6、蛋白质分离纯化有几种方法？
根据是什么？
五种。
（一）透析及超滤法：
透析（dialysis）：
利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
将蛋白溶液装入用半透膜制成的透析袋中，可将蛋白质溶液中的小分子化合物除去，这种方法叫透析。
超滤法：
应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。
（二）丙酮沉淀、盐析：
使用丙酮沉淀时，必须在0～4℃低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。
蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。
除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。
盐析（saltprecipitation）是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。
（三）电泳：
蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。
这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳（elctrophoresis）。
由于不同的蛋白质带电多少、分子量大小及分子形状不同，因此在电场中泳动的速度就不同，从而可将蛋白质分离开来。
（四）层析：
待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。
（五）超速离心：
超速离心法（ultracentrifugation）不同蛋白质的密度与形态各不相同，在离心力场中沉降的速度也不同，从而将其分离。
7、维持蛋白质三、四级结构的化学键有哪些？
哪种最重要？
三级结构：
非共价键：
疏水键、离子键、氢键和VanderWaals力等。
共价键：
二硫键
四级结构：
非共价键:
亚基之间的结合力主要是疏水键、氢键、盐键、范德华力
第二单元
1、概念
（1）核酸的一级结构：
核酸中核苷酸的排列顺序。
由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。
（2）解链温度（Tm）：
紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度（meltingtemperature,Tm）。
其大小与G+C含量成正比。
（3）DNA分子变性：
在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。
（4）核酸分子杂交：
热变性的DNA在复性过程中，具有碱基序列部分互补的不同的DNA之间或DNA与RNA之间形成杂化双链的现象。
2、碱基与核糖、核糖与磷酸及核苷酸之间各以何种键连接？
碱基和核糖（或脱氧核糖）通过糖苷键连接形成核苷（nucleoside）（或脱氧核苷）。
核苷（脱氧核苷）和磷酸以酯键连接形成核苷酸（脱氧核苷酸）。
核苷酸之间以3,5-磷酸二酯键连接形成多核苷酸链，即核酸。
3、简述RNA与DNA的主要不同点。
核酸
碱基
戊糖
DNA
A、G、C、T
脱氧核糖
RNA
A、G、C、U
核糖
4、B型DNA双螺旋结构要点。
类型
螺旋方向
螺距
nm
每圈bp数
螺旋直径
骨架走行
存在条件
A型
右手螺旋
2.3
11
变宽
平滑
体外脱水
B型
右手螺旋
3.4
10
2nm
平滑
随机DNA生理条件下
Z型
左手螺旋
4.5
12
变窄
锯齿型
CG间隔排列区段
5、真核生物mRNA的结构特点。
.大多数真核mRNA的5´末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C´2也是甲基化，形成帽子结构：
m7GpppNm2。
.大多数真核mRNA的3´末端有一个多聚腺苷酸（polyA）结构，称为多聚A尾。
6、tRNA一、二、三级结构各有哪些特点？
tRNA的一级结构特点：
含稀有碱基较多、3´末端为—CCA-OH、5´末端大多数为G、由70~90个核苷酸组成。
tRNA的二级结构特点：
三叶草形。
tRNA的三级结构特点：
