青岛科技大学药剂学专业实验论文Word文档格式.docx
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1材料
1.1动物
健康雄性小白鼠4只，重量（20―30）g
1.2药物
主药：
黄芩（产地：
山东，产品批号：
100301）、连翘（产地：
山西，产品批号：
120601）、金银花（产地：
河南，产品批号：
100908）
药用辅料：
硬脂酸镁、淀粉、微晶体纤维素、羧甲基淀粉钠、0号胶囊壳（浙江新昌县天林化工胶囊有限公司）。
1.3．仪器及试剂
1、仪器
LD5-2A低速离心机、GZX-9240MBE数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司）、B型玻璃仪器气体烘干仪、SHR-Ⅲ循环水式多用真空泵、KH-2500B型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）、HH-4数显恒温水浴锅（常州市华普达教学仪器有限公司）、YH-1通风柜（青岛岳海实验室设备有限公司）、蒸煮锅、KDM型调温加热套（龙口市电炉制造厂）、电热炉、紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、粉碎机、BJ-1崩解时限测试仪（天津市国铭医药设备有限公司）、布氏漏斗、漏斗、离心管、玻璃棒、蒸发皿、纱布、试管、研钵、容量瓶（100ml、10ml）、分液漏斗（250ml）、密度计（黄骅市滨海玻璃仪器厂）、胶头滴管、洗耳球、14目筛、16目筛、FA12048电子天平、YP202N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）、YP601ND电子天平、小铝盆、不锈钢托盘、胶囊板、滤纸、展开缸、玻璃板、量筒（100ml、10ml）、烧杯（1000ml、500ml、200ml、100ml）、灌胃器、剪刀、打眼器、喷壶。
2、试剂
黄芩对照药材溶液、黄芩苷对照品溶液、金银花对照药材溶液、绿原酸对照品溶液、连翘对照药材溶液、连翘苷对照品溶液、氨制硝酸银溶液、10%硫酸乙醇溶液、盐酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液、醋酸乙酯（分析纯）、甲醇（分析纯）、50%甲醇、正丁醇（分析纯）、冰醋酸、三氯甲烷（分析纯）、蒸馏水（分析纯）、二甲苯、双黄连水溶液、2mol/LHCl、75%乙醇、80%乙醇、无水乙醇、硅胶、羧甲基纤维素钠
2方法
2.2．黄芩、连翘和金银花的提取
2.1.1.黄芩的提取
称取黄芩150g，放入蒸煮锅内，加入适量水（没过药材1-2cm），用电热炉小火加热，保持微沸。
水煎煮2小时后停止，滤过（2层纱布），取滤液于500ml烧杯中。
药渣继续加适量水煎煮30min，滤过（2层纱布），合并两次滤液。
将蒸煮锅刷洗干净，并将所得的滤液倒入其中，于电热炉上浓缩，浓缩成约100毫升左右的浸膏。
用密度计测量其相对密度为1.057（80℃），并在水浴锅上保持80℃用2mol/LHCl调节PH至1.0-2.0之间，在水浴锅上保温1小时，然后再在室温下静置24小时，得到下层为土黄色的膏状物质，上层为棕红色液体。
用胶头滴管小心弃去上层液体，向盛有土黄色膏状物质的烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅匀，倒入布氏漏斗中抽滤，用PH试纸测试溶液PH=3，取出滤饼，放入烧杯中再加入蒸馏水若干搅匀，再用布氏漏斗抽滤，取出滤饼，测试溶液的PH，重复以上步骤，抽滤处理共4次。
最终，PH调至5.0，然后再用80%的醇洗，按以上步骤，洗至PH接近7.0，醇洗2次，得到的沉淀用玻璃棒转移至100ml烧杯，两个蒸发皿中，放入烘箱中，恒温60摄氏度，干燥研细备用。
2.1.2.金银花、连翘的提取
称取金银花160g，连翘320g，预留24.0g干药材粉碎备用（金银花8.0g，连翘16.0g）。
将连翘和金银花混合药材放入蒸煮锅内，加入适量水（没过药材1-2cm），用电热炉小火加热，保持微沸。
水煎煮1.5h后停止，滤过（2层纱布），取滤液于500ml烧杯中。
药渣继续加适量水煎煮1.5h，滤过（2层纱布），合并两次滤液。
将蒸煮锅刷洗干净，并将所得的滤液倒入其中，于电热炉上浓缩，浓缩成约160mL的清膏，用密度计测量其相对密度为1.20-1.25（80℃）（未测相对密度，只是凭老师指导和实验经验）。
室温冷却至40℃时，搅拌下缓缓加入乙醇480mL,使含醇量达75%。
充分搅拌，静置12小时，过滤，将残渣中加入75%乙醇适量，搅拌，静置5小时，过滤，合并两次滤液，回收乙醇至无醇味。
