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加稀盐酸，沉淀分解，苯甲酸游离，形成白色沉淀

取供试品，置干燥试管中，加硫酸后，加热，不炭化，但析出苯甲酸，在试管内壁凝结成白色升华物。

3.芳香第一胺的鉴别（如磺胺嘧啶）：

芳香第一胺类在酸性条件下遇亚硝酸钠发生重氮化反应，生成重氮盐；

重氮盐与碱性β-萘酚形成偶氮染料（橙色～猩红色）。

4.硫色素反应（维生素B1片）：

硫色素反应为维生素B1的专属反应。

维生素B1在碱性溶液中，易被铁氰化钾氧化成硫色素，后者易溶于正丁醇中，显强烈的蓝色荧光。

加酸荧光消失，加碱荧光恢复。

取本品细粉适量（约相当于维生素B15mg），加水搅拌，滤过，滤液蒸干后，加氢氧化钠试液2.5ml溶解后，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光；

加酸使成酸性，荧光即消失；

再加碱使成碱性，荧光又显出。

课后小结

实验内容：

药物鉴别试验的操作注意事项有哪些

作业

实训报告（检验原始记录和报告书）

主要参考资料

1、苏勤主编.药物质量检验技术.北京：

中国医药科技出版社，2003

2、国家药典委员会编.中华人民共和国药典（2010年版二部）.北京:

化学工业出版社等。

3、中国药品检验标准操作规范与药品检验仪器操作规程。

4、安登魁.药物分析.济南出版社,1992

备注

实践二一般杂质的检查

1.掌握氯化物等一般杂质检查的基本原理、操作方法及杂质限量计算。

2．掌握对照法和限量检查法。

能够根据《中国药典》的规定对常见药物进行杂质的检查，能独立完成氯化物等一般杂质的检验项目，详细记录并处理结果，得出结论，评价药物质量。

1.氯化物的检查2.硫酸盐的检查3.重金属的检查

1.铁盐的检查

2.重金属的检查

3.限量的计算

2.正确使用纳氏比色管。

3．掌握对照法和限量检查法。

（一）氯化物检查法

氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色沉淀浑浊。

Cl-+Ag+→AgCl↓

（二）硫酸盐检查法

药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡的白色浑浊。

SO42-＋Ba2＋→BaSO4↓

（三）铁盐检查法

铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准溶液用同法处理后进行比色。

Fe3＋＋6SCN-（酸性条件下）→[Fe（SCN）6]3-（红色）

（四）重金属检查法

硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）溶液中水解，产生硫化氢，与微量重金属离子作用，生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，以控制供试品溶液中混入的重金属量。

CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2S

Pb2＋+H2S→PbS↓

三、实验材料和仪器

供试品葡萄糖。

标准液标准氯化钠溶液，标准硫酸盐溶液，标准铁溶液，标准铅溶液，标准比色液和比浊液。

试剂氯化钡，盐酸，硝酸，硫酸，硫代乙酰胺，硝酸银，硫氰酸铵。

仪器纳氏比色管（50ml、25ml），台秤，电热套。

四、实验步骤（70分钟）

（一）、氯化物的检查

1、供试液的配制取本品0.60g，置50m1纳氏比色管中，加水溶解使成约25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使遇pH试纸显中性），再加稀硝酸10ml（溶液如不澄清，应滤过），加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。

2、对照液的配制另取标准氯化钠溶液（10μg／ml）6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。

3、于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min。

4、同置黑色背景上，从比色管上方向下观察比较，比较供试溶液和对照品液所显乳光。

５、结果判断

供试溶液所显乳光不超过对照溶液，判为符合规定；

超过对照溶液则判为不符合规定。

６、限量计算

杂质限量＝

或

L=

（二）、硫酸盐的检查

1、供试液的配制取葡萄糖2.0g，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；

溶液如不澄清，应滤过；

置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml、摇匀，即得供试溶液。

2、对照液的配制另取标准硫酸钾溶液（100μgSO42-/ml）2.0ml，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液。

3、于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%的氯化钡溶液5ml，用水稀释成50ml，充分摇匀，放置10分钟，

4、同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较。

供试溶液和对照溶液所显乳光。

5、结果判断

方法同氯化物的检查

（三）、铁盐的检查

1、供试液的配制取葡萄糖2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，转移至50ml纳氏比色管中，加水稀释使成45ml。

