急性毒性试验LD50的测定.docx
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急性毒性试验LD50的测定
急性毒性试验-LD50的测定
开放性实验总结报告
学生姓名班级学号
所在院系专业
开放实验室名称
日期2013-5-5
北京理工大学实验室设备处制
一、实验项目概况
开放实验题目:
实验动物的基本操作及其相关技术实验题目类型:
□参与科研□科技活动√自选实验□素质培养指导教师及实验技术人员姓名:
李岩实验项目起止日期:
2013-4-5至2013-5-5
利用何种时间段开展实验:
课余时间开展实验的累计总学时数:
32学时实验项目基本原理:
急性毒性试验是临床前新药安全性评价的第一步,与其它毒性实验相比具有简单、经济、易行等特点。
因此新药研究开发时往往通过该项试验,尽可能多的了解一些新药的毒理学特点,为早期判断侯选新药是否具有研究开发价值提供毒性强度资料。
通常测定药物ED50及LD50以初步估计药物毒性大小。
实验项目的实验方法概述:
给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠,并观察记录各组别小鼠的行为变化,通过比较不同组别小鼠出现死亡的数量来计算LD50。
实验项目的仪器设备组成情况:
天平,1000ul的移液枪,200μl移液枪,2ml离心管,1ml注射器,手术器械(包实验项目的消耗材料明细:
乳胶手套,KM小鼠,封口膜
实验项目的主要结论:
戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg
用Bliss法计算半数致死量,回归方程y(Probit)=-24.916+14.058Log(D)
半数致死量LD50=134.32mg/kg二、实验项目技术报告
1.实验原理
戊巴比妥钠属于巴比妥类镇静催眠药,对中枢神经系统有普遍性抑制作用,可起到镇静、催眠、抗惊厥作用。
一定剂量的戊巴比妥钠引起一般实验动物死亡。
半数致死量(LD50),即在一群实验动物中,能使实验动物一半死亡的药量,其值越大越好。
2.实验内容
(1)探测戊巴比妥钠LD50的剂量范围。
(2)确定组数并计算各组剂量。
(3)正式实验:
给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠,并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。
(4)记录实验结果,并计算LD50。
3.实验方法:
1、预试溶液配制和样品处理(预实验)
(1)探索剂量范围:
取小鼠9到12只,以3只为一组,分成3到4组,包括组距较大的一系列剂量,按组分别腹腔注射戊巴比妥钠溶液,观察出现的症状并记录动物死亡数,找出引起0及100%有效剂量的所在范围,此即上下限剂量Dn和Dm。
(2):
确定组数并计算各组剂量
○1确定组数《G》:
根据适宜的组距确定组数,一般分为5到8个剂量,这里我们分为5组,按等比级数增减
○2计算各组剂量:
在找出Dm、Dn和确定组数后,课按下列公式求出公比r.再按公比计算各组剂量Dl-Dm,其中D1=Dn=最小剂量。
○3配置等比药液系列,让每只小鼠给药量相等,一般为0.1ml/10g
体重
经过预实验的五个剂量浓度分别是77、96、120、150、190mg/kg,相应浓度:
0.77、0.96、1.2、1.5、1.9%,在随后的急性毒实验中对这些剂量进行验证
2、急性毒性试验:
昆明种小鼠共15只,实验前一天晚禁食不禁水,实验当天称重,标记,随机分组。
给5组小鼠分别按77、96、120、150、190mg/kg,腹腔注射,给药后观察动物死亡情况。
记录小鼠死亡时间,死亡数目。
利用Bliss法计算LD50。
分组
动物数
剂量
对数剂量
动物死亡
死亡率
(N)
(mg/kg)
(X)
数(n)
(P=n/N)
1
3
77
1.89
0
0%
2
3
96
1.98
0
0%
3
3
120
2.08
1
33.3%
4
3
150
2.18
2
66.7%
5
3
190
2.28
3
100%
表1药物对小白鼠产生效应情况
【实验结果】:
LD50的测定依据药物剂量依次给药。
利用Bliss法计算LD50
样品名称戊巴比妥钠实验动物昆明小鼠给药途径腹腔注射实验日期2013.5.5
用Bliss法计
算半数致死量
剂量对数剂量动物数死亡数死亡百分率实验机率单位回归机率单位
(x)(只)(只)
(%)
(Y)
(Y)
77
1.8865
3
0
0.00
1.6031
96
1.9823
3
0
0.00
2.9495
120
2.0792
3
1
33.00
4.5697
4.3119
150
2.1761
3
2
67.00
5.4303
5.6742
190
2.2788
3
3
1E2
7.1173
回归方程y(Probit)=-24.916+14.058Log(D)
半数致死量LD50=134.32mg/kg
LD50(Feiller校正)95%的可信限=92.405--205.57mg/kg
LD5=102.59mg/kg
LD95=175.85mg/kg
三、参加开放性实验的体会与建议
四、评价与认定
导教师评价意见与成绩评定:
实验态度积极认真,并且能够较好的完成实验包含的内容。
试验后积
极思考老师提出的问题。
成绩:
指导教师签字:
年月日
院系主管领导审核与学分评定意见:
同意核准该生选修学分数分
院系主管签字:
年月
日
学校主管部门审批意见:
部门签章:
年月日
备注: