药物代谢动力学实验讲义.docx
《药物代谢动力学实验讲义.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药物代谢动力学实验讲义.docx（12页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
药物代谢动力学实验讲义
实验一药酶诱导剂及抑制剂对
戊巴比妥钠催眠作用的影响
【目的】
以戊巴比妥钠催眠时间作为肝药酶体活性指标，观察苯巴比妥及氯霉素对戊巴比妥钠催眠作用的影响，从而了解它们对肝药酶的诱导及抑制作用。
【原理】
苯巴比妥为肝药酶诱导剂，可诱导肝药酶活性，使戊巴比妥钠在肝微粒体的氧化代加速，药物浓度降低，表现为戊巴比妥钠药理作用减弱，即催眠潜伏期延长，睡眠持续时间缩短。
而氯霉素则为肝药酶抑制剂，能抑制肝药酶活性，导致戊巴比妥钠药理作用增强，即催眠潜伏期缩短，睡眠持续时间延长。
【动物】
小白鼠8只，18~22g
【药品】
生理盐水、0.75%苯巴比妥钠溶液、0.5%氯霉素溶液、0.5%戊巴比妥钠溶液
【器材】
天平、鼠笼、秒表、注射器1ml×4、5号针头×4
【方法与步骤】
一、药酶诱导剂对药物作用的影响
1、取小鼠4只，随机分为甲、乙两组。
甲组小鼠腹腔注射0.75%苯巴比妥钠溶液0.1ml/10g，乙组小鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g，每天1次，共2天。
2、于第三天，给各小鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g，观察给药后小鼠的反应。
记录给药时间、翻正反射消失和恢复的时间，计算戊巴比妥钠催眠潜伏期及睡眠持续时间。
二、药酶抑制剂对药物作用的影响
1、取小鼠4只，随机分为甲、乙两组。
甲组小鼠腹腔注射0.5%氯霉素溶液0.1ml/10g；乙组小鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g。
2、30分钟后，给各小鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g，观察给药后小鼠的反应。
记录给药时间、翻正反射消失和恢复的时间，计算戊巴比妥钠催眠潜伏期及睡眠持续时间。
【统计与处理】
以全班结果（睡眠持续时间，分）作分组t检验，检验用药组与对照组有无显著性差异。
（参见“数理统计在药理学实验中的应用”）
【注意事项】
1、催眠潜伏期为开始给药到动物翻正反射消失的间隔时间，睡眠持续时间为翻正反射消失至恢复的间隔时间。
2、本实验过程中，室温不宜低于20C，否则戊巴比妥钠代减慢，使动物不易醒。
3、氯霉素溶液有结晶析出时可在水浴中加热溶解。
4、吸取氯霉素溶液的注射器应预先干燥，否则易结晶堵塞针头。
【思考题】
1、何谓肝药酶诱导剂与抑制剂？
2、试从理论上解释苯巴比妥及氯霉素对戊巴比妥钠睡眠时间的影响。
实验二家兔血浆中水酸钠
浓度测定和药代动力学参数测定
【实验目的】
1.以水酸钠为例了解血浆药物浓度随时间变化的时量关系。
2.了解药代动力学参数的临床意义。
【实验材料】
1.动物：
家兔1只，雌雄不限，体重（2.5+0.5）kg。
2.器材：
试管5支、离心管3支、试管架、小玻棒、l0ml吸管、注射器（1ml、5ml、l0ml）、手术器械、动脉插管、动脉夹、721分光光度计、离心机
3.试剂和药品：
25%氨基甲酸乙酯、10%及0.02%水酸钠溶液、10%三氯醋酸溶液、10%三氯化铁溶液。
【实验步骤】
1.实验准备：
取离心管3支及试管5支，编号备用，麻醉（乌拉坦4ml/Kg），1～3号离心管及4、5号试管中分别加入10%三氯醋酸7ml
2.手术：
颈动脉取血2ml,放入1号离心管
3.给药：
耳缘静脉注入10%水酸钠，150mg/Kg，取血（5,35min分别取血2ml放入2、3号离心管，4、5试管分别加入蒸馏水及0.02%水酸钠2ml）
4.离心：
2000r/分，5min，取上清液6ml，加入10%三氯化铁（12滴），比色（5min后，波长510nm），计算结果。
【注意事项】
1.注意颈总动脉插管术。
2．取血时，要先用0.1%肝素润湿注射器和针头，取血后用肝素封管，避免血液凝固，每次取出血第1ml弃去不用，再吸取2ml置于离心管。
3.给药时间及给药后取血时间要记清。
4.取上清夜时，要先将上清液倒入编号相对应的试管中，再吸取所需的ml数，以免吸入沉淀影响比色，注意吸管要对号使用。
5.计算Vd,CL时注意单位换算。
【实验结果】
管号光密度（X）水酸钠浓度（Y）g/100ml
标准管（5号）X0.02
给药后5min（2号）X1C1
给药后35min（3号）X2C2
计算：
