

23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：

一是_______________；二是_______________。

24．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是

______________和_______________。

25．黏粒（cosmid）是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自_______________、COS位点序列来自_______________，最大的克隆片段达到_______________kb。

26．野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：

（1）

_______________

（2）_______________（3）_______________。

27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是_______________，而来自噬菌体的主要结构是_______________。

28．噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的_______________的范围内。

29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是_______________。

30．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc，其目的是_______________。

31.引物在基因工程中至少有4个方面的用途：

（1）_______________

（2）_______________（3）_______________（4）_______________。

32．Clark发现用TaqDNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子。

根据这一发现设计了克隆PCR产物的_______________。

34.乙醇沉淀DN33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在______________A的原理是_______________

35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：

（1）_______________

（2）_______________

（3）_______________。

36．受体细胞的感受态是_______________。

37．DNA重组连接的方法大致分为四种：

（1）_______________

（2）_______________（3）_______________4）_______________。

38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。

39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_________________。

40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用___________可以将这段DNA进行百万倍的扩增。

41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA,___________时摄人DNA。

42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。

大致可以分为：

（1）_______________

（2）_______________（3）___________________（4）____________________________等。

43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于___________________________。

44．核酸杂交探针可分为两大类：

DNA探针和RNA探针。

其中DNA探针又分为__________探针和__________________探针。

45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用__________进行3’末端标记。

如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________进行3’末端标记。

46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：

（1）____________________________________

（2）__________________________（3）_______________________

47.根据Northern杂交的结果可以说明：

__________________________________________。

48.差示杂交（differentialhybridization）技术需要_________________________________。

49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜（尼龙膜）上，同一放射DNA探针杂交的技术称_______________________。

50．在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上，然后与放射性的DNA探针杂交。

51．可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。

52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因：

（1）_______________

（2）________________________（3）______________________。

53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：

（1）______________________________________________________________________

（2）_______________________________________________________________________。

54．放射免疫筛选的原理基于以下三点：

（1）__________________________________

（2）___________________________（3）__________________________________。

55、利用基因工程生产蛋白质药物，经历了三个发展阶段。

第一阶段，将人的基因转入细菌细胞。

第二阶段，将人的基因转入小鼠等动物的细胞。

这两个阶段都是进行细胞培养，提取药物。

第三阶段，将人的基因转入活的动物体，饲养这些动物，从乳汁或尿液中提取药物。

（1）将人的基因转入异种生物的细胞或个体内，能够产生药物蛋白的原理是基因能控制__蛋白质的合成________。

（2）人的基因能和异种生物的基因拼接在一起，是因为它们的分子都具有双螺旋结构，都是由四种__脱氧核苷酸_____构成，基因中碱基配对的规律都是A与T．C与G________。

　　（3）利用转基因牛、羊乳汁提取药物工艺简单，甚至可直接饮用治病。

如果将药物蛋白基因移到动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛、羊尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越性在于：

处于不同发育时期的__雌、雄____动物都可生产药物。

55、复性是指（），杂交是指（）。

56.λ 噬菌体的最大克隆片段是（）kb， Cosmid 的最大克隆片段可达到（）kb。

57.（）即为质粒的拷贝数，按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为（）和（），（）质粒多数是一些具有转移能力的大质粒；（）质粒多数是一些不具有转移能力的小质粒。

58.启动子（Promotor）是指（）。

通常一个 Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。

在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。

59.同一种质粒 DNA ，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是（）

60.基因突变（Gene mutation）的类型有（），（），（）等。

61.碱裂解法提取质粒 DNA 的原理是（）。

62.基因突变（Gene mutation）的类型有（），（），（）等。

63.Gene cloning 的目的是（），常用的方法有（）、（）和（）等。

64.PCR 反应过程分为三个步骤，即（），（）和（）。

65．番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。

应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的合成能力，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种，这种转基因番茄已于1993年在美国上市。

请回答：

（1）促进果实成熟的重要激素是________。

（2）在培育转基因番茄的基因操作中，所用的基因的“剪刀”是________，基因的“针线”是 ________，基因的“运输工具”是________ 。

　　 （3）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是 ________、 ________ 和 ________。

66．科学家通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏云金芽孢杆菌中提取出抗虫基因，“放入”棉的细胞中与棉的DNA结合起来并发挥作用，请回答下列有关问题：

（1）从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是 ________，此工具主要存在于________中，其特点是 ________。

