药典中药质量标准研究报告制定技术要求Word文档格式.docx
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样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少于3倍检验量的样品供复核用。
样品保存应符合各品种项下的贮藏要求。
质量标准制定应使用国家法定部门认可的对照物质<
包括对照品、对照提取物和对照药材）。
若使用的对照物质是自行研制的，应按照相关的要求申报相应的鉴定研究资料和对照物质。
四、编写要求
标准正文应按“《中国药典》中药质量标准正文各论编写细则”的要求编写；
标准起草说明应按“《中国药典》中药质量标准起草说明编写细则”的要求编写。
实验记录书写应真实、完整、清晰，保持原始性并具有可追溯性，应按要求建档永久保存。
五、检测方法和检测指标的制定
中药质量标准的制定要体现中药的特点，其检测方法和检测指标的制定要脱离化学药品单一成分定性定量的模式，要体现复杂体系整体控制的设计思想，以建立符合中医药特点的质量标准体系，逐步由单一指标性成分定性定量向活性、有效成分及生物测定的综合检测过渡，向多成分、组分测定及指纹或特征图谱整体质量控制模式转化。
要提高中药检测方法的专属性，建立科学合理的控制指标。
要注重中药安全性检测方法和指标的建立和完善，加强对重金属及有害元素、残留农药、残留溶剂、残留二氧化硫、微生物、真菌毒素等外源污染物的检测。
实验中应注重绿色环保要求，尽量采用毒害小、污染少的试剂、试药，避免使用苯等毒性大的溶剂；
并尽量采用《中国药典》附录中已收载的试剂与试液
（一>
鉴别实验
鉴别实验应符合重现性、专属性和耐用性的验证要求，根据药品的性质可分别采用显微鉴别、理化鉴别与色谱鉴别等方法，制定的色谱鉴别方法应能反映该药的整体特性。
1、显微鉴别
系指利用显微镜对药材（饮片>
切片、粉末、解离组织或表面以及含有药材粉末的制剂进行观察，并根据组织、细胞或内含物等特征进行相应药材鉴别的一种方法。
显微鉴别应按照一定的收录原则、书写顺序和文法进行规范描述，以使标准简洁明了，可操作性强。
应选择容易观察、具有鉴别意义的专属特征列入标准。
凡有下列情况的药材，应尽量规定显微鉴别：
药材组织构造特殊或有明显特征，可以区别外形相似或破碎不易识别的类似品、伪品；
或某些常以粉末入药、而又无专属性理化鉴别方法的药材，尤其是毒性或贵重药材。
成方制剂显微鉴别，原则上应对处方中所有以粉末投料的药材逐一进行研究，选择特征性强、与处方中其它药味无交叉干扰的显微特征作为鉴别依据，所收载的特征应明显、易于检出。
2、理化鉴别
理化鉴别包括一般理化鉴别，荧光鉴别及光谱鉴别等方法，中药成分复杂，应根据所含成分的化学性质选择适宜的专属性方法。
对于不易达到专属性要求的一般理化鉴别、荧光鉴别及光谱鉴别，一般不宜采用。
3、薄层色谱鉴别
薄层色谱可将中药内含成分通过分离达到直观、可视化，具有承载信息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，可作为中药鉴别的首选方法。
<
1）在建立方法时，尽量采用以对照品和对照药材或对照提取物同时进行对照。
当对照品不易获得时，采用以对照药材为对照；
某些鉴别被测物为单一成分的，可以只采用对照品进行对照；
不宜采用Rf值表述色谱行为。
2）供试品溶液的制备应尽可能除去干扰色谱的杂质，同时方法要尽量简便，应视被测物的特性来选择适宜的溶剂和方法进行提取、分离。
3）为了使图谱清晰，斑点明显，分离度与重现性符合要求，应根据被测物的特性选择合适的固定相、展开剂及显色方法等色谱条件。