倒L形。
7、试述RNA的种类及其主要功能。
第三单元
1、单糖的构型
醛糖酮糖
以分子中倒数第二个碳原子上羟基在空间的左右来判别构型（左是L型，右是D型）。
2、单糖聚合反应的化学键名称？
糖苷键
↓
3、常见的均多糖是哪四种？
淀粉、糖原、纤维素、甲壳素。
第四单元
1、生物膜由哪些脂类化合物组成？
它们共同的理化性质是什么？
膜脂：
主要包括磷脂、固醇及其他脂类，一般都属于两性分子。
2、在动植物组织中，脂肪酸在组成和结构上有何特点？
3、甘油磷酸酯类化合物在分子组成与结构上有何特点？
在水中能形成怎样的结构？
为什么？
极性，易溶于水称极性头
4、何谓生物膜？
在结构上有何特点？
细胞、细胞器及其与环境接界的所有膜结构的总称。
生物膜形态上都呈双分子层的片层结构，即磷脂双分子层构成基本骨架，蛋白质分子位于其表面或镶嵌其中，生物膜厚度约6～9nm。
流动的脂质双分子层构成膜的连续体，而蛋白质象一群岛屿一样无规则地分散在脂质的“海洋中”。
5、生物膜流动镶嵌模型的主要论点是什么？
6、生物膜有何重要的生理功能？
物质传送、保护作用、信息传递、细胞的识别作用。
第五章
名词解释
酶活性中心：
酶与底物结合并发生催化作用的部位。
Km：
Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。
酶原与酶原激活：
酶原（zymogen）有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体，此前体物质称为酶原。
酶原的激活：
在一定条件下，酶原向有活性酶转化的过程。
酶的特异性：
一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化学反应并生成一定的产物。
酶的这种选择性称为酶的特异性或专一性。
同工酶：
同工酶（isoenzyme）是指催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。
全酶：
由酶蛋白（apoenzyme）（决定反应的特异性）和辅助因子（cofactor）（决定反应的种类与性质）组合形成的酶。
酶的必需基团：
1、酶与催化剂相比有何异同？
酶与一般催化剂的共同点：
在反应前后没有质和量的变化；
机理：
只能催化热力学允许的化学反应；只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。
机制都是降低反应的活化能。
酶与一般催化剂的不同点：
（一）具有极高的效率
（二）具有高度的特异性
（三）酶促反应的可调节性
（四）酶是蛋白质具有高度的不稳定性
（五）酶在体内不断更新
2、酶特异性的种类
绝对特异性：
酶只作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物。
相对特异性：
酶作用于一类化合物或一种化学键。
立体结构特异性：
酶仅作用于立体异构体中的一种。
3、Km的生理意义
Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。
Km可近似表示酶对底物的亲和力；
Km大，表示酶和底物的亲和力弱；
Km小，表示酶和底物的亲和力强；
Km是酶的特征性常数之一（Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关而与酶的浓度无关，与底物的浓度也无关，因此，我们可以通过Km值来鉴别酶的种类。
但是它会随着反应条件（T、pH）的改变而改变）。
4、酶的抑制作用有几种，各有何特点？
不可逆性抑制作用：
抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活，不能用透析、超滤等方法予以除去。
可逆性抑制作用：
抑制剂以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。
1.竞争性抑制作用：
抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。
2.非竞争性抑制：
抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系。
3.反竞争性抑制：
抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物结合，使ES的量下降。
5、金属离子作为酶的辅助因子的作用有哪些？
金属离子的作用：
参与催化反应，传递电子；
在酶与底物间起桥梁作用；
稳定酶的构象；
中和阴离子，降低反应中的静电斥力等。
6、什么是酶的变构调节？
有何特点？
变构调节（allostericregulation）：
一些特异性的代谢物可与某些酶分子活性中心以外的部位可逆地结合，使酶构象改变，从而改变酶的催化活性，此种调节方式称变构调节。
特点：
① 通常具有四级结构，存在协同效应；
②含有催化亚基和调节亚基（或催化部位和调节部位）。
③[S]-v关系曲线为S形。
变构剂与酶非共价结合
7、何谓酶的共价修饰？
有何特点？
共价修饰（covalentmodification）：
在其他酶的催化下，酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发生可逆的共价结合，从而改变酶的活性，此过程称为共价修饰。
共价修饰调节的特点：
1、受共价修饰的酶存在有（高）活性和无（低）活性两种形式；
2、共价键修饰3、放大效应（有瀑布或级联效应）
4、磷酸化消耗ATP
5、是体内经济、有效的快速调节方式。
第六章
1、维生素的概念与分类
维生素（vitamin）是参与生物生长发育和代谢所必需的一类微量有机物质。
分类：
依据——溶解性
水溶性VVB族、VC
脂溶性VVA、VD、VE、VK
2、维生素与辅酶的关系
维生素中的水溶性V可作为辅酶，参与酶催化反应中底物基团的转移调节代谢。
3、了解常见的维生素缺乏症
名称
别名
辅酶
生理功能
来源
缺乏病
VB1
1.硫胺素
2.抗脚气病维生素
TPP
1.参与α-酮酸氧化脱羧反应
2.抑制胆碱酯酶活性，保护神经正常传导
酵母、谷类种子的外皮和胚芽
脚气病（多发性神经炎）
VB2
核黄素
FMN
FAD
H载体
小麦、青菜、黄豆、蛋黄、肝等
口角炎、唇炎、舌炎等
VB5
泛酸
遍多酸
HSCoA
酰基载体
动植物细胞中均含有
人类未发现缺乏病
VB3
维生素PP
1.尼克酸/尼克酰胺
2.抗癞皮病维生素
NAD
NADP
H载体
肉类、谷物、花生等，人体可自色氨酸转变一部分
癞皮病
VB6
吡多醇/吡多醛/吡多胺
磷酸吡多醛和磷酸吡多胺
参与氨基酸转氨、脱羧和消旋作用
酵母、蛋黄、肝、谷类等，肠道细菌可合成
人类未发现典型缺乏病
生物素
VH
羧化酶的辅酶，参与体内二氧化碳的固定
动植物组织均含有，肠道细菌可合成
人类未发现典型缺乏病
VB9
叶酸
THFA
一碳基团载体
青菜、肝、酵母等
恶性贫血
名称
别名
辅酶
生理功能
来源
缺乏病
VB12
钴胺素
5’-脱氧腺苷钴胺素
1.参与某些变位反应
2.甲基的转移
肝、肉、鱼等，肠道细菌可合成
恶性贫血
Vc
1.抗坏血酸
2.抗坏血病维生素
1.氧化还原作用
2.作为脯氨酸羟化酶的辅酶，促进细胞间质形成
新鲜水果、蔬菜，特别是番茄、柑橘、鲜枣等
坏血病
硫辛酸
1.酰基载体
2.H载体
肝、酵母等
人类未见缺乏病
VA
1.视黄醇
2.抗干眼病维生素
1.合成视紫红质
2.维持上皮组织的结构完整
3.促进生长发育
肝、蛋黄、鱼肝油、胡萝卜、青菜、玉米等
1.夜盲症
2.上皮组织角质化
3.生长发育受阻
VD
抗佝偻病维生素
促进骨骼正常发育
鱼肝油、肝、蛋黄、奶等
佝偻病、软骨病
VE
生育酚
1.维持生殖机能
2.抗氧化作用
麦胚油及其他植物油
人类未发现缺乏病
VK
凝血维生素
1.促进合成凝血酶原
2.与肝脏合成凝血因子Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ等有关
肝、菠菜等，肠道细菌可合成
成人一般不缺乏，新生儿及胆管阻塞患者，表现凝血时间过长
第七章
名词解释
糖酵解：
1葡萄糖分解产生2丙酮酸，并伴随ATP生成的过程。
三羧酸循环：
由乙酰CoA与草酰乙酸缩合成柠檬酸开始，经反复脱氢、脱羧再生成草酰乙酸的循环反应过程。
又称柠檬酸循环和Krebs循环。
磷酸戊糖途径：
磷酸戊糖为代表性中间产物，糖酵解在磷酸己糖处分生出的新途径。
糖异生作用：
由非糖物质转变为葡萄糖或糖原的过程称为糖异生。
糖原的合成作用：
由葡萄糖经活化、缩合、分支三个阶段生成糖原的作用。
