PCR实验室标准操作规程.docx
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PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书
文件编号：
第1版
编制：
审核：
批准：
生效日期：
2015年*月*日
质管部
PCR实验室公正性声明
1、坚持公正立场认真对待每一例检测，不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室内部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动。
2、严格遵循实验室认可依据的国际标准，严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制，所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件，并在工作中执行这些政策和程序，真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式，尽可能把差错降到最低限度，确保检测数据准确可靠，检测结果和技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨，严格保护客户的机密和所有权，热忱提供优质服务，努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案，并通过日常检测的监督机制，持续改进、不断完善管理体系，从而保证其充分性和有效性。
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文件编号
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前言1
质量方针2
质量管理体系组织结构图3
一、工作制度4
PCR实验室的设置及管理规程4
PCR实验室内务管理规程5
PCR实验室人员的配置及管理规程6
PCR实验室管理规程8
PCR实验室生物安全防护措施11
PCR实验室废弃物的处理管理规程12
PCR实验室清洁消毒管理规程13
PCR实验室仪器设备的管理规程14
试剂管理规程15
清洁剂、消毒剂管理规程16
异常情况应急处理管理规程17
采购管理规程20
仓库管理制度23
临床标本的管理规程26
PCR实验室记录管理规程27
检验报告单发放、保密管理规程28
PCR实验室岗位责任制29
二、操作指导书30
PCR实验室的清洁消毒操作规程30
冰箱、冷藏柜的使用操作程序31
冰箱、冷藏柜的维护保养操作程序32
洁净工作台使用操作规程34
洁净工作台维护、清洁操作规程35
ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程37
ABI7500实时跟踪荧光PCR仪维护保养操作规程38
高速冷冻离心机使用标准操作规程39
高速冷冻离心机维护保养操作规程40
生物安全柜使用操作规程41
生物安全柜的维护保养操作规程42
加样器的使用操作规程43
加样器的维护保养操作规程44
干式恒温箱的使用操作规程45
干式恒温箱的维护保养操作规程46
紫外灯的使用操作规程47
紫外灯的维护保养操作规程48
温湿度计自行检定操作规程49
PCR实验室试剂的质检标准操作规程50
PCR实验室标本唯一标识编号编制操作规程51
临床标本的采集、运送、接收操作规程52
临床标本的保存操作规程54
清洁剂、消毒剂配制操作规程55
乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程56
室内质量控制标准操作程序58
室间质评操作规程61
三、引用图表62
实验室负责人简历62
实验室工作人员一览表63
北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表69
前言
1.临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成：
1.1管理性程序；
1.2仪器设备标准操作程序、维护保养程序；
1.3检测项目操作程序；
1.4相关图表；
1.5相关复印件
2.现有文件编号与本公司现行ISO9001质量体系一致；
3.文件管理：
3.1现有的文件由公司行政办公室负责管理；
3.2实验室主任保存全套文件一份；
3.3各工作区保存该区使用的文件，以方便工作人员随时使用。
4.文件的有效期；
4.1文件的有效性：
文件自实验室职责签字后即为现行有效文件；
4.2本文件为试运行文件，通过实际工作的检验、修改完善后将形成正式的质量体系文件。
4.3正式的第一版质量体系文件将作为本公司ISO9001质量体系文件的一部分出现；
4.4试运行文件的修订时间不得超过一年。
5.文件的修改：
5.1作为试运行文件，允许以进行细小的修改；
5.2文件修改最重要的是要维持各工作区文件的现行有效及其与“保存文件”的一致性；
6.实验室质量体系完成时，文件的管理、修改严格按ISO9001质量体系文件管理要求进行。
重要参考资料：
1.临床基因扩增检验实验室管理暂行办法。
2.临床基因扩增检验实验室基本设置标准。
3.临床基因扩增检验实验室工作规范。
4.临床基因扩增检验实验室技术人员培训班资料汇编，卫生部临床检验中心。
5.临床检验及实验室设备。
质量方针
北京汉氏联合生物技术股份有限公司质管部临床基因扩增检验实验室是严格按照部、市临床基因扩增实验室规范化标准进行管理与操作，始终遵循：
以储户为中心
以质量为核心
以科学为依据
质量管理体系组织结构图
一、工作制度
文件类型
管理规程
文件名
PCR实验室的设置及管理规程
编号
BJHB-SMP-QM-018-A0
页码
第1页/共1页
编写
质量管理部
审核
批准
批准日期
执行日期
分发号
PCR实验室的设置及管理规程
1.目的：
建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2.范围：
本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3.职责：
PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互督促。