确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件；
选择合适的对照物质，确定对照物质用量、浓度、溶剂、点样量等。
4）由于实验时的温度、湿度常会影响薄层色谱结果，因此，建立方法时应对上述因素进行考察。
如有必要，应在标准正文中注明温、湿度要求。
5）除需要改性，一般应采用预制的商品薄层板。
不同品牌的薄层板或自制薄层板的薄层色谱结果有一定的差异，因此应对其进行考察选择适宜的薄层板。
4、液相色谱鉴别
1）应根据被测物的性质选用适宜的色谱柱、流动相<
注意流动相的pH值与色谱柱的pH值范围相适应，尽量避免使用缓冲溶液）检测器等，进行系统适用性实验，考察分离度、重复性、理论板数等参数，选择最佳色谱条件。
2）确定供试品取样量，提取和纯化方法，稀释度、进样量；
对照物质用量、浓度、溶剂、进样量等。
5、气相色谱鉴别
1）应根据被测物的性质，选用合适的色谱柱、填料、固定相、涂布浓度、检测器等进行系统适应性实验，确定进样口温度、柱温、检测器温度、考察色谱分离的效果、分离度等参数。
6、DNA分子标记鉴别
DNA分子标记鉴别是指通过比较药材间DNA分子遗传多样性差异来鉴别药材基源、确定学名的方法。
适用于采用性状、显微、理化以及色谱鉴别等方法难以鉴定的样品的鉴别，如同属多基源物种、动物药等的鉴别。
1）DNA提取、纯化方法的考察通过多种方法的优化，建立切实可行的DNA提取、纯化方法，确定最佳条件，获取高质量的药材总DNA，并提供研究数据。
2）DNA分子标记方法的确定通过多种方法对多样品的比较，确定适于目的物鉴别的分子标记方法，优化各种条件、参数，并提供研究数据。
3）PCR反应条件的确定通过实验，优化PCR反应条件、参数，并提供研究数据。
4）电泳检查：
通过实验，优化琼脂糖凝胶电泳条件、参数，并提供研究数据。
5）实验过程要防止外源DAN的污染。
7、中药指纹图谱技术
中药指纹图谱建立的目的是通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠。
其具体实验是采用指纹图谱模式，将中药内在物质特性转化为常规数据信息，用于中药鉴别和质量评价。
中药指纹图谱建立的内容包括：
中药指纹图谱分析方法的建立、指纹图谱方法认证、方法验证、数据处理和分析。
中药指纹图谱按照测试样品来源可以分为中药材、饮片、提取物或中间体、成方制剂指纹图谱其中中药材、饮片及中间体指纹图谱主要是用于生产的内部控制、质量调整以及质量相关性考察。
中药指纹图谱按照获取方式可以分为色谱、光谱及其他分析手段，其中色谱是中药指纹图谱建立的首选和主要方式。
1）中药指纹图谱分析方法的建立
中药指纹图谱应满足专属性、重现性和可操作性。
其首要目的是能体现中药的整体特征。
在满足表征中药化学成分群整体性质的前提下，要求有较好的重现性，应根据重现性要求选用合适的分析方法来获取指纹图谱。
指纹图谱分析方法的可操作性系指针对不同用途，选用不同方法来达到不同的要求。
中药指纹图谱的一般获取规程如下：
①供试品溶液的制备
在中药指纹图谱测试中，制备供试品的基本原则是代表性和完整性。
供试品的制备是整个分析步骤中关键的起始部分，供试品制备的好坏直接影响了整体分析结果的优劣及可信程度。
因此，供试品的制备必须保证能够充分地反映出样本的基本特性，同时也必须保证待测样品所含特性的完整性。
主要操作过程及数据应详细记录。
供试品溶液的制备需按照具体的分析对象，在对样品基本特性进行了解的情况下，采用规范的处理方式进行供试品溶液制备。
操作过程应按照定量测定的要求，保证样品物质信息不减失、不转化。
对于化学成分类别相差较大的样品，可根据类别成分的性质，按照分析要求，对样品分别进行预处理，用于制备2张以上的指纹图谱。
主要步骤及数据应详细记录。
②参照物
参照物的选择：
指纹图谱的参照物质一般选取容易获取的一个或一个以上制剂中的主要活性成分或指标成分，主要用于考察指纹图谱的稳定程度和重现性，并有助于指纹图谱的辨认。
在与临床药效未能取得确切关联的情形下，参照物<
复方制剂剂应首选君药的活性成分或指标成分）起着辨认和评价指纹图谱特征的指引作用，不等同于含量测定的对照品。
参照物应说明名称、来源和纯度。
如无合适参照物也可选指纹图谱中的稳定的指纹峰做为参照峰，说明其响应行为和有关数据，并应尽可能阐明其化学结构及化学名称。
③指纹图谱获取实验
指纹图谱获取首选色谱方法，主要有液相色谱、薄层色谱、气相色谱及其他色谱技术。
光谱方法和其他分析方法在指纹图谱获取中可作为快速鉴别和辅助鉴别使用，在确定其与常规色谱方法的相关性以后可以考虑替换使用，但需慎重。
须注意各种技术的特点和不足，结合实际选用。
选用的原则是必须具有良好的专属性、重现性和可操作性。
指纹图谱实验条件应能满足指纹图谱的需要，不宜简单套用含量测定用的实验条件，并需根据指纹图谱的特点进行实验条件的优化选择。
实验方法和实验条件选择应根据供试品的特点和需要设计合适的实验方案，通过比较实验，从中选取相对简单易行的方法和条件，获取足以代表品种特征的指纹图谱，以满足指纹图谱的专属性、重现性和可操作性的要求。
方法和条件须经过方法学验证。
④指纹图谱的建立和辨识
指纹图谱建立和辩识的主要目的是确定获取的指纹图谱中具有指纹意义的特征峰，并能体现其整体性。
如色谱指纹图谱的实验条件确立后，应将获取的所有样品的指纹图谱逐一研究比较。
一张对照用指纹图谱，特别是分辨率较高的图谱，必须制备有足够代表性的样品的图谱，找出成品色谱具有指纹意义的各个峰，给以编号，再将药材、中间体和成品之间的图谱比较，考察相互之间的相关性。
指纹图谱的辨识应注意指纹特征的整体性。
辨识时应从整体的角度综合考虑，注意各有
图谱<
共有模式）之间的相似性，即“相似度”进行表达。
2）指纹图谱方法认证
①需要证明获取的指纹图谱能够表征该中药产品的化学组成。
②各原药材的化学组成特征应该在中药产品的谱图中得到体现。
3）指纹图谱方法验证
指纹图谱实验方法验证的目的是为了考察和证明采用的指纹图谱测定方法具有可靠性和可重复性，符合指纹图谱测定的要求。
中药指纹图谱测定是一个复杂的分析过程，影响因素多，条件繁杂，合理的实验方法有效性评价是对测定整体过程和分析系统的综合验证，需要在制定指纹图谱方法时充分考虑。
中药指纹图谱实验方法验证所包括的工程有：
专属性、精密度<
重复性和重现性）及耐用性等。
方法验证的具体内容如下。
1专属性（Specificity>
：
中药指纹图谱方法专属性是指指纹图谱的测定方法对中药样品特征的分析鉴定能力。
中药供试品中物质一般分为：
有效成分或活性成分、指标成分、辅助成分、杂质和基质等。
在多数为未知成分的情况下，成分的标定、分离程度的评价和化学成分的全显示等都不能得到较好的满足，因此指纹图谱方法的专属性应从入药的有效部位所包含的成分群入手，根据相应的样品理化性质，确定一定的分离分析方法和检测手段。
如色谱指纹图谱中，一般认为在分离峰越多越好，大多数成分均能有响应的情况下，用典型的色谱图来证明其专属性，并尽可能在图上恰当地标出可确定的成分。
具体方法专属性可考虑采用峰纯度、总峰响应值、容量因子分布、最难分离物质对的分离情况、总分离效能指标等为考察参数。