糖原异生：
非糖物质（如某些氨基酸及乳酸、丙酮酸和甘油）在肝脏和肾脏等器官中某些特有酶的催化下转变成糖原的过程。
问答题
1.掌握糖酵解过程的能量计算。
糖酵解1G→2ATP+2NADH+2H++2丙酮酸=2+2×3=8ATP
2.三羧酸酸循环能量计算及其生物学意义。
三羧酸循环2丙酮酸→30ATP+6CO2+4H2O=38ATP
生物学意义：
㈠三羧酸循环是各种好氧生物体内最主要的产能途径！
也是脂类、蛋白质彻底分解的共同途径！
㈡中间酸是合成其他化合物的碳骨架—百宝库。
3.淀粉是通过什么途径可以一步一步降解为CO2和水，及其反应部位。
淀粉在口腔中分解为糊精和麦芽糖，在小肠中分解为葡萄糖，在线粒体中生成CO2和水。
4.磷酸戊糖途径的生物学意义。
Ⅰ.产物1—磷酸核糖用于DNA、RNA的合成；
—木酮糖参与光合作用固定CO2；
—各种单糖用于合成各类多糖；
Ⅱ.产物2—提供NADPH作为供氢体参与多种代谢反应。
不通过糖酵解，供能；
NADPH是体内许多合成代谢的供氢体；NADPH用于维持谷胱甘肽的还原状态。
5.糖原的合成过程。
糖原合成的反应过程可分为三个阶段：
第一阶段活化：
由葡萄糖生成UDPG（uridinediphosphateglucose），是一耗能过程。
⑴磷酸化：
己糖激酶（葡萄糖激酶）
G+ATPG-6-P+ADP
第三阶段分支：
当直链长度达12个葡萄糖残基以上时，在分支酶（branchingenzyme）的催化下，将距末端6～7个葡萄糖残基组成的寡糖链由α-1,4-糖苷键转变为α-1,6-糖苷键，使糖原出现分支。
第八章
名词解释：
生物氧化：
营养物质在生物体内经氧化分解，最终生成CO2和H2O，并释放能量的过程称生物氧化。
氧化磷酸化：
氧化磷酸化（oxidativephosphorylation）是指在呼吸链电子传递过程中偶联ADP磷酸化，生成ATP，又称为偶联磷酸化。
底物水平磷酸化：
底物水平磷酸化（substratelevelphos-phorylation）是底物分子内部能量重新分布，生成高能键，使ADP磷酸化生成ATP的过程。
呼吸链：
代谢物脱下的成对氢原子（2H）通过多种酶和辅酶所催化的连锁反应逐步传递，最终与氧结合生成水，这一系列酶和辅酶称为呼吸链（respiratorychain）又称电子传递链（electrontransferchain）。
磷氧比（P/O）：
是指物质氧化时，每消耗1摩尔氧原子所消耗的无机磷酸的摩尔数，即生成ATP的摩尔数。
苹果酸-天门冬氨酸穿梭：
α-磷酸甘油穿梭：
1、物质在体内氧化和体外氧化有哪些异同点？
生物氧化与体外氧化的相同点：
生物氧化中物质的氧化方式有加氧、脱氢、失电子，遵循氧化还原反应的一般规律。
物质在体内外氧化时所消耗的氧量、最终产物（CO2，H2O）和释放能量均相同。
生物氧化与体外氧化的不同点：
2、写出NADH呼吸链和琥珀酸呼吸链的顺序。
NADH氧化呼吸链：
琥珀酸呼吸链：
3、一对氢经NADH呼吸链氧化能生成多少ATP？
3mol
一对氢经琥珀酸呼吸链氧化能生成多少ATP？
2mol
4、影响氧化磷酸化的抑制剂有哪几种？
.呼吸链抑制剂
阻断呼吸链中某些部位电子传递，细胞呼吸停止。
.解偶联剂
使氧化与磷酸化偶联过程脱离。
常见的解偶联剂为二硝基苯酚（DNP）。
物质能氧化，但不能生成ATP。
.氧化磷酸化抑制剂
对电子传递及ADP磷酸化均有抑制作用。
5、体内生成ATP的方式有几种？
氧化磷酸化
底物水平磷酸化
6、氰化物和一氧化碳为什麽能引起窒息死亡？
原理何在？
7、写出NADH呼吸链氧化磷酸化的偶联部位。
第9章
什么是脂？
答案：
由脂肪酸与醇作用生成的酯及其衍生物，包括三酰甘油（脂肪）、磷脂、糖脂、类固醇及类胡萝卜素等。
脂肪酸：
4个C以上的长链一元羧酸。
醇：
甘油、鞘氨醇、高级一元醇和固醇等。
脂类的生物功能？
答案：
长期储备能源物质、防护、膜成分、维生素、激素成分。
脂类水解的产物是什么？
答案：
脂肪酸、醇（甘油、鞘氨醇、固醇、脂肪醇、氨基醇）、磷酸等。
提问：
影响水解的因素有哪些呢？
生物因素——酶的种类及其影响因素
本身因素——溶解度及其影响因素（如温度、pH）
名词解释：
脂肪动员:
储存在脂肪细胞中的脂肪，被脂肪酶逐步水解为游离脂肪酸和甘油，并释放入血以供其它组织细胞氧化利用，该过程称为脂肪动员.
