药物非临床药代动力学研究技术指导原那么Word下载.docx
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由于中药的特殊性，建议现用现配，不然应提供数据支持配制后受试物的质量稳固性及均匀性。
当给药时刻较长时，应考察配制后体积是不是存在随放置时刻延长而膨胀造成终浓度不准的因素。
若是由于给药容量或给药方式限制，可采纳原料药进行实验。
实验中所用溶媒和/或辅料应标明名称、标准、批号、有效期、规格及生产单位。
化学药物：
受试物应采纳工艺相对稳固、纯度和杂质含量能反映临床实验拟用样品和/或上市样品质量和平安性的样品。
受试物应注明名称、来源、批号、含量（或规格）、保留条件、有效期及配制方式等，并提供质量查验报告。
实验中所用溶媒和/或辅料应标明名称、标准、批号、有效期、规格和生产单位等，并符合实验要求。
在药物研发的进程中，假设受试物的工艺发生可能阻碍其平安性的转变，应进行相应的平安性研究。
化学药物实验进程中应进行受试物样品分析，并提供样品分析报告。
成份大体清楚的中药、天然药物也应进行受试物样品分析。
2.实验动物
一样采纳成年和健康的动物。
经常使用动物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型猪和猴等。
动物选择的一样原那么如下:
首选动物：
在考虑与人体药代动力学性质相关性的前提下，尽可能选择与毒理学和药效学研究相同的动物。
尽可能在动物清醒状态下进行实验，最好从同一动物多次采样获取药代动力学参数。
创新性药物应选用两种或两种以上的动物，其中一种为啮齿类动物；
另一种为非啮齿类动物（如犬、小型猪或猴等）。
其他药物，可选用一种动物，建议首选非啮齿类动物。
在动物选择上，建议采纳体外模型比较动物与人代谢的种属不同性，包括代谢反映类型的不同和代谢产物种类及量的不同。
通过比较，选取与人代谢性质相近的动物进行非临床药代评判；
同时尽可能明确药物代谢的研究对象（如：
原形药物、原形药物与代谢产物、或几个代谢产物同时作为药代动力学研究观看的对象）。
经口给药不宜选用兔等食草类动物。
3.剂量选择
动物体内药代动力学研究应设置至少三个剂量组，低剂量与动物最低有效剂量大体一致，中、高剂量按必然比例增加。
不同物种之间可依照体表面积或药物暴露量进行剂量换算。
要紧考察在所设剂量范围内，药物的体内动力学进程是属于线性仍是非线性，以利于说明药效学和毒理学研究中的发觉，并为新药的进一步开发和研究提供信息。
4.给药途径
所用的给药途径和方式，应尽可能与临床用药一致，也要兼顾药效学研究和毒理研究的给药途径。
（二）生物样品的分析方式
生物样品中药物及代谢产物的分析方式包括色谱法、放射性同位素标记法和微生物学方式等。
应依照受试物的性质，选择特异性好、灵敏度高的测定方式。
色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和色谱-质谱联用法（如LC-MS，LC-MS/MS，GC-MS，GC-MS/MS方式）。
在需要同时测定生物样品中多种化合物的情形下，LC-MS/MS和GC-MS/MS联用法在特异性、灵敏度和分析速度方面有更多的优势。
关于前体药物或有活性（药效学或毒理学活性）代谢产物的药物，和要紧通过代谢从体内排除的药物，成立生物样品分析方式时应考虑测定原形药和要紧代谢产物，考察物质平稳（MassBalance），说明药物在体内的转归。
在这方面，放射性同位素标记法和色谱-质谱联用法具有明显优势。
应用放射性同位素标记法测定生物样品可配合色谱法，以保证良好的检测特异性。
如某些药物难以用上述的检测方式，可选用其他方式，但要保证其靠得住性。
