植物组织培养实验设计及doc.docx
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植物组织培养实验设计及doc
植物组织培养实验设计及
常用设备的使用与维护
1．实验目的
1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备
2.掌握植物组织培养实验室的设计要求
3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备
2．实验原理
植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。
无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。
三．实验步骤
1.实验室的设计要求
功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌
2.实验室的组成及功能
实验室的组成：
洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、
培养室、观察记录室、储藏室、移苗室
实验室的功能：
洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。
室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。
备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。
地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。
药品室用于存放各种药品试剂。
室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。
化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。
原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。
药品室紧邻称量室较好，便于工作。
称量室进行化学药品的称量。
要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。
有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。
房间较少时，可以与药品室合二为一。
培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。
在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。
配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。
如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。
灭菌室主要用于培养基和器皿的灭菌以及蒸馏水的制备。
建筑上要求其墙壁耐湿、耐高温、墙壁上最好有排除蒸汽的排风扇。
有用于灭菌锅的二相或三相电源、供水、排水设施齐全。
配有干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水器或纯水机以及摆放和存放器皿、培养基的架子和橱柜。
灭菌室应邻近接种室，避免灭菌后的培养基长距离搬运，增加污染机会。
接种室主要进行植物材料的表面消毒、分离切割、转接，其无菌程度的高低对组织培养的成功与否起至关重要的作用。
在工作方便的前提下，接种室面积宜小不宜大，一般小的无菌室5~7m2即可。
平方易吸潮，容易引起污染，有条件的应选择楼房，最好在二层或二层以上，与其他区域隔离。
接种室的天花板及四壁尽可能光滑平整，地面平坦无缝，便于清洗和消毒。
一般安装滑动门，以减少开关门时空气的流动，在适当位置安装1~2支紫外线灯，用以辐射灭菌。
室内干爽安静，清洁明亮，门窗紧闭，减少与外界空气对流，不存放与接种无关的物品，以免形成紫外线无法照射到的死角。
室内配有超净工作台、小推车、接种器械、酒精灯、酒精等。
为减少接种人员进出时带入的杂菌，接种室外应设有缓冲室，供操作人员更换工作服、帽、鞋之用。
为便于观察和参观，中间最好用玻璃墙隔离，接种室的门和缓冲室的门要错开，灭菌以2~3m2为宜。
缓冲室最好也安装1支紫外线灯，用于环境的灭菌。
培养室是植物材料生长的场所。
培养室应保持清洁，有光照、控温设备和定时设备，温度一般保持在（25±2）℃，光照强度1000~5000lx，光照时间8~26h/d，在实际工作中应根据不同的要求灵活掌握。
培养室主要用电调节温度和补充光照，用电量大。