脂肪酸的β氧化:
脂酸在线粒体内进行的氧化分解是从脂酰基羧基端-碳原子开始的，故称为-氧化。
酮体:
酮体是脂酸在肝分解氧化时特有的中间代谢产物。
是乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮三者的统称。
问答题：
1、脂肪动员产物的去向？
甘油直接运至肝、肾、肠等组织。
主要在肝、肾进行糖异生。
脂肪细胞及骨骼肌等组织因甘油激酶活性很低，故不能很好利用甘油。
2、脂肪酸β氧化的部位、步骤、能量计算（例软脂酸、硬脂酸）？
细胞部位——原核生物细胞质、各种真核生物线粒体基质内
β氧化的步骤：
脂酸的活化——脂酰CoA的生成
脂酰CoA进入线粒体
脂酸的-氧化
脂酸氧化的能量生成
计算：
软脂酸为例
7×2+7×3+8×12-2=129
1分子软脂酸氧化共生成129分子ATP。
3、软脂酸的合成部位及合成过程？
细胞部位—细胞质
肝、肾、脑、肺、乳腺及脂肪等组织的胞液中。
肝是主要场所。
过程：
a、转运乙酰CoA：
主要原料，从线粒体进入胞液
b、合成软脂酸
4、脂肪酸合成与β氧化的区别？
β-氧化
脂肪酸合成
部位
线粒体内
胞浆
中间产物
酯酰CoA
与ACP上的SH连接
酶
独立的酶
多酶复合体
循环的单位
乙酰CoA
丙二酰CoA
主要辅酶
NAD+&FAD
NADPH
能量变化（软脂酸）
产生129ATP
消耗7个ATP及14个NADPH
第10章名词解释：
氮平衡:
体内蛋白质的合成与分解处于动态平衡中，故每日氮的摄入量与排出量也维持着动态平衡，这种动态平衡就称为氮平衡（nitrogenbalance）。
必需氨基酸:
必需氨基酸一共有八种：
赖氨酸（Lys）、色氨酸（Trp）、苯丙氨酸（Phe）、蛋氨酸（Met）、苏氨酸（Thr）、亮氨酸（Leu）、异亮氨酸（Ile）、缬氨酸（Val）。
半必需氨基酸:
由于酪氨酸在体内需由苯丙氨酸为原料来合成，半胱氨酸必需以蛋氨酸为原料来合成，故这两种氨基酸被称为半必需氨基酸。
氨中毒:
若外环境NH3大量进入细胞，或细胞内NH3大量积累
生糖氨基酸:
生糖氨基酸：
在体内能转变成糖的氨基酸。
生酮氨基酸：
在体内能转变成酮体的氨基酸。
有Leu和Lys。
思考题：
1.胃肠道中的蛋白质如何降解的？
胃蛋白酶水解食物蛋白质为多肽、寡肽及少量氨基酸。
肠中的消化：
有两种类型的酶：
⑴肽链外切酶：
如羧肽酶A、羧肽酶B、氨基肽酶、二肽酶等；
⑵肽链内切酶：
如胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶等。
蛋白质在肠中
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