第五章常用饲料原料的掺假识别Word格式文档下载.docx
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正常的菜籽粕其蛋白含量一般都在33%以上,而掺假的菜籽粕其粗蛋白含量较低。
(四)四氯化碳检查
四氯化碳的比重为1.59,菜籽粕的比重比四氯化碳小,所以菜籽粕可以飘浮在四氯化碳表面。
其方法是:
取一梨形分液漏斗或小烧杯,加入5-10g菜籽粕,加入100ml四氯化碳,用玻璃棒搅拌一下,静置10-20分钟,菜籽粕应飘浮在四氯化碳表面,而矿砂、泥土等由于比重大,故下沉底部。
将下沉的沉淀物分离开,放入已知重量的称量瓶中,然后将称量瓶连同下层物放入110℃烘箱中烘15分钟,取出置于干燥器中冷却、称重,算出粗略的土砂含量。
正常的菜籽粕其土砂含量在1%以下,而掺假的菜籽粕其土砂含量高达5-15%以上。
(五)灰分检查
正常的菜籽粕的粗灰分含量应≤14%,而掺假的菜籽粕其灰分含量高达20%以上。
四、麦麸的掺假识别
麦麸主要掺杂一些石粉、贝粉、砂土、花生皮及稻糠等,识别方法如下:
(一)显微镜法
将待检样品均匀放在玻片上,在15倍的实体显微镜一观察,如果视野里看小麦麸两面发白发亮,动多个视野都可看到,则认为掺有石粉。
若视野中看到有长而硬没有白面的皮,有井字条纹,则认为有稻壳究掺入。
掺入贝粉、沙土、花生皮均可通过显微镜观察,可依据前述这几种原料的显微特征。
(二)水浸法
此法对掺有贝粉、砂土、花年壳者较明显。
方法是:
取5-10g麸皮于小烧杯中,加入10ml的水搅拌,静置10分钟,将烧杯倾斜,若掺假则看到底面有贝粉、砂土,上面浮有花生壳。
(三)盐酸法
取试样少量于小烧杯中,加入10%的盐酸,若出现发泡,则说明掺有贝粉、石粉。
(四)成分分析法
麦麸粗蛋白一般在13%~17%之间,粗灰分在6%以下,粗纤维低于10%,可依据此标准进行验证。
五、玉米蛋白粉的搀假识别
(一)玉米蛋白粉搀假主要是尿素,掺尿素的检验方法如下:
称取10g样品于烧杯中,加入100ml蒸馏水,搅拌、过滤,取滤液1ml于点滴板上,加入2~3滴尿素酶溶液,约经5分钟,如点滴板上呈深红色,则说明样品中掺有尿素。
尿素溶液的配制称取0.2g尿素酶溶解于100ml95%乙醇中。
甲基红指示剂的配制称取甲基红0.1g,溶解于100ml乙醇溶液中。
(二)在无尿素酶药品时,则可采用下列方法检测。
取两份1.5g样品于两只试管中,其中一只加入少许黄豆粉、两管加蒸馏水5ml,振荡,置60~70℃恒温水浴箱水浴3分钟,滴6~7滴甲基红指示剂,若加黄豆粉的试管中出现较深紫红色,则说明玉米蛋白粉掺有尿素。
六、酵母粉的搀假识别
酵母粉掺假主要有非发酵产物、羽毛粉、血粉、皮革粉、无机氮、尿素等。
(一)非发酵产物的检查
取1g样品溶于99ml蒸馏水中,多次振荡,以血球记数板在显微镜下记数检验,结果与标准相符为纯发酵产物,否则为非发酵产物。
(二)掺羽毛粉、血粉、皮革粉的检查
1.掺羽毛粉用肉眼观察产品中有闪光亮点,在显微镜下观察可见羽毛管和羽毛轴,并且可见像松香样的半透明颗粒,如果掺入未水解完全的羽毛粉,可见外廓羽毛的羽轴大多有锯齿边。
2.掺血粉的检查