将其浓缩成相对密度为1.34-1.40（60℃测）的稠膏（未测相对密度，只是凭老师指导和实验经验）。
2.2.双黄连胶囊的制备
1．处方组成：
提取的黄芩粉末8.7g
金银花、连翘粉碎粉末22.2g
金银花、连翘稠膏所提取量
微晶纤维素5.0g
羧甲基淀粉钠5.0g
硬质酸镁2.0g
淀粉适量
乙醇适量
制备80粒
2.制法：
向上述制得的金银花、连翘稠膏中加入预留的金银花连翘粉末，并且迅速用玻璃棒搅拌均匀，然后再向其中加入提取的黄芩粉末，并迅速搅匀。
加入微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，淀粉，硬脂酸镁适量，搅拌均匀，用喷雾法喷入无水乙醇适量，迅速用手搅拌均匀并制成软材，过16目筛，湿粒在60℃温度下烘干，干粒过14目筛整粒，最后用胶囊板装入胶囊壳制备胶囊。
2.3复方双黄连胶囊的鉴别、质量检查和含量测定
2.3.1复方双黄连胶囊的质量检查
1、装量差异：
取14粒胶囊，分别精密称定重量后，倾出内容物（不得损失囊壳），囊壳用小刷拭净，置通风处使溶剂自然挥尽，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量与平均装量。
每粒的装量与平均装量相比较，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。
平均装量重量差异限度
0.3g以下±
10％
0.3g或0.3g以上±
7.5％
2、崩解时限：
取供试品6粒，按《中国药典》2010年版二部附录XA进行崩解时限检查。
硬胶囊应在30min内全部崩解。
如有1粒不能完全崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。
2.3.2复方双黄连胶囊的鉴别
1．黄芩的鉴别
供试液的制备：
取双黄连胶囊4g，甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至近干，加甲醇2mL使溶解。
黄芩对照药材溶液的制备：
黄芩对照药材1g，同上法，制成黄芩对照药材溶液。
黄芩对照品：
精密称定，加甲醇制成1mg/mL的溶液。
TLC：
点样量各2μL，硅胶薄层板（硅胶3g、羧甲基纤维素10mL）
展开剂：
正丁醇：
冰醋酸：
水（7:
1:
2）,展开，晾干，喷以盐酸酸化的5%FeCl3乙醇溶液，供试品色谱中，在与黄芩对照药材和黄芩对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2．金银花的鉴别
供试品的制备：
取双黄连胶囊4g，加热水40mL使溶解，加醋酸乙酯提取两次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取的水溶液，加0.3ml2M的盐酸溶液调节pH至1.0，用醋酸乙酯提取二次，每次15mL，合并醋酸乙酯提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL，使溶解，滤过，滤液作供试品溶液。
金银花对照药材溶液的制备：
金银花对照药材5g，加水50mL，煎煮1h，滤过，滤液加盐酸调节pH至1.0，同法制成金银花对照药材溶液。
绿原酸对照品溶液的制备：
精密称定，加甲醇制成1mg/mL的溶液
TCL:
点样量各2μL,硅胶G薄层板（用前活化处理）
醋酸丁酯：
甲酸：
水（7：
2.5：
2.5）的上层溶液为展开剂，展开，晾干喷以氨制硝酸银试液，立即检视。
供试品色谱中，在与金银花对照药材和绿原酸对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3．连翘的鉴别
供试品溶液的制备：
双黄连颗粒4g，研细，加75%乙醇10ml，超声处理10min，滤过，滤液作为供试品溶液
连翘对照药材溶液的制备：
取连翘对照药材0.5g，加甲醇10mL，置水浴上加热回流20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。
TCL：
吸取对照药材溶液供试品各2μL，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5:
1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.3.3.复方双黄连胶囊含量测定
对照品溶液的制备：
精密称取真空干燥至恒温的黄芩苷对照品12.5mg置50mL容量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇，使溶解，放置至室温，稀释至刻度即得浓度为0.25mg/mL的溶液。