为节省能源，降低成本，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。
培养室可选两面采光，加大窗户，尽量考虑到利用自然光。
采用双层玻璃以利隔热和防尘，培养室高度以比培养架略高为宜，墙壁要求有隔热、防火的性能。
室内应保持整洁，切忌堆放无关物品。
室内配有培养架、空调、药床等设备。
小的培养室容易控制温度、光照等环境条件，特别是培养材料较少时节能效果更为明显。
培养室初次使用要用甲醛熏蒸消毒，培养期间要定期进行室内消毒工作。
观察记录室是对培养物的生长情况及实验结果进行观察、记录的场所。
室内应有固定的水磨石台面，放置显微镜、解剖镜、显微照相等仪器，最好还应有一套制片和细胞学染色设备，进行制片或染色观察。
室内应安静、清洁、明亮、保证仪器不振动、不受潮。
储藏室用于暂时不用的器皿、用具等的存放。
储藏室最好设在楼房低层背阴处，便于物品搬运和存放，房间有良好的通风条件。
移苗室用于试管苗炼苗和移栽。
移苗室应具有一定的控温、保湿、遮荫条件，一般要求温度在15~25℃，相对空气湿度在70%以上，避免强光。
普通温室或塑料大棚经过适当的改造均可使用，室内配有弥雾装置、遮阳网、防虫网、移植床、营养钵及移栽基质等。
3.植物组织培养实验室基本仪器设备
一．常规设备
1天平
使用方法及注意事项：
1.要放置在水平的地方。
游码要归零。
2.调节平衡螺母（天平两端的螺母）调节零点直至指针对准中央刻度线。
3.左托盘放称量物，右托盘放砝码。
根据称量物的性状应放在玻璃器皿或洁净的纸
上，事先应在同一天平上称得玻璃器皿或纸片的质量，然后称量待称物质。
4.添加砝码从估计称量物的最大值加起，逐步减小。
托盘天平只能称准到0.1克。
加减砝码并移动标尺上的游码，直至指针再次对准中央刻度线。
5.过冷过热的物体不可放在天平上称量。
应先在干燥器内放置至室温后再称。
6.物体的质量=砝码+游码
7.取用砝码必须用镊子，取下的砝码应放在砝码盒中，称量完毕，应把游码移回零点。
8.称量干燥的固体药品时，应在两个托盘上各放一张相同质量的纸，然后把药品放
在纸上称量。
9.易潮解的药品，必须放在玻璃器皿上（如：
小烧杯、表面皿）里称量。
10.砝码若生锈，测量结果偏小；砝码若磨损，测量结果偏大。
11.称量完毕后，应当把游码拨回零刻度，把砝码放回砝码盒中。
12.当天平不用时天平罩内应放硅胶或其他中性干燥机以保持干燥。
2.冰箱
3.酸度计
使用方法：
首先、安装
①电源的电压与频率必须符合仪器铭牌上所指明的数据，同时必须接地良好，否则在测量时可能指针不稳。
②仪器配有玻璃电极和甘汞电极。
将玻璃电极的胶木帽夹在电极夹的小夹子上。
将甘汞电极的金属帽夹在电极夹的大夹子上。
可利用电极夹上的支头螺丝调节两个电极的高度。
③玻璃电极在初次使用前，必须在蒸馏水中浸泡24小时以上。
平常不用时也应浸泡在蒸馏水中。
④甘汞电极在初次使用前，应浸泡在饱和氯化钾溶液内，不要与玻璃电极同泡在蒸馏水中。
不使用时也浸泡在饱和氯化钾溶液中或用橡胶帽套住甘汞电极的下端毛细孔。
其次、校整
①将“pH—mv”开关拨到pH位置。
②打开电源开头指示灯亮，预热30分钟。
③取下放蒸馏水的小烧杯，并用滤纸轻轻吸去玻璃电极上的多余水珠。
在小烧杯内入选择好的，已知pH的标准缓冲溶液。
将电极浸入。
注意使玻璃电极端部小球和甘汞电极的毛细孔浸在溶液中。
轻轻摇动小烧杯使电极所接触的溶液均匀。
④根据标准缓冲液的pH，将量程开关拧到0~7或7~14处。
⑤调节控温钮，使旋钮指示的温度与室温同。
⑥调节零点，使指针指在pH7处。
⑦轻轻按下或稍许转动读数开关使开关卡住。
调节定位旋钮，使指针恰好指在标准缓冲液的pH数值处。
放开读数开关，重复操作，直至数值稳定为止。
⑧校整后，切勿再旋动定位旋钮，否则需重新校整。
取下标准液小烧杯，用蒸馏水冲洗电极。
最后、测量
①将电极上多余的水珠吸干或用被测溶液冲洗二次，然后将电极浸入被测溶液中，并轻轻转动或摇动小烧杯，使溶液均匀接触电极。
②被测溶液的温度应与标准缓冲溶液的温度相同。
③校整零位，按下读数开关，指针所指的数值即是待测液的pH。
若在量程pH0~7范围内测量时指针读数超过刻度，则应将量程开关置于pH7~14处再测量。
④测量完毕，放开读数开关后，指针必须指在pH7处，否则重新调整。
⑤关闭电源，冲洗电极，并按照前述方法浸泡。
4.离心机
使用方法：
1）离心前用天平保证离心管的绝对平衡。
（2）打开电源歼关，离心机自检后，开启盖门
（3）选择所需转头，用扳手安装转头，松紧适当。
（4）装载离心管后，拧好转头盖，按下离心机门盖。
（5）设定好转速、时间和温度后，按下启动按钮开始离心。
（6）离心结束后，开启门盖，拧开转头盖。
（7）取出离心管后，卸下转头，关闭电源开关。
（8）在离心机内仓恢复室温后，擦干内壁。