掺入血粉颜色偏黑,镜下进一步观察可见有黑色似沥青状的颗粒,边缘锐利,或者可见血红色晶亮的小珠,这二者均为掺入血粉,只是血粉的加工方法不同,镜下特征不一样。
3.掺皮革粉的检查
掺入皮革粉显微镜下观察,可见绿色(含铬)、深褐色及专红色块状物或丝状物,像锯末似的,不像水解羽毛粉那样透明。
此外掺羽毛粉、血粉、皮革粉还可用物理法和化学法进行检查,请参照本章第二节动物原料中鱼粉掺假检查部分。
(三)掺无机氮及尿素的检查
掺无机氮[(NH4)2SO4、NH4CL]及尿素,目的在于补充产品中的氮量,以提高蛋白质含量。
检验方法如下:
1.掺无机氮检查
取样品5-10g,溶于50ml蒸馏水中,滴加AgNO3溶液数滴,如有白色沉淀生成则产品中有氯离子存在,可能掺有NH4CL。
如滴加BaCL2溶液,有白色沉淀生成,则产品中有硫酸根存在,可能掺有(NH4)2SO4。
2.掺尿素的检查
可参见本章节中玉米蛋白粉掺尿素的检查。
(四)柠檬黄染色
一般固体发酵生产的产品中,因残留大量的培养基,所以原料的选用不仅影响产品质量,同时也决定产品的颜色。
随着豆粕、鱼粉等蛋白原料的短缺,为了降低成本,许多厂家选用了棉籽粕、菜籽粕等到原料,但又要掩盖其较深(偏黑)的颜色,于是采取了两种方法,一是微粉碎;
二是高剂量柠檬黄染色(在原料灭菌时加入),以使产品呈金黄色。
检查方法:
取样品10g左右,溶于50ml水中,多次振荡,1小时后观察上清液颜色,如颜色深则加染色剂。
七、啤酒酵母的掺假识别
啤酒酵母一般掺有豆粕、麦根、淀粉等,识别方法如下:
(一)水溶法
无掺假之啤酒酵母可溶于水,取一个100ml烧杯,称取样品约5g,注入50ml蒸馏水,如果皆溶于水中,可判定为无掺假,否则为掺假。
(二)掺淀粉检查
用碘---碘化钾法检查。
取样品2-3g置于烧杯中,加入2-3倍水后加热1分钟,冷却后滴加碘—碘化钾溶液(取碘化钾5g,溶于100ml水中,再加碘2g),若样品中掺有淀粉,则颜色变蓝,随掺入淀粉的增加,颜色由蓝变紫。
(三)掺豆粕的检查
可用显微镜法,检查有无豆粕的掺入。
如果镜下可见豆粕皮和豆粕颗粒特征,证明掺有豆粕。
豆粕皮下外表光渭,有光泽,并可见明显凹陷和针状小孔,内表面为白色多孔海绵状组织,并可观察到种脐。
豆粕颗粒形状不规则,一般硬而脆,不透明,奶油色或黄褐色。
(四)掺有麦根的检查
可用显微镜检查法,如有麦根,可在镜下发现有大麦皮,大麦皮下为黄褐色,并有凸起的脉。
动物性原料的掺假识别
一、鱼粉的掺假识别
鱼粉中常掺有菜籽粕、棉籽粕、羽毛粉、血粉、皮革粉、花生粕、芝麻粕、大豆粕、虾粉、蟹壳粉、贝壳粉、肉骨粉、尿素等,具体检查方法如下:
(一)感官检查法
1.视觉
优质鱼粉颜色一致,呈红棕色、黄褐色或黄棕色等。
细度均匀。
劣质鱼粉为浅黄色、青白色或黑褐色,细度和均匀度较差。
掺假鱼粉为黄白色或红黄色,细度和均匀度差。
掺入风化土鱼粉色泽偏黄。
2.嗅觉
优质鱼粉是咸腥味;
劣质鱼粉为腥臭或腐臭味;
掺假鱼粉有淡腥味、油脂味或氨味等异味。
掺有棉籽粕和菜籽粕的鱼粉,有棉籽粕和菜籽粕味,掺有尿素的鱼粉,略具氨味,掺入油渣的鱼粉有油脂味。
3.触觉
优质鱼粉手捻质地柔软呈鱼松状,无砂粒感;
劣质鱼粉和掺假鱼粉捻有砂粒感,手感较硬,质地粗糙磨手。