取重量差异下双黄连颗粒研细，用电子天平称取供试品M=3.0000g，置100ml容量瓶中加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，稀释至刻度，摇匀。
滤过，精密量取滤液2ml置100ml容量瓶中至刻度，摇匀，滤过，再精密量取续滤液2ml置100ml容量瓶中摇匀。
滤过，精密量取滤液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得。
标准曲线的绘制：
精密量取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml,分别置100ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，于277nm和377nm波长处分别测吸光度A值，并且计算△A，以△A对浓度y进行线性回归，得标准曲线方程。
供试品吸光度测定：
取供试品溶液于277nm和377nm波长处分别测吸光度，分别为A¹
、A²
，得△A=A¹
－A²
，根据回归方程计算样品中黄芩苷的含量。
2.4复方双黄连胶囊的药效研究
选用健康雄性小白鼠4只，称重，并分别用苦味酸标记。
随机分成给药组（1号，2号，3号）和对照组，并且标号。
每鼠左耳两面涂二甲苯约0.02mL，右耳做空白对照。
分别取0.0836g，0.1672g，0.2508g药配成7ml溶液,并且分别标上标签1号，2号，3号。
30min后，两组分别灌胃给药0.7ml（最大给药量为0.3ml/10g）。
给药组：
取相对应的配置的1号，2号，3号药液灌胃。
对照组：
给等量蒸馏水（代替生理盐水）。
4h后，将小鼠处死，剪下双耳并在同一部位打圆耳片，扭力天平称重，以（左耳重-右耳重）/右耳重作为肿胀率，比较差异。
3结果与讨论
3.1．黄芩、连翘和金银花的提取
【结果】
提取得到黄芩粉末8.7g，一定量金银花、连翘稠膏。
【讨论】
1、水煎法提取出的连翘，金银花，黄芩的量相对超声提取法、回流提取法等其他溶剂提取法得到的量较多，并且设备简单，操作简单，是中药提取的好方法。
但同时要注意的是：
提取出的药量大，多糖、鞣质等杂质也较多，多糖等成分粘性很大，会造成后期制粒时软材粘性过大，影响制粒。
2、煎煮时要注意补充水分，保持药液微沸即可，不要过大的火力加热，并且在煎煮过程中经常用玻璃棒搅拌，防止药材煎糊使药物有效成分减少，产生毒副物质。
3、黄芩提取过程中，采取80℃保温一小时的措施，目的是便于黄芩苷的析出，凝集成较大的颗粒易于沉降和过滤，注意保温尽量保持静止稳定，使之充分受热沉降。
3.2．双黄连胶囊的制备
1、制软材和制湿粒的过程中出现较多问题：
在制软材时候，由于没有预先查好资料，导致崩解剂羧甲基淀粉钠和润滑剂硬脂酸镁过早的加入，影响了其崩解和润滑效果，这样不但不能加快胶囊崩解，而且还会延迟胶囊崩解。
由于采用水煎法提取的金银花和连翘，因此含多糖、鞣质等杂质比较多，而多糖等的粘性本身就很大，并且加入辅料的次序及用量不太恰当，金银花连翘稠膏过于黏稠，其中的水分太少，导致在制备软材的过程中，加入黄芩、金银花连翘药材粉末和各种辅料的时候，越搅拌粘性越大，最后直接搅拌不了，并且冷却后制备的软材特别硬（像石头一样硬）。
制软材失败，只能用粉碎机将其粉碎，然后再加辅料进行制备。
③制湿粒时，经过反复过筛、加辅料、用手混合的过程才勉强制成的。
由于没有掌握好制备软材和湿粒的技巧，导致在此过程中浪费了大量的药材和辅料。
④由于提取的金银花和连翘稠膏本身粘性就很大，所以在选择辅料的时候就要选择粘性不大的辅料，如微晶纤维素，和稀释剂淀粉。
⑤我认为要想得到比较理想的软材和湿粒除了要掌握相应的理论知识以外，更重要的是需要一定的制备软材的经验。
有时候，辅料多一点或者是少一点都会导致软材的制备失败，因此，我们就需要多加练习，积累制备经验。
2、处方分析：
金银花+黄芩+连翘粉主药
微晶纤维素填充剂和粘合剂
羧甲基淀粉钠崩解剂
硬质酸镁润滑剂
乙醇润湿剂
淀粉填充剂和稀释剂
3.3复方双黄连胶囊的鉴别、质量检查和含量测定结果
3.3.1.复方双黄连胶囊的质量检查结果
1、装量差异结果
胶囊总重量：
6.5005g胶囊平均重量：
0.4643g胶囊壳重量：
1.3942g囊壳平均重量：
0.0996g
表3-3-1胶囊装量差异统计
标号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
112
113
14
胶囊重量（g）
0.4701
0.4503
0.4761
0.4617
0.4590
0.4587
0.4664
0.4722
0.4472
0.4710