（2）苏云金芽孢杆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是“鸟枪法”。

具体做法是：

用 ________将苏云金芽孢杆菌的 ________切成许多片段，然后将这些片段   ________ ，再通过________转入不同的受体细胞，让它们在各个受体细胞中大量 ________，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把________分离出来。

　　 （3）进行基因操作一般要经过的四个步骤是：

_______、_______、_______、_______。

67．干扰素是治疗癌症的重要物质，人血液中每升只能提取0.05mg干扰素，因而其价格昂贵，平民百姓用不起。

但美国有一家公司用遗传工程方法合成了价格低廉、药性一样的干扰素，其具体做法是：

（1）从人的淋巴细胞中提取能指导干扰素合成的 ________，并使之与一种叫质粒的DNA结合，然后移植到酵母菌内，从而让酵母菌来________。

（2）酵母菌能用________方式繁殖，速度很快，所以能在较短的时间内大量生产________。

利用这种方法不仅产量高，并且成本较低。

　　（3）科学家陈炬在这方面也做出突出贡献，他成功地把人的干扰素基因嫁接到了烟草的DNA分子上，其物质基础和结构基础是________。

　　（4）烟草具有了抗病毒能力，这表明烟草体内产生了________，由此可见，烟草和人体合成蛋白质的方式是________，从进化的角度来考虑，证明了人和植物的起源是________。

68．基因工程技术对人类产生的影响既有积极的一面，同时也存在着很多需要继续探讨和解决的问题，这些问题主要表现为__________、__________、__________、__________等四个方面。

69．干扰素是治疗癌症的重要物质，它必须从人血中提取。

每升人血只能提取

，故价格昂贵，现在美国加利福尼亚的基因公司采用如下图所示的方法生产干扰素，据此回答：

（1）把干扰素基因从人体的DNA中直接分离出来，此种方法称为__________。

从人的细胞中取出干扰素基因，此基因在基因工程中称为_________。

（2）将此基因插入细菌质拉切口处，用_________酶使它和经过处理的细菌质粒基因结合，然后移植到酵母菌体内，使酵母菌具有_______。

　　（3）酵母菌能以________方式繁殖，此繁殖方法速度快，既提高了产量，又降低了成本。

70．利用基因工程生产蛋白质药物，经历了三个发展阶段。

第一阶段，将人的基因转入细菌细胞。

第二阶段，将人的基因转入小鼠等动物的细胞。

这两个阶段都是进行细胞培养，提取药物。

第三阶段，将人的基因转入活的动物体，饲养这些动物，从乳汁或尿液中提取药物。

（1）将人的基因转入异种生物的细胞或个体内，能够产生药物蛋白的原理是基因能控制__________。

（2）人的基因能和异种生物的基因拼接在一起，是因为它们的分子都具有双螺旋结构，都是由四种_______构成，基因中碱基配对的规律都是________。

　　（3）利用转基因牛、羊乳汁提取药物工艺简单，甚至可直接饮用治病。

如果将药物蛋白基因移到动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛、羊尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越性在于：

处于不同发育时期的________动物都可生产药物。

71．据调查，随着化学农药的产量和品种逐年增加，害虫的抗药性也不断增强，造成的危害很严重。

如近年来，棉铃虫害在我国大面积爆发，每年造成经济损失达100万元以上，针对这种情况，我国科学工作者研究发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死，而此毒蛋白对人畜无害。

通过科技攻关，我国科技工作者已成功地将该毒蛋白基因导入棉花植株体内，并实现了表达。

由于棉铃虫吃了新品种“转基因抗虫棉”植株后就会死亡，所以，该棉花新品种在近年推广后，已收到了很好的经济效益。

请据以上所给材料，回答下列问题：

（1）害虫抗药性的增强是_____________的结果。

（2）“转基因”抗虫棉新品种的培育应用了______________新技术。

　　（3）控制毒蛋白合成的基因结构中的编码区的特点是__________。

　　（4）转基因抗虫棉抗害虫的遗传信息传递过程可以表示为_____________。

　　（5）该科技成果在环保上的重要作用是_______________。

72.世界上成功构建的第一个体外重组DNA分子是在（）年完成的。

73.质粒载体能够克隆（）大小的DNA片段，噬菌体能够克隆（）大小的DNA片段。

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74.外源基因在动物的血液中表达，从而可以在动物血液里直接提取外源基因的产物，这种基因产品的生产方式叫（）。