如结快发粘,说明已酸败,强捻散后呈灰白色说明已发霉。
(二)显微镜检查
鱼粉为黄褐色或黄棕色等轻质物,按鱼肉、鱼骨和鱼鳞的特征可以鉴别。
鱼肉镜下表面粗糙,具有纤维结构,类似肉粉,只是颜色浅。
鱼骨为半透明至不透明的银色体,一些鱼骨块呈琥珀色,其空隙呈深色的流线型波状线段,似鞭状葡萄枝,从根部沿着整个边缘向外伸出。
鱼鳞为平坦或弯曲的透明物,有同心圆,以深色和浅色交替排布。
鱼鳞表面有轻微的十字架。
鱼鳞表面碎裂,形成乳白色的玻璃珠。
烧焦鱼粉鱼粉长期堆放,通过空气而自行燃烧,呈褐色。
从镜下看不到油星,且颗粒碎小。
鱼骨由半透明的银色体变为褐黄色的半透明体。
鱼肉粗糙,纤维结构看不清楚或根本看不到。
鱼粉掺假的显微镜检查:
1.掺菜籽粕
鱼粉中掺菜籽粕镜下可见菜籽粕的种皮特征,种皮为深棕色并且薄,外表面有蜂窝状网孔,表面有汹涌内表面有柔软的半透明白色薄片附着。
菜籽粕的种皮和籽仁碎片不连在一起,籽仁呈淡黄色,形状不规则,无光泽,质脆。
2.掺棉籽饼粕
鱼粉中掺棉籽饼粕镜下可见棉絮纤维附着在外壳上及饼粕颗粒上,棉絮纤维为白色丝状物,中空、扁平、卷曲、半透明、有光泽,棉籽壳碎片为棕色或红棕色,厚且硬,沿其边沿方面有淡褐色和深褐色的不同色层,并带有阶梯似的表面。
棉籽仁碎片为黄色或黄褐色,含有许多圆形扁平的黑色或红褐色油腺体或棉酚色腺体。
棉籽壳和棉籽仁是连在一起的。
3.掺稻壳粉
鱼粉中参稻壳粉镜下可见具有光泽的表面,有井字条纹,并可见到茸毛。
4.掺花生饼粕
鱼粉中掺花生饼粕镜下可见花生种皮、外壳存在,种皮为红色、粉红色、浅紫色或棕黄色。
外壳破碎呈极不规则的片状,分层,内层呈白色海绵状,有长条短纤维交织,外壳表面有突筋呈网状,外壳皮厚不均,有韧性。
5.掺芝麻饼粕
鱼粉中掺芝麻饼粕镜下可见芝麻特征,芝麻种皮带有微小圆形突起,芝麻皮薄,黑色、褐色或黄褐色,因品种而异。
6.掺大豆粉
鱼粉中掺大豆粉镜下可见豆皮、黄色或典褐色块状物。
豆皮有凹形斑点,稍有卷曲,并可见种脐。
白色海绵淀粉像水珠浮在块状物表面。
7.掺麦麸
鱼粉中掺麦麸镜下可见淡黄色或棕色片状麸皮。
麸皮外表面有细皱纹,内表面粘附有许多不透明的白色淀粉粒。
8.掺皮革粉
鱼粉中掺皮革粉镜下可见绿色、深褐色及砖红色的块状物或丝状物,像锯末似的,没有水解羽毛粉那样透明。
9.水解羽毛粉
鱼粉中掺水解羽毛粉镜下可见半透明像松香一样的碎颗粒,有些反光。
同时可见羽毛管和羽毛轴,似空心面。
也可看见生羽毛。
10.掺虾肉粉
鱼粉中掺有虾肉粉镜下可见虾须、虾眼、虾壳和虾肉等。
虾壳类似卷曲云母薄片形状,半透明。
少量的虾肉与虾壳连在一起。
虾眼为黑色球形颗粒,较硬,为虾肉粉中较易辨认的特征。
虾须在镜下观察为以断片存在,长圆管状,带有螺旋形平行线。
虾腿为断片宽管状,半透明,带毛或不带毛。
11.掺蟹壳粉
鱼粉中掺蟹壳粉镜下可见蟹壳的特征。
蟹壳为小的不规则的几丁质壳的形状,壳外层多为橘红色,多孔,并有蜂窝状的圆形凹斑或小盖状物。
12.掺贝壳粉
鱼粉中掺有贝壳粉镜下可见贝壳粉的特征。
贝壳粉颗粒很硬,表面两面光滑,颜色依贝壳种类不同而有较大的差异,有的为白色或灰色,也有的为粉红色。