4.程序：
4.1分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作。
4.2本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：
试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：
红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：
粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4.3各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4.4各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4.5严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4.6非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4.7实验完毕后做好清洁消毒工作。
5.相关文件:
实验室设计平面图
6.相关记录:
无
文件类型
管理规程
文件名
PCR实验室内务管理规程
编号
BJHB-SMP-QM-019-A0
页码
第1页/共1页
编写
质量管理部
审核
批准
批准日期
执行日期
分发号
PCR实验室内务管理规程
1.目的：
保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。
2.范围：
适用于PCR实验室的内务管理及清洁工作。
3.职责：
实验室相关人员及医院相关清洁工人。
4.程序：
4.1非本室工作人员未经允许不得进入实验室。
4.2各区的用品不得混用。
4.3实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。
4.4进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。
4.5所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。
4.6所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录，未经允许不得随意带出本实验室。
4.7每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，确保仪器整洁安全，试剂合格使用。
4.8各区的各种清洁消毒均应有记录，工作衣消毒时注意各区应分开进行处理。
4.9注意保持实验室卫生整洁，严禁在室内抽烟、吃零食，非实验操作人员应尽量少入。
4.10下班前检查门、窗、水、电，节假日应指定人员负责检查实验室的仪器、设备。
5.相关文件:
无
6.相关记录:
无
文件类型
管理规程
文件名
PCR实验室人员的配置及管理规程
编号
BJHB-SMP-QM-020-A0
页码
第1页/共2页
编写
质量管理部
审核
批准
批准日期
执行日期
分发号
PCR实验室人员的配置及管理规程
1.目的：
保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。
2.范围：
适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。
3.职责：
实验室工作人员共同遵守、相互督促。
4.程序：
4.1人员要求
4.1.1本实验室工作人员应为医学检验专业或相关专业毕业，具有中级以上技术职称或专科以上学历。
4.1.2实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办的PCR技术培训，并取得合格证。
4.1.3对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR技术培训合格证，应在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。
4.2人员配置
4.2.1实验室应根据工作需要配备足够的工作人员，目前实验室有主管技师2人、技师1人，3人都已获得培训合格证，视工作量的增加和业务发展需要，会适当增加工作人员。
4.2.2各级技术人员履行相应的工作职责。
4.3人员培训及考核
4.3.1实验室职责或职责指定人员参加每年卫生部PCR室间质评总结会。
4.3.2实验室工作人员每1～2年至少参加1次PCR技术的省级或国家级继续教育项目，参加相关学术交流会议。
4.3.3安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。
4.3.4科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的相关知识，提升自身的理论学习水平。
特别是在标本接收区采血、接收标本的人员，需定期对其进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。
一些科室的送检标本由该科室的人员送到标本接收区，对这些临床医护人员也要定期进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输等知识的培训。
4.3.5本实验室工作人员每年进行考核一次，考核内容：
a）日常工作质量
b）室内质控测评
c）室间质控测评
d）在抱怨处理中的表现
4.3.6本实验室工作人员实行严格奖惩制度，有下列表现者可受奖：
a）工作质量高，质控测评成绩优秀者；
b）有科研能力，并有一定数量和质量的论文发表；
c）有独创性工作成果，经鉴定认可者；
d）受到有关部门或群众嘉奖者。
有下列情况者将受到惩处：
a）工作质量问题较多，质控测评成绩不合格；
b）不遵守规章制度并造成一定影响；
c）不求上进。
4.3.7本实验室工作人员奖惩方法分精神及物质两类,经实验室上报医院及有关部门批准后执行。
4.3.8本实验室工作人员均建立业绩档案，实行能进能出制度，不断吸收高质量人员，加强培训和提高，对于不适合本室工作的人员要及时调离。
4.4人员管理