同时需要评价有关样品<
药材、中间品和成品）间的相关性，并尽可能显示出样品中特征响应，保证其有较大响应，从而减少方法的波动带来判别误差。
另外在指纹图谱测定中，如果采用一种方法对中药分析物不具备完全鉴定的能力，可采用两种或两种以上的方法以达到鉴定水平。
2精密度（Precision>
精密度是指规定条件下对均质样品多次取样进行一系列检测结果的接近程度<
离散程度）。
精密度考察应使用均质和可信的样品。
在得不到均质和可信样品的情况下，可用在实验室配制相应的样品或样品溶液进行考察。
指纹图谱实验方法的精密度通常以多次测量结果<
相似度值）的变异性、标准偏差或变异系数来表达。
具体精密度测量可用重复性（Repeatability>
和重现性（Reproducibility>
进行考察。
重复性是指在同样的操作条件下，在较短时间间隔的精密度，也称间隙测量精密度。
重复性的评价应在方法的规定浓度范围内至少测定9次<
如3种浓度，每一方法测定3次），或在100％的实验浓度下，至少测定6次，将所得结果进行相似性评价。
重现性是指在不同实验室之间的精密度<
合作研究，通常用于方法学的标准化）。
在方法需要标准化的时候，重现性是通过实验室之间的评价，即于不同实验室采取复核、审核、标化、盲试等不同的方法进行精密度考察，同时需要考察真实值的变异范围，确定方法本身的误差来源。
重复性和重现性的具体范围应据实际情况确定。
3耐用性（Robustness>
指纹图谱耐用性是指不同条件下分析同一样品所得测试结果的变化程度，是中药指纹图谱测定方法耐受环境变化的显示。
如对色谱指纹图谱，在实际验证中首先需要考虑各个实验室不同温湿条件<
即不同实验环境）、不同分析人员、不同厂家仪器<
包括同一厂家不同规格仪器），不同厂家的试剂和不同柱子<
不同批号和/或供应商）等；
其次需考虑方法本身的参数波动的影响，如流速、柱温、波长变异、展开剂比例、流动相组成等，最后还包括分析溶液的稳定性、提取时间、流动相pH值变化的影响、流动相组分变化的影响等。
对于薄层色谱和气相色谱还包括薄层板、展开系统；
不同类型的担体、柱温、进样口和检测器温度等。
经系统实验，应对结果予以说明，并确定不引起系统较大变化的范围，确保方法的有效。
4）中药指纹图谱的数据处理和计算分析
中药指纹图谱获取所得到的数据，应是符合实际情况的色谱、光谱或其它源数据或积分结果。
应建立比较图谱的一致性或相似程度的方法。
对于用于评价产品一致性、批间均一和稳定性的指纹图谱，建议应用现代信息学方法分析指纹图谱，其优点是能够借助计算机辅助计算给出客观、准确的结果，分析结果稳定、可重复。
计算一般可分为谱峰匹配、化学特征提取、相似度计算、模式分类等步骤。
采取相似度方式进行数据分析，可通过一定的计算软件进行，但必须提供算法及操作步骤供具体评价使用。
采用相似度评价软件计算相似度时，若峰数多于10个，且最大峰面积超过总峰面积的70%，或峰数多于20个，且最大峰面积超过总峰面积的60%，计算相似度时应考虑去除该色谱峰。
对于用于鉴别的指纹图谱，若能够提供对照提取物，则优先考虑采用对照提取物作对照，也可以采用标准中给出的对照指纹图谱作对照进行目测比较，比较其色谱峰的峰数、峰位、峰与峰之间的比例等简单易行的方法。
为确保特征或指纹图谱具有足够的信息量，必要时可使用二张以上特征或指纹图谱。
二）检查
检查项主要包括安全性、有效性、均一性与纯度要求四个方面，应根据中药材<
包括饮片）、提取物<
包括植物油脂）、中药制剂的具体情况，研究建立合理的检查工程。