有些颗粒外表面具有同心的或平行的线纹或者带暗淡交错的线束,有些碎片边缘呈现锯齿状。
13、掺海带粉
鱼粉中掺海带粉镜下可见其海带粉的特征,海带粉镜下呈浅灰色并杂有淡黄色,与国产鱼粉的颜色相近,颗粒不等,粒度大的呈片状,形状极不规则。
14、掺血粉
鱼粉中掺血粉,镜下可见血粉的特征。
血粉在镜下颗粒形状各异,有的边缘锐利,有的边缘粗糙不整齐。
颜色有紫黑色似沥青状,或者颜色为血红色晶亮的小球。
15、掺肉骨粉
鱼粉中掺肉骨粉,镜下可见肉骨粉的特征。
肉骨粉镜下为浅黄色至深褐色,含脂肪高的色泽深,颗粒有油腻感,表面粗糙,并可见肌肉纤维。
肌纤维较细,担相互联接。
骨质为较硬的白色、灰色或宗黄色的快状颗粒,不透明或半透明,带斑点,边缘圆钝。
次外还可见毛发、蹄角等附着物,经常可见混有血粉的特征。
(三)物理检验
1、鱼粉中掺有黻皮、花生皮、稻壳粉的检验
取3g鱼粉样品,置于100ml玻璃烧瓶中,加入5倍水,充分搅拌后,静置10~15分钟,麸皮、花生壳粉、稻壳粉因此比重轻,浮在水面上。
2、鱼粉中掺沙子的检验
取3g鱼粉样品,置于100ml的玻璃烧瓶中,加5倍水,充分搅拌后,静置10~15分钟,鱼粉、砂子均沉于底部,再轻轻搅拌,鱼粉即浮动起来,随水流;
转动而旋转,而砂子比重大,稍旋转即沉于杯底,此刻可观察到砂子的存在。
3、鱼粉中植物性蛋白质的检验
取适量鱼粉用火燃烧,如发出与纯毛发燃烧后相同的气味,则为鱼粉,而具有炒谷物的香味,则说明其中混杂了植物蛋白质。
4、鱼粉中掺羽毛粉的检验
将10g样品放入四氯化碳与石油醚的混合液(100
:
41.5,d=1.326g/cm3)中搅拌静置,上浮物多为羽毛粉(或海蜇废弃物)。
5、测容量法
粒度为1.5mm的纯鱼粉,容量约为550-600g/l,如果重量偏大或偏小,均不是纯鱼粉。
(四)化学检验
1、鱼粉中掺杂锯末(木质素)的检验
方法1将少量鱼粉置于培养皿中,加入浓度为95%的乙醇浸泡样品,再滴入几滴浓盐酸,若出现深红色,加水后深红色物质浮在水面,则说明鱼粉中掺有锯末物质。
方法2称取鱼粉1~2g,置于试管中,再加入10%的间苯三酚10ml,再滴入数滴浓盐酸,观察样品的样品的颜色变化,如其中有红色颗粒产生,则为木质素,即说明鱼粉中掺有锯末类物质。
2、鱼粉中掺有淀粉类物质的检验
可用碘蓝反应来鉴定。
取试样2~3g置于烧杯中,加入2~3倍水后,加热1分钟,冷却后滴加碘—碘化钾溶液(取碘化钾5g,溶于100ml水中,再加碘2g),若鱼粉中掺有淀粉类物质,则颜色变蓝,随掺入淀粉的增加,颜色由蓝色变紫。
3、鱼粉中掺入碳酸钙、石粉、贝壳、蛋壳粉的检验
可以用盐酸对碳酸钙的反应产生二氧化碳气体来判断。
取试样10g,放在烧瓶中,加入2ml盐酸,立即产生大量气泡,即为掺入了上述物质。
4、鱼粉中掺入纤维类物质的检验
如果怀疑鱼粉中掺入纤维类物质,可采用下述检方法:
取试样2~5g,分别用1.25%硫酸和1.25%氢氧化钠溶液煮沸过滤,干燥后称重。
纯鱼粉含纤维量极少,通常不超过1.0%。
5、鱼粉中皮革粉的检验
方法1取少许鱼粉样品于培养皿中,加入几滴钼酸铵溶液(以溶液浸没鱼粉为宜),静置5~10分钟,如不发生颜色变化则为皮革粉,如呈现绿色则为鱼粉。
