RocheLightCycler480中文操作说明.docx
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RocheLightCycler480中文操作说明
Roche-LightCycler-480-中文操作说明
LightCycler®480中文操作说明
罗氏医学仪器公司/应用科学部门
February2008
一.启动机器与软件
3
二.软件设定---开启新实验
5
三.样品编辑
9
四.结果分析
12
五.报告
18
六.数据转移至其它计算机（数据输出与输入）
19
七.使用者管理
19
1.按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之96或384孔盘。
放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。
∙启动软件
1.开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入Windows。
Username:
OPERATOR
Password:
LC480
2.开启LightCycler480软件，并输入正确的使用者与密码。
二．软件设定--开启新实验
∙设定新实验
1.软件开启后，会进入主画面。
点选“NewExperiment”。
2.出现实验设定窗口。
任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的按钮。
∙设定实验
v若要套用设定好的实验步骤（Template），请跳至6.。
1.在实验设定画面上方，先选择适当的DetectionFormat。
选项包含:
另外可再点选“Customize”勾选所需的滤片组合。
2.输入反应体积:
96wellplate范围为10-100ul，而384wellplate范围为5-20ul。
3.设定实验步骤（Program）
∙设定program，包含有Pre-incubation,Amplification（PCR）,Meltingcurve（optional）与Cooling。
利用『+』与『－』增加或删除步骤。
∙设定循环数目（Cycle）与分析模式。
通常Amplification（PCR）program设定成『Quantification』，而MeltingCurveprogram设定成『MeltingCurve』。
4.设定详细温度变化（依照不同实验方法与设计而有所不同）
∙点选各个program即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明书来设定，利用『+』与『－』增加或删除步骤。
需要设定的参数包含Target（℃）目标温度，AcquisitionMode（荧光侦测模式），Hold（hh:
mm:
ss）停留时间。
RampRate（℃/s）为升降温速度，范围如下：
RampRate（℃/s）
Heatingup
Coolingdown
96-wellBlock
1.0–4.4℃/s
1.0–2.2℃/s
384-wellBlock
1.0–4.8℃/s
1.0–2.5℃/s
v若设定温度低于50℃，请把RampRate调整成1.5℃/s（96well）或2.0℃/s（384well）。
5.将实验步骤储存成『Template』以便下次进行套用。
点选左下角“SaveAsTemplate”即可把此步骤储存起来。
6.若要进行套用时，请直接点选窗口左下角“ApplyTemplate”，选择欲套用之实验步骤即可。
7.设定完成后点选“StartRun”开始进行实验。
8.跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。
v实验进行中会进入另一个Data窗口，窗口下方按键功能如下：
✓EndProgram:
结束此Program,进入下一个Program。
✓+10Cycles:
实时增加循环数目。
✓AbortRun:
马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结果将不储存。
三．样品编辑
∙将样品分群
1.点选窗口左边的“SubsetEditor”。
2.点选“New”新增新的群组，并将其命名。
3.利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角“Apply”，此时被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。
4.以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。
v样品必须分群才能够独立分析，但是样品是否分群并不影响样品的Cp值。
∙编辑样品名称
1.点选窗口左边的“SampleEditor”。
2.输入每个位置之样品名称（Name）与重复（Repl.Of）。
3.若要更快速输入，可直接在左边的图上点选欲编辑之样品：
v若A1,A2与A3为三重复，在A2与A3Repl.Of字段上都填上A1即为三重复。
v在编辑过程中，可利用『Ctrl』+『C』复制文字，『Ctrl』+『V』贴上文字。
4.根据实验分析模式，编辑AbsQuant（绝对定量），RelQuant（相对定量），或Genotyping分页，设定SampleType。
绝对定量（AbsQuant）：
『Unknown』:
未知浓度样品
『Standard』:
已知浓度标准品
相对定量（RelQuant）：
『Target』:
目标基因
『Reference』:
参考基因
『Calibrator』:
Control样品
『Standard』:
已知浓度的样品
『Unknown』:
未知浓度样品
v其它分析模式之分页在此不赘述，请自行参考LightCycler480InstrumentOperator’sManual。
5.若设定成『Standard』之样品请输入浓度。
6.若想要将此样品编辑储存成Template，可点选窗口左下角“SaveAsTemplate”即可，下次实验时可点选“ApplyTemplate”进行套用。
四．结果分析
∙点选左边的“Analysis”，选取分析模式，并选择所需分析之群组，如下图：
1.