方式学验证（Validation）是生物样品分析的基础。
所有药代动力学研究结果，都依托于生物样品分析，只有靠得住的方式才能得出靠得住的结果。
应通过准确度、周密度、特异性、灵敏度、重现性、稳固性等研究，对成立的方式进行验证。
制备随行标准曲线并对证控样品进行测定，以确保生物样品分析数据的靠得住性。
本指导原那么提供了生物样品分析方式的大体要求［见附录
（一）］，研究时可依照药物特点及分析方式的具体类型进行选择。
（三）研究项目
1.血药浓度-时刻曲线
受试动物数：
以血药浓度-时刻曲线的每一个采样点一样很多于5个数据为限计算所需动物数。
建议受试动物采纳雌雄各半。
关于单一性别用药，可选择与临床用药一致的性别。
采样点：
采样点的确信对药代动力学研究结果有重大阻碍，假设采样点过少或选择不妥，取得的血药浓度-时刻曲线可能与药物在体内的真实情形产生较大不同。
给药前需要采血作为空白样品。
为取得给药后一个完整的血药浓度-时刻曲线，采样时刻点的设计应兼顾药物的吸收相、平稳相（峰浓度周围）和排除相。
关于吸收快的血管外给药药物，应尽可能幸免第一个点是峰浓度（Cmax）；
在Cmax周围需要3个时刻点，尽可能保证Cmax的真实性。
整个采样时刻应持续到3~5个半衰期，或持续到血药浓度为Cmax的1/10~1/20。
为保证最正确采样点，建议在正式实验前进行预实验，然后依照预实验的结果，审核并修正原设计的采样点。
同时应注意采血途径和整个实验周期的采血总量不阻碍动物的正常生理功能和血液动力学，一样不超过动物总血量的15％~20%。
例如，每只大鼠24
h内采血总量不宜超过2mL。
在采血方式上，同时也要兼顾动物福利（Animalwelfare）。
口服给药：
一样在给药前应禁食12小时以上，以排除食物对药物吸收的阻碍。
另外在实验中应注意依照具体情形统一给药后禁食时刻，以幸免由此带来的数据波动及食物的阻碍。
多次（重复）给药
关于临床需长期给药或有蓄积偏向的药物，应考虑进行多次（重复）给药的药代动力学研究。
多次给药实验时,一样可选用一个剂量（有效剂量）。
依照单次给药药代动力学实验结果求得的排除半衰期，并参考药效学数据,确信药物剂量、给药距离和持续给药的天（次）数。
血药浓度测定
依照已验证的分析方式，对搜集的生物样品进行处置及分析测定，取得各个受试动物的各采样点的血药浓度数据。
生物样品的处置应与分析方式验证中的处置方式一致。
药代动力学参数
依如实验中测得的各受试动物的血药浓度-时刻数据，求得受试物的要紧药代动力学参数。
静脉注射给药，应提供排除半衰期（t1/2）、表观散布容积（Vd）、血药浓度-时刻曲线下面积（AUC）、清除率（CL）等参数值；
血管外给药，除提供上述参数外，还应提供峰浓度（Cmax）和达峰时刻（Tmax）等参数，以反映药物吸收、排除的规律。
另外，应提供统计矩参数，如:
平均滞留时刻（MRT）、AUC（0-t）和AUC（0-∞）等，关于描述药物药代动力学特点也是成心义的。
应提供的数据
1.7.1单次给药
各个受试动物的血药浓度-时刻数据及曲线和各组平均值、标准差及曲线。
各个受试动物的要紧药代动力学参数及各组平均值、标准差。
对受试物单次给药非临床药代动力学的规律和特点进行讨论和评判。
1.7.2多次（重复）给药
各个受试动物第一次给药后的血药浓度-时刻数据及曲线和要紧药代动力学参数及各组平均值、标准差和曲线。
各个受试动物的3次稳态谷浓度数据及各组平均值、标准差。
各个受试动物血药浓度达稳态后末次给药的血药浓度-时刻数据和曲线和要紧药代动力学参数，及各组平均值、标准差和曲线。
比较第一次与末次给药的血药浓度-时刻曲线和有关参数。
对受试物多次给药非临床药代动力学的规律和特点进行讨论和评判。
2.吸收
关于经口给药的新药，进行整体动物实验时应尽可能同时进行血管内给药的实验，提供绝对生物利费用。
如有必要，可进行体外细胞实验、在体或离体肠道吸收实验等以论述药物的吸收特性。
关于其他血管外给药的药物及某些改变剂型的药物，应依照立题目的，提供绝对生物利费用或相对生物利费用。
建议采纳非啮齿类动物（如：
犬或猴等）自身交叉实验设计，用同一受试动物比较生物利费用。
3.散布
一样选用大鼠或小鼠进行组织散布实验，但必要时也可在非啮齿类动物（如犬）中进行。
通常选择一个剂量（一样以有效剂量为宜）给药后，至少测定药物及要紧代谢产物在心、肝、脾、肺、肾、胃肠道、生殖腺、脑、体脂、骨骼肌等组织的浓度，以了解药物在体内的要紧散布组织和器官。
专门注意药物浓度高、蓄积时刻长的组织和器官，和在药效靶组织或毒性靶组织的散布（如对造血系统有阻碍的药物，应考察在骨髓的散布）。
必要时成立和说明血药浓度与靶组织药物浓度的关系。
参考血药浓度-时刻曲线的转变趋势，选择至少3个时刻点别离代表吸收相、平稳相和排除相的药物散布。
假设某组织的药物或代谢产物浓度较高，应增加观测点，进一步研究该组织中药物排除的情形。
每一个时刻点，一样应有6个动物（雌雄各半）的数据。
以下情形可考虑进行多次给药后特定组织的药物浓度研究：
（1）药物/代谢产物在组织中的半衰期明显超过其血浆排除半衰期，并超过毒性研究给药距离的两倍；
（2）在短时间毒性研究、单次给药的组织散布研究或其他药理学研究中观看到未预料的，而且对平安性评判有重要意义的组织病理学改变；
（3）定位靶向释放的药物。
进行组织散布实验，必需注意取样的代表性和一致性。
4.排泄
建议同时提供啮齿类和非啮齿类动物的排泄数据，啮齿类（大鼠、小鼠等）每一个性别3只动物，非啮齿类（如犬）每一个性别2~3只动物。
依照药物特性，也可选择单一性别动物，但需说明。
尿和粪的药物排泄：
将动物放入代谢笼内，选定一个有效剂量给药后，按必然的时刻距离分段搜集尿或粪的全数样品，直至搜集到的样品中药物和要紧代谢产物低于定量下限或小于给药量的1%。
粪样品搜集后按必然比例制成匀浆，记录总重量或体积，取部份尿或粪样品进行药物和要紧代谢产物浓度测定或代谢产物谱（Metaboliteprofile）分析，计算药物和要紧代谢产物经此途径排泄的速度及排泄量。
每一个时刻段至少有5只动物的实验数据。
胆汁排泄：
一样在动物麻醉下作胆管插管引流，待动物清醒且手术完全恢复后给药，并以适合的时刻距离分段搜集胆汁，进行药物和要紧代谢产物测定。
记录药物及要紧代谢产物自粪、尿、胆汁排出的速度及总排出量（占总给药量的百分比），提供物质平稳的数据。
5.与血浆蛋白的结合
一样情形下，只有游离型药物才能通过脂膜向组织扩散，被肾小管滤过或被肝脏代谢，因此药物与蛋白的结合会明显阻碍药物散布与排除的动力学进程，并降低药物在靶部位的浓度。
建议依照药理毒理研究所采纳的动物种属，进行动物与人血浆蛋白结合率比较实验，以预测和说明动物与人在药效和毒性反映方面的相关性。
研究药物与血浆蛋白结合可采纳多种方式，如平稳透析法、超过滤法、分派平稳法、凝胶过滤法、色谱法等。
依照药物的理化性质及实验室条件，可选择利用一种方式进行至少3个浓度（包括有效浓度）的血浆蛋白结合实验，每一个浓度至少重复实验３次，以了解药物与血浆蛋白结合率和可能存在的浓度依托性和血浆蛋白结合率的种属不同。
对血浆蛋白结合率高，且平安范围窄的药物，建议开展体外药物竞争结合实验，即选择临床上有可能归并利用的高蛋白结合率药物，考察对所研究药物蛋白结合率的阻碍。
6.生物转化
关于创新性的药物，尚需了解在体内的生物转化情形，包括转化类型、要紧转化途径及其可能涉及的代谢酶表型。
关于新的前体药物,除对其代谢途径和要紧活性代谢产物结构进行研究外,尚应付原形药和活性代谢产物进行系统的药代动力学研究。
而对要紧在体内以代谢排除为主的药物（原形药排泄<
50%），生物转化研究那么可分时期进行：
临床前可先采纳色谱方式或放射性同位素标记方式分析和分离可能存在的代谢产物，并用色谱-质谱联用等方式初步推测其结构。
若是临床研究提示其在有效性和平安性方面有开发前景，需进一步研究并说明要紧代谢产物的代谢途径、结构及酶催化机制。
但当多种迹象提示可能存在有较强活性或毒性的代谢产物时，应及早开展活性或毒性代谢产物的研究，以确信开展代谢产物动力学实验的必要性。
体内药物生物转化可考虑与血药浓度-时刻曲线和排泄实验同时进行，应用这些实验搜集的样品进行代谢产物的鉴定及浓度测定。
应及早考察药效和毒性实验所用的实验动物与人体代谢的不同。
这种不同有两种情形，其一是量的不同，动物与人的代谢产物是一致的，但各代谢产物的量不同或所占的比例不同；
其二是质的不同，即动物与人的代谢产物是不一致的，这时应考虑这种代谢的种属不同是不是会阻碍到其药效和毒性，并以此作为药效和毒性实验动物选择的依据。
建议在初期非临床药代动力学研究时，进行药物体外（如动物和人肝组织匀浆、原代肝细胞、肝S9、肝微粒体等）代谢实验，以预测动物与人体体内代谢有无不同。
7.药物代谢酶及转运体研究
药物的有效性及毒性与血药浓度或靶器官浓度紧密相关。
必然剂量下的血药浓度或靶器官浓度取决于该药物的吸收、散布、代谢及排泄进程（ADME），而代谢酶和转运体是阻碍药物体内进程的两大生物体系，是药物ADME的核心机制之一。
因此，创新性药物的研究开发应该重点关注药物吸收和要紧排除途径的确信、代谢酶和转运体对药物处置相对奉献的描述、基于代谢酶或转运体的药物-药物彼此作用的评估等。
体外实验体系是评判药物代谢酶和转运体作用机制的有力手腕，应结合体内实验，综合评判药物的处置进程。
非临床ADME研究应要紧采纳人源化材料（如：
人肝微粒体、肝S9、原代肝细胞及P450重组酶等），鉴定药物是不是是代谢酶的底物或抑制剂。
P450同工酶之外的药物代谢酶，如葡萄糖醛酸结合酶、硫酸转移酶等，也应该在适当的情形下进行评估。
对细胞色素P450同工酶（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4等）抑制的考察能够通过利用类药性探针底物（Drug-likeProbeSubstrate）完成。
抑制实验应该在酶动力学线性范围进行，即探针底物药物的浓度Km（米氏常数），抑制强弱通过IC50或Ki判定。
P450同工酶抑制实验的思路与方式适用于其他药物代谢酶和转运体的研究评判。
药物对P450酶的诱导应该重点对人CYP3A4和CYP1A2、CYP2B6进行评估。
体外诱导实验可运用人肝细胞多次给药后相关mRNA表达和/或酶活性的转变进行评判。
具有重要临床意义的外排和摄入转运体要紧包括P-gp、BCRP、OATP1B一、OATP1B3、OAT一、OAT3和OCT2等，建议针对这些转运体进行研究。
除此之外的其他转运体研究，在必要时也可予以考虑。
创新药物非临床ADME研究还应该考虑到代谢酶与转运体之间的彼此阻碍及潜在的彼此作用、人特异性代谢产物的评估等。
8.物质平稳
在临床前和临床初期时期，专门是毒性剂量和有效医治剂量范围确信的情形下运用放射性标记化合物，可通过搜集动物和人体粪、尿和胆汁以研究药物的物质平稳。
这些研究能够取得化合物的排泄途径和排泄速度等信息，而且有助于代谢产物的性质鉴定，并通过有限的数据比较它们的体内吸收和散布特点。