二，灭菌设备
高压蒸汽灭菌器
使用方法：
（1）在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
（2）加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。
（3）继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。
注意事项：
（1）待灭菌的物品放置不宜过紧。
（2）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。
（3）灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。
须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
（4）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
（5）为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115℃）或安息香酸（熔点为120℃）置于试管内，然后进行灭菌试验。
如上述物质熔化，则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求，灭菌的效果是可靠的。
也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的。
（6）现在已有微电脑自动控制的高压蒸气灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。
三.无菌操作设备
1.超净工作台
规格价格及产地：
产品名称、型号
规格
单价
产地
经济型
PLT-ZDS
650mm宽，单人单面，桌上型垂直、水平送风
3400
普朗特
850mm宽，单人单面，桌上型垂直、水平送风
3800
普朗特
水平标准型
PLT-DDS
900×750×1430mm，单人单面，水平送风洁净度：
100级送风风速：
0.3－0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。
无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。
5600
普朗特
PLT-SDS
1500×700×1430mm，双人单面，水平送风，洁净度：
100级送风风速：
0.3-0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。
无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。
8700
普朗特
垂直标准型
PLT-DDC
980×720×1620mm，单人单面，垂直送风洁净度：
100级送风风速：
0.3-0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。
无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。
6100
普朗特
PLT-SDC
1500×720×1620，单人单面，垂直送风洁净度：
100级送风风速：
0.3-0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。
无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。
9200
普朗特
标准加长型
1700×720×1430，双人单面，水平送风，洁净度：
100级送风风速：
0.3-0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。
无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。
12000
普朗特
2，接种设备
规格价格及产地：
产品名称
规格
单价
产地
手术剪
125mm弯尖、直尖 不锈钢
30
上海
140mm弯尖、直尖 不锈钢
30
上海
180mm弯尖、直尖 不锈钢
30
上海
直镊
160mm、200mm、250mm 300mm不锈钢
13、18、24、40
上海
枪型镊
170mm、200mm不锈钢
22、30
上海
250mm、270mm、300mm镍钛合金
58、68、88
上海
接种棒
含接种丝
15
上海
手术刀柄
3#、7#
12
上海
手术刀片
10#、11#、12#、15#，10片/包
5
上海
接种专用盘
Φ14cm，全不锈钢
7
上海
接种器械灭菌器
JZ-1，进口加热棒，0-300度可调，质保两年
650
普朗特