分析模式
说明
AbsQuant/2ndDerivativeMax
绝对定量（自动法）
AbsQuant/FitPoints
绝对定量（手动法）
ColorCompensation
色差校正（多色实验校正用）
GeneScanning
基因扫描（适用于HighResolutionMeltingCurve,HRM分析）
Genotyping
基因分型（适用于HybProbe之基因分型实验）
RelativeQuantification
相对定量
TmCalling
Tm分析
∙绝对定量（AbsoluteQuantification）
1.点选下方的“Calculate”即可得到样品之Cp与标准曲线。
重複樣品平均後之Cp值與濃度,並自動計算標準差
2.数值之数据输出:
在数值分析表上按鼠标右键，点选“Export”即可输出成.txt档案格式。
可直接以MicrosoftExcel软件开启。
3.图形输出:
在图形上按鼠标右键，点选“Export”即可输出成各种图形档案格式。
4.标准曲线储存:
点选窗口下方StdCurve之“Saveasexternal”，输入适合档名后即可储存在数据库中。
∙相对定量（RelativeQuantification）
1.在选择相对定量分析后，出现下面窗口：
vReferenceSampleLocation:
若Reference（Housekeepinggene）之样品在同一盘上请选择“In-Run”，否则请选择“External”可输入另一次实验的数据一起分析。
v建议将AutoPair打勾让计算机自动将样品配对。
2.进入『Target』与『Reference』分页，右下角显示“Eff=2”表示将目标基因与参考基因的PCR效率以2.0来计算。
3.若需要校正目标基因与参考基因之PCR效率，则需要输入标准曲线。
在『Target』与『Reference』分页之右下角，输入（import）标准曲线。
vUseinrun：
输入（import）同一盘上之标准曲线。
vUseexternal：
输入（import）之前已储存于数据库中之标准曲线。
4.点选『Pairing』分页，检查计算机自动配对结果是否正确。
其中，红色表示Unknown样品，绿色表示Calibrator样品。
若欲外加配对，则可直接以鼠标点选样品后按“Add”即可增加配对。
5.点选『Results』分页，点选“Calculate”即可得到计算结果。
6.数值和图形输出与绝对定量相同。
（请参考绝对定量）
∙基因分型（Genotyping）
1.进入基因分型的窗口中。
2.窗口右下角可设定分类方式
vAutoGroup：
自动分组
vIn-run：
标准品包含在本次实验中
vExternal：
标准品在之前已储存之实验中
3.点选“Calculate”即可得到分型结果。
∙Tm分析（TmCalling）
1.进入Tm分析窗口
2.确认波峰数目
3.选择检测模式
4.点选“Calculate＂即可得到每个样品之Tm值。
五．报告（Report）
1.将分析后结果储存后即可点选报告键。
数据储存 报告
2.勾选想要呈现的报告内容。
3.点选“Generate”即可产生报告。
4.点选“PDF”即可将此报告储存成.pdf档案格式。
六．数据转移至其它计算机（数据输出与输入）
∙数据输出
1.点选（navigator）
2.点选所要输出的实验档案，点选即可将档案输出成.ixo档案
3.将此ixo档案以光盘或随身碟存到另一计算机
∙数据输入
1.分析计算机上开启LightCycler480软件，登入后点选
2.点选 ，选取所要输入的.ixo档案并开启，即可开始进行实验数据分析
3.点选将此实验档案储存至数据库中
七．使用者管理
1.点选右方工具键。
2.点选“UserandGroups”。
3.点选“New”即可新增使用者，并设定使用者名称、密码与权限。
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