4.4.1实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：
学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。
4.4.2技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1次，电子档案随时更新。
5.相关文件:
无
6.相关记录:
实验室主要职责简历表
PCR实验室工作人员一览表
培训申请表
年度培训计划表
培训记录表
员工培训履历表
文件类型
管理规程
文件名
PCR实验室管理规程
编号
BJHB-SMP-QM-021-A0
页码
第1页/共3页
编写
质量管理部
审核
批准
批准日期
执行日期
分发号
PCR实验室管理规程
1.目的：
建立PCR实验室的工作规范，确保分子诊断室正常工作。
2.范围：
适用于PCR实验室，包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理。
3.职责：
PCR实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。
4.程序：
4.1在进入实验室前，在隔离台戴好头套口罩，穿上鞋套与实验服。
4.2试剂准备间
4.2.1配电房先打开风机（先开送风机，再开排风机），再把空调系统打开。
关闭时的顺序相反。
4.2.2其它室的用品不得带入本室。
4.2.3从PCR实验室1号入口门进入实验室，到达试剂准备间的缓冲间，脱下白色工作服，挂在缓冲间的左侧，在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服（蓝色），进入试剂准备间，实验中须戴一次性手套，手套常更换。
4.2.4打开已灭菌的超净台，通风一段时间，排走臭氧。
取出当次实验需配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好放回冰箱内。
4.2.5操作应在冰上进行。
Taq酶尽量在配液的最后一步加入。
应减少dNTP反复冻融的次数。
每次实验后将枪调至最大量程。
加模板前打开废液缸盖，加完模板后务必盖上废液缸的盖子。
4.2.6实验作业完成时，应及时清理工作台，做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。
使用过的离心管、吸头须置于10%的次氯酸钠溶液中浸泡、消毒后方可弃之。
4.2.7打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。
4.2.8在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。
4.3标本制备间
4.3.1在标本制备间的缓冲间，脱下白色工作服，换上标本制备间专用的工作服（粉红色），进入标本制备间。
4.3.2打开传递窗的门，取出配好的试剂，使用本区专用的加样器和带滤芯枪头。
4.3.3实验作业完成时，应及时清理工作台，使用过的离心管、带滤芯枪头须置10%的次氯酸钠溶液中浸泡、消毒后方可弃之。
4.3.4做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。
4.3.5打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。
提取基因组模板，提取过程中丢弃的枪头、离心管和废液请丢弃在此垃圾袋并于实验结束后立即将垃圾袋扎口丢弃。
提取质粒可先提取野生型质粒再提取突变型质粒。
每次提取工作完成后擦拭台面。
4.3.6在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。
4.4扩增间
4.5传递窗的使用传递窗每天早上灭菌20分钟一次。
当天使用可不用再次灭菌。
将试剂放到传递窗时，在底下垫上一层手套。
4.6压力监控每天早上空调运行半小时后，记录各PCR实验室的压力差：
试剂准备间：
5～10；标本制备间：
-5～-10；扩增间：
＜-10。
各缓冲间的压力为+5。
4.7实验室卫生管理
4.7.1禁止非工作人员进入实验室；参观实验室等特殊情况须在实验室管理员协助下进行。
4.7.2实验室内各工作人员应有个人防护意识，进入实验室时应更换工作服和鞋子，穿着整洁，不留长指甲，不佩戴首饰，长发应束于脑后；禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物；禁止将个人物品带入实验室；实验室内应避免手→口，手→眼，手→鼻接触，以防止间接感染。
4.7.3实验结束后仍需保留使用的物质，应移入具塞的容器中，并做好标识标签，并写清楚名称、浓度、配制日期、储存温度、有效期和配制人，并放置于相应保存条件下；勿置室温过夜。
4.7.4每天配制使用浓度的消毒液，放于固定地点，用于污染时消毒用，应定期更换消毒液品种。
4.7.5每天上班8点45分先关实验室紫外灯，然后开启风扇，打开实验室走廊窗户。
每天9点前每间负责人填写冰箱温度、湿度记录。
4.7.6下午4点45分每间负责人填写实验室及冰箱温度、湿度记录，清理实验室卫生，检查实验室垃圾及废液缸枪尖，生物垃圾放置于生物安全垃圾桶内，通知专门的垃圾转运车进行清除。
在生物安全垃圾桶周边喷洒84消毒液（按1:
9或者1:
10比例配制）。
4.7.7每日卫生打扫完后，在实验室内喷洒84消毒液，喷洒完，待20分钟过后，对实验室仪器表面及实验台面要用干布擦拭一遍，再用清水清洗一遍，防止仪器被腐蚀。
仪器反应孔用75%酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。
4.7.8关闭风扇，开启紫外灯，过夜。
关闭实验室走廊窗户，喷洒84消毒液。
4.7.9第一、二间实验室的3%盐酸在实验室内配制，由当周值日人员负责。
实验服的清洗时间为每月的1、2、3、15、16、17日，1、15日洗第一间实验服，2、16日洗第二间实验服，3、17日洗第三间实验服，遇节假日顺延。
每周对回风口过滤网进行清洗，由当周值日人员负责。
如遇加班，以上由加班人员负责；若有请假，请假人员需与其他人员协商调整，否则视为未执行。
以上执行情况每天都应填写记录表，并由专人检查确认签字。
4.8注意事项
4.8.1PCR实验室各室使用、进入及单一流向制度，请各位技术员不要贪方便，严格按照规程操作，以免造成严重后果。
4.8.2dNTP的使用：
dNTP每周更换一次，每周一做实验时，取已分装好的，周五时丢弃。
4.8.3每位技术员使用自己独立的配液盒。
4.8.4进入各室时请关好门。
4.8.5废液缸中的枪头满到3/4时，要及时倒到自封袋中。
4.8.6缓冲间的内外两个门不能同时开启。
5.相关文件:
无
6.相关记录:
温度、湿度记录
垃圾处理记录表
洁净区清洁消毒记录
仪器设备使用、维护保养和清洁记录
文件类型
管理规程
文件名
PCR实验室生物安全防护措施
编号
BJHB-SMP-QM-022-A0
页码
第1页/共1页
编写
质量管理部
审核
批准
批准日期
执行日期
分发号
PCR实验室生物安全防护措施
1．目的：
预防工作人员在实验过程中被感染或污染。
2．范围：
适用于本室所有工作人员的安全防护措施。
3．职责：
PCR实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。
4．程序：
4.1实验人员在实施生物防护措施时，应严格遵守各项相应的规章制度，建立起强烈的生物防护意识。
4.2每天更换废液缸的10%的次氯酸钠溶液，并保证10%的次氯酸钠溶液用量为废液缸内总液量的五分之一左右。
配置消毒液时，正确量取足量的消毒剂（用量杯，保证浓度），水的用量也要正确，缸体密封性良好。
4.3实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。
4.4每区每次实验后紫外灯照射30～60分钟，如有需要可延长照射时间。
4.5所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源，因此在标本的采集、运输过程中，标本容器应完好无泄漏。
4.6处理标本时应穿工作服、戴手套，以免沾上皮肤。
如手或其它部位的皮肤沾上血液或体液标本以及试剂，应立即冲洗干净。
有下列情况之一者，需另外消毒：
手接触有传染性的微生物，水龙头、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量细菌污染。
消毒剂可用84消毒液。
4.7在实验过程中，病人标本（血液、体液）或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。
4.8实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。
若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施。
4.9在实验过程中病人标本（血液、体液）外漏时，应立即用2%戊二醛滴上，滤纸或纱布盖上半小时，然后用酒精擦洗，并用紫外灯消毒。
4.10实验完毕离开时，应脱下所有该实验区个人防护装备。
4.11实验完毕后应对实验室进行紫外消毒。
4.12遇有意外事故应立即报告部门职责，当事人应立即注射相关疫苗或进行预防性治疗，并进行医学观察，严重者应报告公司职责。
5.相关文件:
无
6.相关记录:
实验室紫外消毒记录表
实验室清洁消毒记录表
文件类型
管理规程
文件名
PCR实验室废弃物的处理管理规程
编号
BJHB-SMP-QM-023-A0
页码
第1页/共1页
编写
质量管理部
审核
批准
批准日期
执行日期
分发号
PCR实验室废弃物的处理管理规程
1．目的：
保证实验室、实验人员和外部环境的安全。
2．范围：
核酸扩增荧光检测实验室常用化学试剂（NaOH、EDTA、乙醇、生理盐水等）、实验室废弃物的处理。
3．职责：
PCR实验室的工作人员遵守本文件的规定处理废弃物。
4．程序：
4.1部门职责应对本室工作人员讲明本程序在预防交叉、实验室污染及切断传播途径中的重要性，并要求严格执行。
4.2实验室所有垃圾，装入专用污物袋内，各区备有：
生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黄色）。
使用过的一次性消耗品（如试管、吸头、离心管、等），先放入10%次氯酸钠溶液中浸泡2～4小时后，再放入黄色垃圾袋内，使用过的手套、鞋套等直接放入黄色垃圾袋内交公司集中处理。
4.3夹取标本的工具，如钳、镊、接种环、吸管等，用后均应消毒清洁，进行微生物检验时，应重新灭菌，金属工具可烧灼灭菌或消毒液浸泡；玻璃制品干热或压力蒸汽灭菌。
4.4废弃标本如血、尿、胸水、腹水、脑脊液、唾液、胃液、肠液、关节腔液等用10%的84液浸泡2～4小时后，交公司集中处理。
4.5盛标本的容器，若为一次性使用的纸质容器及其外面包被的废纸，放入污物袋里交公司处理；对可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15分钟或加入10%次氯酸钠溶液浸泡2～4小时，消毒液每日更换，消毒后用洗涤剂及流水刷洗，沥干，用于微生物培养采样者，用压力蒸汽灭菌后备用。
4.6废弃标本及其容器装入黄色垃圾袋内、封闭，交公司污物处理中心处理。
4.7日常生活垃圾如纸屑等按一般垃圾交公司处理。
5.相关文件:
无
6.相关记录:
垃圾处理记录表
文件类型
管理规程
文件名
PCR实验室清洁消毒管理规程
编号
BJHB-SMP-QM-024-A0
页码
第1页/共1页
编写
质量管理部
审核
批准
批准日期
执行日期
分发号
PCR实验室清洁消毒管理规程
1．目的：
保证实验室环境的整洁，防止污染。
2．范围：
适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工作。
3．职责：
PCR实验室的工作人员遵守本文件的规定对实验室进行清洁消毒。
4．程序：
4.1实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。
4.2合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。
4.3抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。
4.4实验结束后用75%酒精对台面进行清洁，并用移动紫外灯进行消毒。
4.5每天对使用过
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