2、对照液的配制另取标准铁溶液2.0ml，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，转移至50ml纳氏比色管中，加水稀释使成45ml。

3、于供试溶液与对照溶液中，加硫氰酸铵溶液（30→100）3ml，摇匀。

4、立即比较供试溶液与对照溶液深浅。

供试溶液所显顏色超过对照溶液，判为不符合规定；

比对照溶液颜色浅或持平判为符合规定。

（四）、重金属的检查

1、供试液的配制取25ml纳氏比色管一支，加标准铅溶液2ml，加醋酸盐缓冲液2ml，加水稀释成25ml。

2、对照液的配制另取25ml纳氏比色管一支，加入本品4.0g，再加水23ml溶解，加醋酸盐缓冲液2ml，若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，使之与乙管一致。

3、硫代乙酸胺试液的制备　　称取硫代乙酸胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。

临用前取混合液5.0ml加上述硫代乙酰酰胺溶液1.0ml，置水浴加热20s，冷却，立即使用。

4、再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，

5、同置白纸上，自上向下透视，比较供试品溶液与标准铅溶液显出的颜色。

6、结果判断

供试品溶液所显颜色深于标准溶液为不符合规定；

浅于或与标准溶液持平为符合。

7、限量计算方法同氯化物的检查

氯化物、重金属检查中的操作注意事项有哪些

1.葡萄糖的检查项目中哪些属于一般杂质？

哪些属于特殊杂质？

试述它们的来源及检查意义。

2.如何正确选用本次实验中的试剂、用具及仪器？

3.检验记录及检验报告

药物检验技术实训教案

实践课2学时

实践三特殊杂质的检查

熟悉本实验中药物特殊杂质的来源。

掌握常用检查药物特殊杂质的操作方法。

自身对照法的检查原理。

熟悉薄层色谱法检查特殊杂质的一般操作。

【教学方法】讲授法、举例法、演示法

一、目的要求

二、实验原理

（一）盐酸氯丙嗪中有关物质的检查

自身对照法

（二）阿司匹林中水杨酸的检查

目视比色法

三、操作步骤

（一）盐酸氯丙嗪中有关物质的检查实验步骤

1.薄层板的制备取硅胶GF2547g，置研钵中，加三倍量的0.5％CMC－Na液，向同一方向研磨混合，去除表明气泡后，倒入在3玻璃板上进行均匀铺板（厚度0.2mm~0.3mm），待自然干燥后，于105℃活化1小时，放于干燥器中备用。

2.供试品溶液与对照品溶液的制备精密称取盐酸氯丙嗪100mg于10ml干燥量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液。

精密量取此溶液1ml于100ml量瓶中，加甲醇稀释成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照溶液。

3.检查避光操作，用微量进样器（或者定量毛细管）吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上（点间距大于2cm）。

将展开剂环己烷－丙酮－二乙胺（80：

10：

10）适量注入层析缸内（液层厚度约为0.5cm），然后把点有样品的薄层板放入层析缸，盖好缸盖，展开。

当溶剂前沿上行至距原点10cm以上时，将薄层板取出，凉干，置紫外灯下（波长254nm）检视。

供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液所显的主斑点比较，不得更深，记录谱图，计算主斑点与杂质斑点的Rf值。

1．供试液的制备：

称取阿司匹林0.095～0.105g于干燥的50ml比色管中，加乙醇1ml溶解后，加冷水（10℃以下）适量使成50ml，摇匀，即得。

2．对照液的制备：

精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水使成1000ml，摇匀（此溶液由实验室提供）。

精密量取1ml，置50ml纳氏比色管中，加乙醇1ml、水48ml与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml，摇匀，即得。

3．于对照液与对照液中，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液1ml，摇匀，30ｓ内比色。

4．若供试液颜色浅于对照液颜色或持平，则判定检品中游离水杨酸符合规定；

若供试液颜色深于对照液颜色，则判定检品中游离水杨酸不符合规定。

注意事项：

1.点样应少量多次点于同一原点处，原点面积应尽量小。

2.采用倾斜上行法展开，展开剂应浸入薄层板底边约5mm深度。

检验记录及检验报告

化学工业出版社

3、药品生物检定所编.中国药品检验标准操作规范与药品检验仪器操作规程.北京:

中国医药科技出版社

实践四物理常数测定

掌握旋光度测定法操作方法

掌握相对密度测定法的操作方法及结果计算

学会正确使用旋光仪

旋光仪的正确使用方法。

比重瓶的正确使用方法。

一、目的要求

松节油折光率的测定

藿香正气口服液相对密度测定

三、实验步骤

（一）松节油的折光率测定

1、校正图7-20为阿贝折射仪外形图。

阿贝折射仪经校正后才能作测定用。

校正的方法是：

从仪器盒中取出仪器，置于清洁干净的台面上，在棱镜外套上装好温度计，与超级恒温水浴相连，通入20℃或25℃的恒温水。

当水浴恒温后，打开锁，开启下面棱镜，使其镜面处于水平位置，滴入1～2滴丙酮于镜面上，合上棱镜，促使难挥发的污物逸去，再打开棱镜，用丝巾或擦镜纸轻轻揩拭镜面，注意：

不能用滤纸。

待镜面干后，校正标尺刻度。

操作时严禁油手或汗手触及光学零件。

再标准试样校对读数，对折射棱镜的抛光面加1～2滴溴代奈，再帖在标准试样的抛光面。

当读数视场指示于标准试样上之值时，观察望远镜内明暗分界线是否在“＋”字线中间。

若有偏差则用螺丝刀微量旋转图上16小孔内的螺钉，带动物镜偏摆，使分界线像位移至“＋”字线中心。

2、测定将被测液体用干净滴管加在折射棱镜表面，并将进光棱镜盖上，用手轮10锁紧，要求溢层均匀，充满视场，无气泡。

打开遮光板，合上反射镜，调整目镜视度，使＋字线成像清晰，此时转动手轮15并在目镜视场中找到明暗分界线位置，再转动手轮6使分界线不带任何色彩，微调手轮15，使分界线位于＋线的中心，再适当转动聚光镜12。

此时目镜视场下方显示的示值即为被测液体的折射率。

如果在目镜中看不到半明半暗，而是畸形的，这是因为棱镜间未充满液体。

若出现弧形光环，则可能是有光线未经过棱镜面而直接照射在聚光透镜上，若液体折光率不在1.3～1.7范围内，则阿贝折射仪不能测定，也调不到明暗界线。

3．实验结果判定：

松节油的折光率为1.466~1.477。

（二）藿香正气口服液相对密度测定（比重瓶法）

1.方法1：

取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶（如图1），装满供试品（藿香正气口服液）（温度应低于20℃或各品种项下规定的温度）后，装上温度计（瓶中应无气泡），置20℃（或各品种项下规定的温度）的水浴中放置若干分钟，使内容物的温度达到20℃（或各品种项下规定的温度），用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。

然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算，即得。

2.方法2：

取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶（如图2），装满供试品（藿香正气口服液，温度应低于20℃或各品种项下规定的温度）后，插入中心有毛细孔的瓶塞，用滤纸将从塞孔溢出的液体擦干，置20℃（或各品种项下规定的温度）恒温水浴中，放置若干分钟，随着供试液温度的上升，过多的液体将不断从塞孔溢出，随时用滤纸将瓶塞顶端擦干，待液体不再由塞孔溢出，迅即将比重瓶自水浴中取出，照上述

（1）法,自“再用滤纸将比重瓶的外面擦净”起，依法测定，即得。

3.结果判断

藿香正气口服液的相对密度应不低于1.01。

松节油的旋光度的测定

藿香正气口服液的相对密度测定

实践五富马酸酮替芬片含量均匀度测定

掌握紫外－可见分光光度计的使用方法。

掌握含量均匀度日检验方法。

供试品的取样方法

紫外－可见分光光度计的正确使用方法

实验数据的处理方法

含量均匀度系指小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂的每片（个）含量符合标示量的程度。

它不仅要求单剂活性成分含量分布均匀，而且要准确地集中分布在标示量的附近，对保证用药的安全和有效有重要意义，比重（装）量差异检查能更好地控制单剂含量的准确均匀。

1．取本品10片（标示量为1mg），分别置100ml量瓶中，加水适量，振摇使富马酸酮替芬溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照紫外-可见分光光度法，在301nm的波长处测定吸光度，按C19H19NOS的吸收系数（