1、半衰期（t1/2）:
K=y/x
C1=kx1,C2=kx2（单位:
g/100ml）
t1/2=
（单位：
min）
注:
k为清除速率常数，y为0.02g/100m1,x为标准管即5号管的光密度值;
C1,C2分别为给药后5、35分钟取血时的血药浓度;△t为两次取血的时间差。
2、表观分布容积（Vd）：
C0=C1×lg-1（0.301×t1/t1/2）（单位：
g/100ml）
Vd=D0/C0（单位：
L/Kg）
注：
D0为用药初始剂量（150mg/Kg），t1为用药后到第一次取血的时间间隔
3、清除率（CL）：
CL=0.693/t1/2×Vd（单位：
ml/min.Kg）
实验三氨茶碱的血药浓度测定及药动学研究
【实验目的】
掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌握血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌握二房室动力学模型的参数计算方法。
用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解。
【实验原理】
1.氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成。
在酸性条件下,可用有机溶剂从血清中提取出茶碱,再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出。
测量λ274和λ298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，A298为本底的吸光度），ΔA=A274-A298。
2.氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。
时量曲线呈二房室动力学模型。
3.房室模型是抽象的数学模型，它的划分与解剖学部位或生理学功能无关。
药物转运速率相同或相近的部位可划分为同一房室。
房室模型可以分为一室模型、二室模型、多室模型。
大多数药物在体的转运和分布符合二室模型。
即药物静脉注射入血后，首先快速进入血流量大的组织，如心、肝、肾、肺、脑等，然后缓慢地向血流量小的组织，如脂肪组织、静止的肌肉组织等转移。
【实验材料】
1、动物
家兔1只，雌雄不限，体重（2.5+0.5）kg
2、药品
氨茶碱标准液
3、试剂
0.1mol/LHCl
0.1mol/LNaOH
异丙醇：
氯仿抽提液（5:
95）。
4、仪器
754型紫外分光光度计
液体涡旋混和器
数学坐标纸一
半对数坐标纸一。
【实验方法】
1动物实验部分
1.1取健康家兔1只，称重，将家兔置于兔台。
1.2在家兔一耳缘注射部位去毛、热敷和消毒，待血管扩后，以左手拇指与食指压住静脉耳根端，使静脉充盈，给药前用12号针头自耳静脉取血1-1.5ml，7号针头平行刺入静脉，抽动针管，见有回血即可推注。
对其静脉注射氨茶碱15mg/kg。
1.3另一耳用锐利刀片切割取血。
分别在给氨茶碱后5、10、20、30、60、120、180、300、420min取血。
1.4分离血清，各管均取血清0.5ml于15ml试管中，加0.1mol/L盐酸0.2ml、抽提液5ml，振摇混合，2500r/min离心10min。
2血药浓度测定（紫外分光光度法）
2.1吸取下层氯仿液4ml置另一试管中，加入0.1mol/LNaOH溶液4ml，振摇混匀，2500r/min离心10min。
2.2吸取上层碱液，以0.1mol/LNaOH溶液4ml作参比，振摇混匀，2500r/min离心10min。
测定其在λ274和λ298处的吸收度（A274和A298），计算△A。
3制作茶碱标准曲线：
取5支试管，依次加入茶碱标准液20、40、60、80、100µl，各加入0.1mol/LNaOH溶液4ml，终浓度依次为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5µg/ml，测定各管的A274和A298，计算△A。
以茶碱浓度为横坐标，△A为纵坐标描点绘图，用Excel软件求直线回归方程，即为茶碱标准曲线的直线方程（图示）。
4.将测得血清样品的△A代入标准曲线的方程，求得相应的C，C×10即为茶碱的血药浓度。
以时间为横坐标，浓度对数为纵坐标，用CAPP软件描点做图，判断氨茶碱在体代的房室模型。
时间（min）
ΔA
C（µg/ml）
血药浓度（µg/ml）
5
10
20
30
60
120
240
480
【注意事项】
1.紫外分光光度计使用前需预热30min并激发氢灯。
2.振摇混匀药液时防止溅出并准确加样。
3.样品离心前需配平。
4.测量时若更换波长，必须重新调节0和100％。
【讨论】