75.用琼脂糖凝胶电泳时，DNA片段越大，离点样孔越（），而DNA片段越小，离点样孔越（）。

76.用化学降解法进行DNA测序时，必须具有（）个反应系统，用酶促合成法法进行DNA测序时，必须具有（）个反应系统。

77.电转化的原理是在受体细胞上施加短暂的高压电流脉冲后，结果在细胞膜上形成许多（），从而使（）容易进入到受体细胞内。

78.λ噬菌体根据接受外源DNA的方式不同，可以分为（）和（）两种类型载体。

79.互为同裂酶的两种限制性核酸内切酶来源（），产生的粘性末端（）。

80.酵母双杂交系统通常含有两个载体，一个载体含有酵母转录因子GAL4的（），另一个载体必须含有GAL4的（）。

81.目前抗虫转基因植物常常用到的外源基因主要是（），从而达到杀死害虫的目的。

82.在转基因植物中，常用的显色或发光标记的报告基因有（），（），（）等

83.感受态细胞是指_____________

84.PCR反应体系含有_____________，_____________，_____________，_____________。

85.PCR反应的基本过程为_____________,_____________,_____________

86.引物与模板的退火温度一般为_____________，延伸温度一般为_____________

87.PCR循环次数一般设定为_____________，过多的循环次数会导致_____________的出现。

88._____________，_____________，_____________可用于LCR产物的检测。

89.引物3‘端最佳碱基选择是_____________和_____________。

90.PCR的标本处理的基本要求是_____________

91.PCR的反应体系一般选用_____________。

92.PCR反应的缓冲液提供了PCR反应_____________与_____________常用的为_____________

93.PCR的反应体系中，Mg2＋的浓度一般保持在_____________,常用的是_____________

94.TaqDNA聚合酶具有_____________，缺乏_____________因此无_____________。

95.在变性过程中，为防止反应液的蒸发，可在反应管中加入

96.PCR反应时应设立以下实验对照：

_____________,_____________,_____________.

97.定量PCR必须设立_____________

98.启动子（Promotor）是指（）。

通常一个 Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。

在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。

99.外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位——、——、——。

100.克隆基因表达载体的主要构成元件——、——、——。

101.高等哺乳动物受体细胞的条件是——、——、——、——、——。

102.基因工程诞生于（）年。

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103.基因工程中外源DNA与载体DNA分子所形成的杂合分子叫（）。

104.外源基因在人体表达，使人体能克服某一缺陷或疾病，这种基因工程技术叫（）。

105.将抗性基因转入农作物中，使之具有某种抗病能力，得到的农作物叫（）。

106.用载体制作转基因植物时，最常用的载体是（）质粒。

107.粘粒载体能够克隆（）大小的DNA片段，人工酵母染色体YAC能够克隆（）大小的DNA片段。

108.DNA自动测序标记的是（），常规Sanger双脱氧链终止法标记的是（）。

109.显微注射技术一般是在显微镜下将目的DNA分子注射进入动物受精卵的（）中，从而产生转基因动物。

110.基因工程构建基因重组体是指将（）与（）的进行连接重组。

111.用琼脂糖凝胶电泳时，DNA片段越大，离点样孔越（），而DNA片段越小，离点样孔越（）。

112.Northern杂交的用途主要是用来检测（）在特定组织的（）情况。

113.粘粒载体是由（）和（）两部分组成的。

114.质粒载体能够克隆（）大小的DNA片段，噬菌体能够克隆（）大小的DNA片段。

115.重组 DNA 导入宿主的一般方法有（），（），（），（）和（）等。

答案

1．70

2．

（1）分子水平上的操作；

（2）细胞水平上的表达

3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择

4．限制性酶切图谱

5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名

6．

（1）减少酶量；

（2）缩短反应时间；（3）增大反应体积

7．EcoK；EcoRl

8．GGCC；异源同工酶

9．枯草杆菌蛋白酶；

（1）5'-3'合成酶的活性；

（2）3'-5'外切核酸酶

10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团

11．Ca2+

12．5'-3'合成；3'-5'外切

13．DNA聚合酶I：

5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶

14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平

15．核酸水解酶H；RNA

16．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体

17．复制区：

含有复制起点；选择标记：

主要是抗性基因；克隆位点：

便于外源DNA的插入

18．质粒消除（或治愈）

19．pMBl；pSCl01；pSF2124（R质粒）

20．1000kb；300kb

21.严紧

22．pBR322和M13；pMBl；转座子

23．它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体（如噬菌）的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