《中国药典》附录收载的检查方法根据药品的不同情况有的会按序排列多个方法，制定各品种质量标准时，应考察每种方法对所测品种的适用性，一般应明确规定使用第几法并说明使用该方法的理由。
对于需要根据品种情况制定检查限度的工程，应按要求收集足够量有代表性的样品，根据实测数据制定限度。
三）、含量测定
1、测定成分的选择
一般应根据中药的功能主治或活性实验结果来选择相应的专属性成分、活性成分作为含量测定的指标；
避免选择无专属性的指标成分或低活性的微量成分，同时应首选样品中原含成分，避免选用水解成分作为测定指标。
当单一成分不能反映该药的整体活性时，应采用多成分或多组分的检测方法。
2、供试品溶液制备方法选择
1）提取条件的确定,应对不同溶剂、不同提取方式、不同时间及不同温度等条件进行比较，确定最佳条件，并提供研究数据。
2）分离纯化条件的确定，根据被测成分的性质，对样品溶液可进行适当的分离纯化以排除干扰物质，如采用液-液萃取及聚酰胺、氧化铝、硅胶、大孔吸附树脂等色谱纯化方法，并提供方法选择的依据及相应的研究数据。
3、含量测定方法的选择及研究内容要求
含量测定方法应具有专属性，如测定方法无法做到专属性而采用了某一种非专属性的方法，则应用其他的分析方法来达到总体的专属性。
比如，可附加一种合适的鉴别实验<
如特征或指纹图谱等）。
选用的分析方法应符合“中药质量标准分析方法验证指导原则”的要求。
1）容量法
主要用于含矿物类药材的含量测定，常用中和法、碘量法、银量法、络合量法等。
应注意对样品必要的处理、破坏，取样量应满足精度要求，消耗滴定液控制在10－20ml；
确定滴定液、滴定度及指示剂等，指示剂对终点变色应敏锐、易观察、无其他颜色干扰。
2）重量法
选择供试品用量、提取、分离、纯化及干燥等条件，必要时提供换算因子<
四位有效数字）。
3）氮测定法
主要用于含较多蛋白质或氨基酸中药的含量测定。
根据品种情况确定使用常量法或半微量法，照现行版《中国药典》附录收载的氮测定法测定并规定限度。
4）紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法用于在特定波长处对光有吸收或通过加入一定的显色剂后有吸收的单一成分或类别成分的含量测定，常用方法有对照品比较法和比色法。
中药成分复杂、干扰因素不易排除，成分含量变化幅度大，因此紫外-可见分光光度法中的吸收系数法一般不宜采用。
建立方法时应确定供试品溶液及对照品溶液的制备方法，选择最佳的测定波长，配制供试品溶液时，提取、转移、稀释次数应尽量少；
取样量应适宜，一般吸光度应在0.3-0.7之间。
注意，采用比色法测定时供试品溶液与对照品溶液的最大吸收波长也应一致；
制备标准曲线时至少应取5份以上对照品溶液进行测定。
5）薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描法用于中药含量测定时，应选择在一定条件下能产生荧光的化学成分，需要显色后进行扫描测定的成分一般不提倡使用该方法。
应采用预制的商品薄层板；
扫描方式一般选用反射方式，采用吸收法或荧光法；
扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描。
①应优化选择供试品提取与纯化方法；
供试品取样量应能使被测成分的含量在对照品高低浓度的范围内，并注意避免点样量超载。
②应优化选择薄层色谱条件，如薄层板型号<
注意对不同厂家及不同批号的薄层板进行分离效果比较）、薄层板的预处理、展开溶剂、展开条件、检视条件、扫描条件等。
③要关注实验环境<
例如，温度、湿度）对结果的影响，对温、湿度敏感的品种应将温、湿度要求列入标准正文。