通过体外和动物样品中分离出的代谢产物有时可作为参比品用于临床和非临床的定量研究。
同时，组织散布研究和动物胆管插管搜集的胆汁能够提供药物的组织散布数据和明确胆汁清除特点。
一样应采纳放射性同位素标记技术研究物质平稳。
有关实验方式的介绍及相关考虑见附录
（二）。
考虑到每一个化合物及其代谢产物具有各自的理化特性，在开展不同化合物的同位素标记研究时对实验方式作慎重的调整/修改是很有必要的。
四、数据处置与分析
应有效整合各项实验数据，选择科学合理的数据处置及统计方式。
如用运算机处置数据，应注明所用程序的名称、版本和来源，并对其靠得住性进行确认。
五、实验结果与评判
对所获取的数据应进行科学和全面的分析与评判，综合论述药物在动物体内的药代动力学特点，包括药物吸收、散布和排除的特点；
经尿、粪和胆汁的排泄情形；
与血浆蛋白结合的情形；
药物在体内蓄积的程度及要紧蓄积的器官或组织；
如为创新性的药物，还应说明其在体内的生物转化、排除进程及物质平稳情形。
在评判的进程中注意进行综合评判，分析药代动力学特点与药物的制剂选择、有效性和平安性的关系，从体外实验和动物体内实验的结果，推测临床药代动力学可能显现的情形，为药物的整体评判和临床研究提供更多有价值的信息。
六、附录
（一）生物样品分析方式的大体要求
1.大体概念
生物样品分析方式的大体参数包括：
（1）准确度，
（2）周密度，（3）特异性，（4）灵敏度，（5）重现性，（6）稳固性。
现将相关的概念介绍如下：
准确度：
在确信的分析条件下，测得值与真实值的接近程度。
周密度：
在确信的分析条件下，相同基质中相同浓度样品的一系列测量值的分散程度。
特异性：
分析方式测量和区分共存组分中分析物的能力。
这些共存组分可能包括代谢产物、杂质、分解产物、基质组分等。
灵敏度：
生物样品分析方式的灵敏度要紧通过测定定量下限样品的准确度和周密度来表征。
重现性：
不同实验室间测定结果的分散程度，和相同条件下分析方式在距离一段短时刻后测定结果的分散程度。
稳固性：
一种分析物在确信条件下，一按时刻内在给定基质中的化学稳固性。
标准曲线：
实验响应值与分析物浓度间的关系。
应采纳适当的加权和统计查验，用简单的数学模型来最适本地描述。
标准曲线应是持续的和可重现的，应以回归计算结果的百分误差最小为基础。
提取回收率：
分析进程的提取效率，以样品提取和处置进程前后分析物含量百分比表示。
定量范围：
包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的浓度范围，在此范围内采纳浓度-响应关系能进行靠得住的、可重复的定量，其准确度和周密度能够同意。
生物基质：
一种生物来源物质，能够以可重复的方式搜集和处置。
例如全血、血浆、血清、尿、粪、各类组织等。
基质效应：
由于样品中存在干扰物质，对响应造成的直接或间接的阻碍。
分析批：
包括待测样品、适当数量的标准样品和质控样品的完整系列。
一天内能够完成几个分析批，一个分析批也能够持续几天完成。
标准样品：
在生物基质中加入已知量分析物配制的样品，用于成立标准曲线，计算质控样品和未知样品中分析物浓度。
质控样品：
即QC样品，系指在生物基质中加入已知量分析物配制的样品，用于监测生物分析方式的重复性和评判每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性。
2.生物样品分析方式的成立和验证
由于生物样品取样量少、药物浓度低、内源性物质（如无机盐、脂质、蛋白质、代谢产物）及个体不一样多种因素阻碍生物样品测定，因此必需依照待测物的结构、生物基质和预期的浓度范围，成立适宜的生物样品分析方式，并对方式进行验证。