）为465计算，应符合规定。

2．结果计算：

A=⎢100-

⎢

3．结果判定：

含量差异限度为±

15%。

如A+1.80S≤15.0，则供试品的含量均匀度符合规定。

若A+S>

15.0，则供试品的含量均匀度不符合规定。

若A+1.80S>

15.0，且A+S≤15.0，则应取20片（个）复试。

根据初、复试结果，计算30片（个）的均值

、标准差

和标示量与均值之差的绝对值

；

如A+1.45S≤15.0，即判为符合规定；

若A+1.45S>

15.0，则判为不符合规定。

含量均匀度测定

紫外－可见分光光度计的使用

实践六阿司匹林的含量测定

掌握直接中和法测定阿司匹林含量的方法

掌握原料药的含量测定方法

直接中和法测定阿司匹林含量的操作方法

阿司匹林分子中有游离羧基，其电离常数为3.27×

10-4，可用标准碱溶液直接滴定，生成乙酰水杨酸钠。

反应式如下：

（1）取本品0.36～0.44g，精密称定，置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至酚酞显粉红色为终点，记录消耗滴定液的体积。

（2）平行测定两份并计算本品含量，两次平行结果的相对偏差不得超过0.2%，取其算术平均值为测定结果。

式中

为滴定度，

为试验消耗氢氧化钠滴定液的体积（ml），

为氢氧化钠滴定液浓度校正因子，

为阿司匹林的取样量（g）。

四、注意事项

本品取样范围为0.4±

0.4×

10％g，为使供试品易溶解及防止阿司匹林酯键在滴定时水解而使滴定结果偏高，一般使用中性乙醇（对酚酞指示液显中性）为溶剂溶解样品。

滴定应在10~40℃条件下，不断振摇稍快地进行，以防止局部碱度过大而促使阿司匹林水解。

当供试品中所含水杨酸超过规定限度时，不宜采用本法测定，否则结果偏高。

实验过程中的不当操作

评点实验报告

药物检验技术教案（章节备课）

实践七高效液相色谱法测定吡拉西坦片的含量

掌握用高效液相色谱仪测定吡拉西坦片的方法。

熟悉供试品溶液、对照品溶液的配制方法。

学会从高效液相色谱图上读取保留时间和峰响应值的方法。

并能利用实验数据计算理论塔板数、分离度和供试品含量。

初步能够根据《中国药典》的规定对常见药物进行利用高效液相色谱仪测定药物的含量。

1.液相色谱仪的组成2.液相色谱仪的操作步骤3.供试品溶液、对照品溶液的配制方法。

1.结果处理

2.高效液相色谱仪各项参数的设定

二、原理

采用高效液相色谱法测定吡拉西坦片含量可消除药物中共存杂质和辅料的干扰，具有专属性高的特点。

吡拉西坦在210nm波长处有特征吸收，可以用紫外检测器进行定量。

质量标准

【含量测定】照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；

以甲醇-水（10：

90）为流动相；

检测波长为210nm。

理论板数按吡拉西坦峰计算应不低于2000。

测定法取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于吡拉西坦0.1g），置100ml量瓶中，加流动相适量，振摇使吡拉西坦溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；

另取吡拉西坦对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相适量溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。

按外标法以峰面积计算，即得。

三、仪器与试药

1．仪器：

高效液相色谱仪、十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱、电子或分析天平（感量0.1mg和感量1mg）、超声仪、微量注射器、50ml量瓶、称量瓶、小烧杯及玻棒。

2．试药：

甲醇（色谱纯）。

3．对照品：

磺胺嘧啶对照品。

四、步骤

（1）操作前的准备

①流动相的制备：

按质量标准制备流动相（甲醇10份，水90份，充分混合均匀，即得），制备好的流动相应通过适宜的0.45μm滤膜滤过，用前脱气。

应制备足量的流动相备用。

②供试品溶液的制备：

照药典方法，制备2份。

供试品溶液在注入色谱仪前，经适宜的0.45μm滤膜滤过。

③对照品溶液的制备：

在注入色谱仪前，经适宜的0.45μm滤膜滤过。

④检查上次使用记录和仪器状态：

检查仪器是否完好，色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH与该色谱柱是否相适应等。

（2）操作

①开机，初始平衡时间一般约需30分钟。

②系统适用性试验：

在选定的色谱条件下，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

计算理论板数，应符合规定。

③分别取供试品溶液和对照品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

供试品溶液和对照品溶液每份至少注样2次，由全部注样结果（n≥4）求得平均值，相对标准