④计算方法一般采用线性回归二点法或多点法校正多项式回归计算。
6）高效液相色谱法
高效液相色谱法具有分离性能高、分析速度快、灵敏、操作简便等特点，已成为中药含量测定的首选方法。
测定方法有内标法和外标法，一般首选外标法。
流动相组成可采用固定比例<
等梯度洗脱）或按程序改变比例<
梯度洗脱）。
常用的检测器为紫外检测器<
UV）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸法光散射检测器<
ELSD）、质谱检测器等。
建立方法时应以二极管阵列检测或质谱检测对所测定的样品峰进行单一性验证，并将验证结果列入起草说明中。
①根据被测成分的性质选用适宜的色谱柱，一般首选C18柱，注意色谱柱的性能、适用范围、适宜的pH值范围等。
②优化色谱条件，如色谱柱、流动相组成及比例（尽量避免使用缓冲溶液>
、洗脱程序、检测波长等；
确定系统适用性实验参数<
理论板数、分离度等）。
③选定供试品取用量、提取及纯化方法<
采用超声处理时，应规定超声功率、频率，必要时注明超声温度），稀释体积、定容体积等；
选定对照品溶液配制用溶媒、配制浓度、配制方法等。
④利用蒸发光散射检测器<
ELSD）检测时，应根据供试品中被测成分的峰面积积分值或响应值进行数学转换后进行计算。
7）气相色谱法
气相色谱法用于含挥发性成分的含量测定，测定方法有内标法、外标法，中药含量测定首选外标法。
检测器有火焰离子化检测器<
FID）、热导检测器<
TCD）、质谱检测器<
MS）等。
①建立方法时可选择填充柱或毛细管柱，一般中药测定宜选用毛细管柱；
选用毛细管柱时应考察确定毛细管柱种类、柱长、内径、膜厚度等；
选用填充柱应考察确定固定相种类及涂布浓度。
②选择进样口温度、柱温<
若为程序升温应确定初始温度、程序升温速度、达到温度、保持时间等）、检测器温度、分流比、理论板数等有关参数。
③采用内标法时，应选定适宜的内标物质及校正因子的测定方法，内标物质的峰应能与样品中的被测成分及杂质峰达到较好的分离。
④采用外标法定量时，为保证进样误差符合规定，宜采用自动进样，提高进样重复性。
⑤选定供试品取量、提取及纯化方法<
采用超声处理时，应规定超声功率、频率，必要时注明超声温度），稀释体积、进样体积等；
8）电感耦合等离子体质谱法
电感耦合等离子体质谱法灵敏度高，可用于多种元素的同时测定，分析效率高，是目前国际公认的最先进的元素分析方法。
测定模式有一般模式和氦气碰撞反应模式及氢气碰撞反应模式。
定量方法有工作曲线法、标准加入法，一般首选工作曲线法。
1建立方法时应根据元素的特性选择测定模式<
例如测定砷应选用氢气或氦气碰撞反应模式）；
选择合适的测量质量数。
2测定前应对仪器进行灵敏度和干扰物调谐，达到要求后方可进行测定。
3考察工作曲线的线性浓度范围，相关系数不得小于0.9990。
4实验用器皿以免被污染，均应事先洗干净并用10％硝酸浸泡过夜后再用去离子水冲洗干净备用。
5实验用试剂应选择优级纯或更纯级别，水为去离子水<
电阻率应大于18MΩ）
6选择供试品溶液的制备方法取样量、消化试剂、消化方法<
推荐使用微波消解方法，该方法不易污染，样品消解过程元素不易损失，亦可采用干法消解或湿法消解，但应对消解方法和温度进行方法考察）等。
上机溶液应澄清，酸度一般不大于10％。
供试品溶液中元素的浓度应在工作曲线的浓度范围之内，否则应调整取样量或稀释倍数，并同法制备空白溶液作为试样空白。
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