分析方式验证分为全面验证和部份验证两种情形。
关于第一次成立的生物样品分析方式、新的药物或新增代谢产物定量分析，应进行全面方式验证。
在其他情形下能够考虑进行部份方式验证，如生物样品分析方式在实验室间的转移、定量浓度范围改变、生物基质改变、稀少生物基质（动物组织样品）、证明复方给药后分析方式的特异性等。
应考察方式的每一步骤，确信从样品搜集到分析测试的全进程中，环境、基质、材料或操作上的可能改变对测定结果的阻碍。
（1）特异性
必需证明所测定的物质是预期的分析物，内源性物质和其他代谢产物不得干扰样品的测定。
关于色谱法至少要考察6个不同个体空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品（注明样品来源基质、用药后的时刻）色谱图。
关于以软电离质谱为基础的检测方式（LC-MS、LC-MS/MS等），应注意考察分析进程中的基质效应，如离子抑制等。
（2）标准曲线与定量范围
依照所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方式（如用加权最小二乘法）取得标准曲线。
标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到实验要求的周密度和准确度。
用至少5个浓度成立标准曲线，应利用与待测样品相同的生物基质，定量范围要能覆盖全数待测浓度，不许诺将定量范围外推求算未知样品的浓度。
成立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。
（3）周密度与准确度
要求选择3个浓度的质控样品同时进行方式的周密度和准确度考察。
低浓度选择在定量下限周围，其浓度在定量下限的3倍或3倍之内；
高浓度接近于标准曲线的上限；
中间选一个浓度。
每一浓度每批至少测定5个样品，为取得批间周密度，应至少3个分析批合格。
周密度用质控样品的批内和批间相对标准差（RSD）表示，相对标准差一样应小于15%，在定量下限周围相对标准差应小于20%。
准确度一样应在85%～115%范围内，在定量下限周围应在80%～120%范围内。
（4）定量下限
定量下限是标准曲线上的最低浓度点，要求至少能知足测定3～5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/10～1/20时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的80%～120%范围内，RSD应小于20%。
应由至少5个标准样品测试结果证明。
（5）样品稳固性
依照具体情形，对含药生物样品在室温、冰冻或冻融条件下和不同寄存时刻进行稳固性考察，以确信生物样品的寄存条件和时刻。
还应注意储蓄液的稳固性和样品处置后的溶液中分析物的稳固性。
（6）提取回收率
应考察高、中、低3个浓度的提取回收率，其结果应周密和可重现。
（7）稀释靠得住性
样品稀释不该阻碍准确度和周密度。
应该通过向基质中加入分析物至高于标准曲线上限浓度，并用空白基质稀释该样品（每一个稀释因子至少5个测定值），来证明稀释的靠得住性。
准确度和周密度应在±
15%之内。
稀释的靠得住性应该覆盖实验样品所用的稀释倍数。
（8）残留
方式开发期间应使残留最小化。
方式验证期间应通过检测标准曲线定量上限浓度后测定空白样品来确信其残留，通常残留应不大于定量下限的20%。
生物样品分析期间也应进行残留检测，如在测定高浓度样品后和分析下一个样品之前测定空白样品。
（9）微生物学分析
上述分析方式验
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