0.4673
00.46550
00.45533
0.4729
囊壳重量（g）
0.1059
0.0973
0.1062
0.0955
0.0966
0.0984
0.0962
0.0951
0.0964
0.1080
0.0958
00.10221
00.10000
0.1007
内容物装量（g）
0.3642
0.3530
0.3699
0.3716
0.3624
0.3603
0.3702
0.3771
0.3508
0.3630
0.3715
00.36229
00.35533
0.3722
装量差异（%）
0.14
3.21
-1.43
-1.89
0.63
1.21
-1.51
-3.40
3.81
0.47
-1.86
00.49
22.58
-2.06
由以上数据可得：
本组胶囊的平均装量均＞0.3g，装量差异均在±
7.5%范围内，因此本组胶囊装量差异符合要求。
2、崩解时限结果
6粒胶囊崩解时限：
4min内全部崩解
本组胶囊均在30min之内崩解完全，因此崩解时限符合规定。
3.3.2复方双黄连胶囊的鉴别结果
连翘薄层鉴别结果如下：
金银花波层鉴别结果如下：
黄芩薄层鉴别结果如下：
1、连翘：
如以上薄层层析结果所示，供试品与连翘对照药材和连翘苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色（紫黑色）的斑点，即制备的复方双黄连胶囊中含有连翘。
2、金银花：
如以上薄层层析结果所示，供试品的薄层结果为3个斑点（棕黄色），而金银花对照药材只出现一个斑点，绿原酸对照品没有出现斑点。
这样的结果不能说明制备的复方双黄连胶囊中含有金银花。
分析其原因：
①点样的过程中，点样量过低②配制的金银花对照黄芩苷药材溶液和和绿原酸对照品溶液有问题，可能在配制的过程中出现差错。
3、黄芩：
如以上薄层层析结果所示，供试品与对照药材均出现3个斑点（绿色），但是不是在相应位置上，对照药材出现的斑点的Rf值比对应的供试品斑点的Rf值大，即对照药材在薄层板上跑的比较快。
原因分析：
在薄层板展开的过程中，薄层板没有放平，导致对照药材一边展开速度比较快。
黄芩苷对照品的斑点极其浅，几乎看不到。
原因可能是点样量过少或是黄芩苷对照品溶液的配置有问题。
这样也稍微能够得出制备的复方双黄连胶囊中含有黄芩。
4、在展开前，应该将展开缸用展开剂进行预饱和，防止在展开的过程中出现边缘效应。
并且，在展开前，应该振摇展开剂，否则展开剂会出现分层现象，影响展开效果。
3.3.3.复方双黄连胶囊含量测定结果
1、标准曲线方程：
y=0.0332△A+0.0061，R2=0.9979
表3-3-3供试品吸光度测定结果
波长（nm）
277
377
吸光度A
0.356
0.070
△A（A¹
）
0.286
2、黄芩苷的含量%计算
代入标准曲线计算公式得黄芩苷浓度：
y=0.0156mg/ml
稀释倍数为：
50000倍
黄芩苷的重量计算：
m=y×
50000=0.0156×
50000=780g,即0.78g
黄芩苷的含量计算：
黄芩苷的含量%=m/M×
100%=0.78/3.0000×
100%=26.0%
1、一般情况下，每粒胶囊中黄芩苷的量为≥50mg，含量约为11.6%,可见制备的复方双黄连胶囊黄芩苷的含量偏高。
之所以偏高是因为，在制软材的时候，加的辅料量太少。
2、含量测定的时候，本来制备的黄芩苷溶液稀释倍数为5000倍，但是由于所测得的吸光度A值为2.345，而正常情况下A值的范围为0.3－0.7，A值太大，影响吸光度的精确性，因此又稀释了10倍。
3.4复方双黄连胶囊的药效研究结果
表3-4-14只小鼠的重量
编号
空白
1号
2号
3号
小鼠重量\g
21.79
21.81
23.30
24.08
因为4只小鼠重量均接近22g,因此近似取小鼠的重量为22g来计算每只小鼠的给药量。
并且，一般一粒双黄连胶囊约为0.53g,黄芩苷含量约为50mg，而制备的黄芩苷为26.0%，换算出来的含黄芩苷为50mg的胶囊剂为0.19g。
给药量分别为：
1号：
（0.19g×
2×
3/75000g）×
22g×
25＝0.00836g
2号：
50＝0.01672g
3号：
75＝0.02508g
表3-4-24组小鼠肿胀率结果
小鼠给药量\g
左耳重\g
右耳重\g
肿胀率\％
0.00000
0.0088
0.0048
83.3
0.00836
0.0065
0.0050
30.0
0.01672
0.0058
0.0046
26.1
0.02508
0.0053
10.4
表3-4-3全班小鼠肿胀率统计
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