1.氨茶碱的时量曲线呈几房室模型？
为什么？
2.为何要测两个波长下茶碱的吸光度并取其差值？
3.试述药动学参数V1、Vd、t1/2α、t1/2β、K10、K12、K21、Cl、AUC的含义。
实验四体液pH对水酸钠排泄的影响
【实验目的】
1．学习尿液中水酸的检测方法，掌握体液pH对药物排泄的影响及其临床意义。
2．熟悉大鼠代笼的使用，巩固大鼠的各种给药方法。
【实验原理】
水酸钠经肾脏排泄物为水酸，尿液pH对水酸排泄影响非常大，当尿液呈酸性时仅排泄5%而尿液呈碱性时则排泄大约85%。
尿液中的水酸遇到三氯化铁后可生成紫色络合物，根据反应后溶液紫色深浅可以定性分析水酸钠排泄量的多少。
【实验材料】
1．动物大白鼠，雌雄不限，200～300g。
2．器材大白鼠代笼两个，天平一个，棉手套一只，大鼠灌胃器两个，5毫升注射器两个，6号针头两个，30ml量筒1个，50ml注射器2个。
3．药品5%碳酸氢钠溶液，15%氯化氨溶液，（单盲法配制并编号为A、B），2%水酸钠溶液，1%三氯化铁溶液，5%葡萄糖生理盐水，蒸馏水，苦味酸，1%速尿。
【实验方法】
1．取大白鼠两只称重并编号。
2．给其中一只按0.5ml/100g灌胃A药液，给另一只以同样剂量灌胃B药液。
3．30分钟后给两只大鼠灌胃5%葡萄糖生理盐水2ml/100g。
4．30分钟后，分别给两只大鼠腹腔注射2%水酸钠溶液1ml/100g及1%速尿0.2ml/100g。
5．收集各鼠30分钟尿液，将收集的尿液分别用蒸馏水稀释到30ml，加1%三氯化铁5ml，比较紫色深浅。
【实验结果】
表2-1体液pH值对水酸钠排泄的影响
鼠号体重（g）药物尿液反应后颜色结果分析
1
2
A
B
【注意事项】
1．实验步骤进行到4后，再将集尿笼插入代笼中，以免收集尿液前将集尿笼污染。
2．实验用烧杯、量筒、注射器、集尿笼应清洗干净，否则影响反应pH，导致实验结果不准确。
【思考题】
1.药物的排泄途径有哪些？
影响药物排泄的因素有哪些？
2.体液pH还对药物的哪些体过程有影响？
有何临床意义？
3.实验中给予碳酸氢钠、氯化氨、葡萄糖生理盐水、速尿等药物的目的各是什么？
4.根据反应后溶液紫色深浅为什么可以定性分析水酸钠排泄量的多少？
写出水酸与三氯化铁的反应式。
实验五酚磺酞药代动力学参数的测定
【实验目的】
测定PSP在家兔体药代动力学参数。
【实验原理】
酚磺酞（Phenolsulfonphthalein，PSP），又名酚红。
静脉注射后，不在体代，主要经肾近曲小管分泌排泄，属于一室模型一级动力学消除。
PSP在碱性环境中变为红色，可用可见分光光度计于波长560nm处进行定量测定。
【实验材料】
1、动物
家兔1只，2.5～3.0kg，雌雄不限
2、药品
0.6%PSP溶液、PSP标准溶液（0.5、1、2μmol/L）、3%戊巴比妥溶液、稀释液（0.9%NaCl29ml+1mol/LNaOH1ml）
3、器材
兔台、手术剪刀×2、止血钳×2、眼科镊子×2、注射器（5ml×1、2ml×1）、抗凝试管×5、试管架、离心机、分光光度计、比色杯（0.5ml×5）、加液器（1ml×1，250μl×1）、烧杯、酒精棉球、干棉球、绳×4、线
【实验步骤】
1、家兔称重，用3％戊巴比妥（1ml/kg）耳缘静脉麻醉，仰卧，固定于兔板上，切开颈部皮肤，暴露颈浅静脉，从其下缘穿一线，备取血时用。
2、用1ml干燥注射器从颈浅静脉取血约1ml，然后由耳缘静脉注射0.6％PSP溶液，按0.4ml/kg给药，注射后分别在5、10、15、25分钟各取血约1ml，置于备好的抗凝试管，离心（2000转/分）10分钟。
3、PSP标准液的平均吸收系数K的测定：
取PSP标准液0.5、1、2μmol/L及蒸馏水各1.55ml，再各加入1mol/LNaOH0.05ml，于波长560nm处比色，测得吸收度（A），并计算出平均吸收系数（K）值。
4、取血浆样品0.1ml，放入0.5cm的比色杯，加入稀释液1.5ml摇匀（稀释了16倍），于560nm处比色，记录其吸收度。
5、PSP血浆浓度计算：
（PSP的分子量为354，比色时取血浆0.1ml，稀释了16倍）
6、药代动力学参数计算：
（1）计算5、10、15及25分钟时PSP的血浆浓度（Ct）
（2）以时间（t）与血浆浓度（Ct）进行直线回归，求出a、b、r值
（3）计算药代动力学参数：
消除速率常数Ke（min-1），血浆半衰期t1/2（min），表观分布容积Vd（Lkg-1），总清除率Cl（Lkg-1min-1）。
计算公式如下：
（4）
【注意事项】
1、本实验系定量实验，故每次采血或给药量一定要准确。
每次取血样时均应用干净的取样器，以防止各样品之间浓度混杂。
2、顺利地采集足够量的血样是保证本实验成功的关键，故应具备娴熟的采血技术。
升级会员 