JZ-II，数字显示，0-300度可调，进口加热棒，
880
普朗特
本生灯
用于接种器具和培养瓶瓶口的灼烧灭菌，温度高达1300℃，可代替酒精灯
860
台湾
石英珠
接种器械灭菌器专用灭菌材料
10
普朗特
无菌操作步骤及注意事项：
（1）在接种4h前用甲醛熏蒸接种室，并打开其内紫外灯进行灭菌；
（2）在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；
（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；
（4）上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。
然后擦拭工作台面；
（5）先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。
若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
四.培养设备：
1.培养架
2.光照培养箱
光照培养箱
SPX-250B-G
250升
B-G型采用不锈钢内胆，两面光照。
I-G型采用全真空玻璃，三面光照。
控温范围0-50℃。
9800
上海
SPX-250I-G
250升
10800
上海
SPX-300B-G
300升
11800
上海
SPX-300I-G
300升
3.摇床
使用方法：
首先将需振荡培养的样品夹在托盘夹具上。
接通电源（将随机所配的电源插头分别插头分别插在本机电源插座上），合上电源开关，打开温控开关，此时恒温控加热部分也已进入工作状态。
数字所显示的度即为工室内的实际温度，-50--100数字为预置温度值。
如你需将温度控制在某一区域，只需将数字选至需控制的某一温度上，即可进行恒温。
打开振荡开关，振荡部分即可工作，你可根据实际需要，将振荡速度选至0一220转/分范围之内。
定时器控制振荡及温控部分。
注意事项
1,仪器应置于坚固、干燥、通风性好的地面上或工作台上使用。
2,供电电源应有接地装置，以免发生意外。
3,振荡培养箱带压缩机制冷的仪器，搬动时，应平行移动，任何一方倾斜角应小于45度。
4,箱内载物摆放应不影响空气流通，以后证箱内温度均匀
5,做准备工作或存取试验品时，应关闭电源。
6,在转速范围内，中速使用可延长仪器的使用寿命。
7,装培养试瓶，为了使仪器工作时平衡性能好，避免产生较大的振动，装瓶时应将所有的试瓶位布满，各瓶的培养液应大致相等，若培养瓶不足数，可将试瓶对称放置。
8,本仪器不能在有可燃性气体的环境中使用，如发现可燃性气体泄露，千万不可拔去电源插头，关闭温控器或灯开关，否则会产生电花，引起火灾。
9,每次使用结束后，必须清洁仪器内外表面，保持整洁，清理时禁止使用酸化学稀释剂、汽油、笨之类物品清洗。
仪器长期使用，自然磨损属正常现象。
4.实验室常用器皿、器械
（一）玻璃器皿
要求：
耐腐蚀、耐高温、高压、透明度好和便于接种。
1、培养器皿
试管适于最初消毒材料的转接和初次的继代培养要求：
口径大，高度较低
规格：
2cm×15cm、2.5cm×15cm、3cm×15cm
三角烧瓶要求：
瓶口较大、壁较厚、耐用规格：
50ml、100ml、150ml、200ml等
（1）培养皿
适用于游离细胞、原生质体、花粉等的静置培养、看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等
要求：
上、下能密切吻合。
规格：
直径9cm、12cm等
2、容器
烧杯、广口瓶、试剂瓶等
3、计量器皿
量筒、容量瓶及移液管等
4、其他
滴瓶、玻璃棒、漏斗、注射器等
（二）金属器具
（1）镊子类
接种、转移材料或分离茎尖用，以100ml三角瓶为培养瓶，可选用20cm长的镊子。
镊子过短，容易使手接触瓶口，造成污染；镊子太长，使用起来不灵活
（2）剪刀类
一般为医用剪刀。
用来剪切外植体或继代培养是分离材料
（3）解剖刀
切割芽、茎段、愈伤组织等，继代时分离材料，也可用于卫校外植体的接种
（4）解剖针
转移细胞或愈伤组织，微茎尖分离及接种等
（三）其他
周转筐、搪瓷盘、移液管架、酒精灯、试管架等
器皿及用具的洗涤
新购置玻璃器皿因有游离碱性物质，课采用酸洗法洗涤。
先用1﹪稀盐酸浸泡4h以上，然后用自来水冲洗；再加洗衣粉溶液及洗涤剂溶液刷洗，用自来水冲洗；最后再用蒸馏水冲洗后，沥干备用。
日常使用过得容器颖先除去瓶内残渣，用自来水冲洗，然后用10﹪~20﹪洗衣粉溶液及洗涤剂溶液浸泡、刷洗，洗衣粉及洗涤剂溶液加热后去污力更强，再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗后，沥干备用。
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