病理科优化制片及染色流程Word格式文档下载.docx
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将蜡片附贴在另外2/3的中心位置。
8、切片放入62℃烤箱中约30~60分钟烤片,以免发生脱片。
为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。
比较常用的挂胶片有明胶片,APES胶片和多聚赖氨酸胶片等,免疫组化染色尤需要使用胶片。
病理科优化冷冻切片
1、选取适当的新鲜组织块,放在冷冻托上,放入冷冻切片机中冻透。
2、修块、切片。
冷冻切片通常厚6~8μm并把切片贴于载玻片上。
3、在酒精灯上轻烤片刻,放入固定液中2分钟。
4、然后快速HE染色(可在酒精灯上加热进行,以缩短时间)。
5、封片、贴标签后,送诊断室(15分钟之内完成)。
石蜡切片常见问题及优化解决方法
问题
原因
解决方法
组织发脆
脱水、透明、浸蜡时间过长、温度过高,或与组织本身质地有关
在切片时,边切边用嘴向蜡片吹气,可能会好些
切片卷起
刀不锋利,或刀锋在另一面,或刀角度过大,切片
太厚等等
更换切片刀口,调整刀角度在8到10之间,调整切片厚度在3-5微米左右
蜡片弯曲
刀锋不均,切片刀未磨直,切片刀与蜡块不平行
将刀安放平整,调整蜡块切面与刀架平行
厚薄不均
刀、刀座及蜡块未夹紧,组织太硬,或切片机主轴太向前,或切片机已磨损。
夹紧刀架,并拧紧相关螺丝,摆放切片机主轴在合适位置,找相关专业人员对切片机进行维护,调整组织脱水程序以对组织合理脱水
切片出现裂痕
刀有缺口,石蜡内有杂质,组织内有钙化、骨片或有线结,也可能会有棉纸纤维等
更换切片刀口,将石蜡过滤后使用,清除蜡块中的异物,对于骨或者钙化物先脱钙后再切片
切片不连片,切不下片,切片很厚,或者切片后蜡块发白,内陷
组织脱水不佳
先将蜡块溶解,取出组织,放入加热水浴的丙酮内(80℃),30~60分钟,再进行透明浸蜡包埋切片
HE染色操作常规流程
切好的片子应在60~70℃左右的烤箱中烘烤30分钟以上才能进行染色。
HE染色手工程序:
脱蜡
1、二甲苯Ⅰ(AR)5分钟
2、二甲苯Ⅱ(AR)5分钟
3、100%酒精Ⅰ(AR、无水乙醇)1分钟
4、100%酒精Ⅱ(AR、无水乙醇)1分钟
5、95%酒精(工业酒精或医用酒精)1分钟
6、80%酒精(工业酒精或医用酒精)1分钟
7、自来水浸洗1分钟
以上3~7称为进水过程。
染色
1、苏木素染液6分钟
2、水冼1分钟
3、0.5-1%盐酸酒精分化片刻(上下三次颜色由蓝变红)
4、自来水冲冼15分钟以上
(然后95%酒精片刻,主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精,此步可免)
5、1%伊红酒精浸染1~2分钟
6、水冼1分钟
脱水、透明、封固
95%酒精Ⅰ1分钟
95%酒精Ⅱ1分钟
100%酒精Ⅰ1分钟
100%酒精Ⅱ1分钟
石炭酸二甲苯(1:
3)10秒钟
以上称为脱水。
二甲苯Ⅰ透明1分钟
取出后用中性树胶(上海产,预先用二甲苯溶解,粘稠度适中即可)封固。
染色结果:
核:
蓝黑色
胞浆:
不同程度的粉红色
肌纤维:
较深的粉红色
胶元纤维:
淡红色
红细胞:
桔红色。
病理染色注意事项
1、配制染液和其他溶液时,要根据需要和染液的保存期限决定配制数量。
2、需要保存再用的染液和试剂,必须贴上标签,注明名称、浓度、配制日期和用处等,妥善存放。
经常使用的染液和试剂要经常过滤或更换新液。
3、染色器皿须洗涤干净。
必要时用酸洗液处理。
将玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天,自来水冲洗数小时,再用洗涤剂刷洗,自来水冲洗数小时,蒸馏水冲洗后备用。
(酸洗液配制:
重铬酸钾300g,硫酸300ml,蒸馏水(可用自来水)3000ml。
先将重铬酸钾溶解在蒸馏水中,徐徐加入硫酸。
注意:
加酸时必须缓慢!
并用玻璃棒不停地搅拌!
)。
5、染色是利用染料的不同作用,使组织与染料以不同方式进行结合。
常规染色是苏木精和伊红染色(简称HE染色)。
特殊染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。
冷冻切片也用HE染色。
少量或单个冷冻切片时手工操作比较方便。
冷冻切片染染色要求在短时间(10分钟)内完成,在保证质量的前提下!
!
越快越好。
HE染色常见问题及优化解决方法
染色发白
二甲苯脱蜡时间不够,有蜡残留
延长脱蜡时间或更换二甲苯
染色发灰
组织固定脱水不佳或者染液配制PH不符
改进组织固定脱水程序或者改进染液配方
着色不均匀
染液太少或者分布不均
增加染液量或在染液中加入甘油等增强液体亲和力
染色偏蓝
苏木素染色时间过久或者分化不足
减少苏木素染色时间或者延长分化时间
染色偏红
伊红染色时间过长或者苏木素染色不足
改进苏木素染色或者减少伊红染色时间
核着色欠佳
加强组织固定脱水,将切片用生物穿透剂进行处理以利于苏木素着色
病理切片质量控制
1、诊断人员在接到当日切片并验收后,检查、核实所制作的组织学切片的数量及质量,在技术室送片记录本或工作流程单上签字。
如发现切片数与取材数不符,应及时与技术人员联系,进行核查。
对当天质量不好的切片做记录,指明技术上存在的缺陷,并于当天交技术室。
2、技术室收到切片质量记录,要求在24小时内答复,并立即纠正原不足之处。
另外,科内质量管理小组按分工,每季度复查切片一次,查出问题要采取适当措施于以纠正,并注意落实情况。
3、切片是技术含量很高的步骤,同一蜡块,用同一台切片机,同一把刀,不同的操作者会切出不同质量的片子。
所以要求:
切片刀必须锋利;
切片厚度3~5μm,切片完整,无污染,无皱褶,无刀痕。
组织片应贴附在标签外,剩余玻片的中间。
4、胃镜、纤维支气管镜、穿刺等小活检组织切片须作连续性切片,数量不得少于6张(6~20张)。
5、切片、捞片时应严格分块完成,切忌在水面上残留上一块的碎片,以杜绝污染。
6、贴(裱)片时,必须注意蜡块编号与载玻片上的编号完全一致,杜绝错误。
7、切好的白片要进行烤片化蜡。
烤片温度应在60~62℃左右,时间不能少于20分钟或用电吹风吹。
8、染色必须按程序操作,染色试剂必须及时过虑或更换。
HE染色适中,核、浆分化对比清晰,避免过红或过蓝(注意防止苏木素渣子和伊红碎片出现)。
9、切片封固前必须经酒精充分脱水,二甲苯透明,湿封。
不得用温箱烤干或电吹风吹得过分干燥,再封片。
10、封片时不得有气泡,不得有树胶外溢。
11、标签贴于玻片一侧,编号字迹必须清楚、整齐,且不易褪色。
12、染好切片后贴标签时,编号要与玻片编号一致,杜绝错误。
13、制片工作一般应在12~24小时内完成。
切片完成后交付医师时,必须按照记录当面清点。