钼酸铵溶液的配制称取5g钼酸铵,溶解于100ml蒸馏水中,再加入35ml的浓硝酸即可。
方法2取2g鱼粉样品,置于坩埚中,经高温灰化,冷却后用水浸润,加入2N硫酸10ml,使之呈酸性。
滴加数滴二苯基卡巴腙溶液,如有紫色红色物质产生,则有多铬存在,即说明鱼粉中有皮革粉。
2N硫酸的配制量取55ml浓硫酸,倾入有200ml左右的蒸馏水的烧杯中,再转入1000ml容量瓶中,稀释定容即可。
二苯基卡巴腙溶液的酸制称取0.2g二苯基卡巴腙,溶解于100ml90%的乙醇中。
本测定方法的原理基于皮鞣制过程中,采用铬制剂,通过灰化后,有一部分转变为六价铬,在强酸溶液中,六价铬与三苯基卡巴腙反应,生成紫色的水溶性二硫代卡巴腙化合物。
6、鱼粉掺有羽毛粉的检验
称取约1g试样于2个500ml三角烧杯中,一个加入1.25%硫酸溶液100ml,另一个加入5%氢氧化钠溶液100ml,煮沸30分钟后静置,吸取上清夜,将掺渣放在50~100倍显微镜下观察。
如果试样中有羽毛粉,用1.25%硫酸处理掺渣在显微镜下呈现一种特殊的形状,而5%倾氧化钠溶液处理后的残渣则没有种特殊形状。
7、鱼粉中掺入血粉的检验
被检鱼粉1~2g于试管中,加入5ml蒸馏水,搅拌,静置数分钟
后。
另取一支试管,先加连苯胺粉末少许,然后加入2ml冰醋酸,震荡溶解,再加入1~2ml过氧化氢溶液,将被检鱼粉的滤液徐徐注入其中,如两液接触面出现绿色或蓝色的环或点,表明鱼粉中含有血粉,反之,鱼粉中不含血粉。
本方法如不用滤纸,而用被检鱼粉直接徐徐注入溶液面上,在液面上及液面以下可见绿色或蓝色的柱或环,表明有血粉掺入,否则没有血粉掺入。
所需试剂冰醋酸、连苯胺粉末、3%过氧化氢溶液(现用现配)。
本方法原理鱼粉中铁质有类似过氧化酶的作用,可分解过氧化氢,放出新生态氧,使连苯胺氧化为连苯胺蓝,而呈绿色或蓝色。
8、鱼粉中掺尿素的检验
方法1称取10克样品于烧杯中,加入100ml蒸馏水中,搅拌,过滤,取滤液1ml于点滴板上,加2~3滴甲基红指示剂,再滴加2~3滴尿素酶溶液,经约5分钟,如点滴板上呈深红色,则说明样品中掺有尿素。
尿素酶溶液的配制称取0.2g尿素酶,溶解于100ml95%的乙醇中。
甲基红指示剂的配制称取甲基红0.1g,溶解与95%的乙醇中。
方法2无尿素酶药品时,则可用此方法检验。
取两份1.5g鱼粉于两支试管中,其中一支加入少许黄豆粉,两管各加入蒸馏水5ml振荡,置60-70℃恒温水浴中3分钟,滴6-7滴甲基红指示剂,若加黄豆粉的试管中出现较深紫红色,则说明鱼粉中有尿素。
方法3称取10g鱼粉样品,置于150ml三角瓶中,加入50ml的蒸馏水,加塞用力振荡2-3分钟,静置,过滤,取滤液5ml,于20ml的试管中,将试管放酒精灯上加热灼烧,当溶液蒸干时,可嗅到强烈的氨臭味。
同时把湿润的PH试纸放在管口处,试纸立即变成红色,此时pH值高达近14。
如有纯鱼粉则无强烈的氨嗅味,置于管口处的pH试纸稍有碱性反应,显微蓝色,离开管口处则慢慢退去。
9、鱼粉中掺入双缩脲的检验
称取鱼粉试样2g,加20ml蒸馏水,充分搅拌,静置10分钟,干燥滤纸过滤,取滤液4ml于试管中,加6mol/l氢氧化钠溶液1ml,再加入1.5%CaSO4溶液1ml,摇匀,立即观察,溶液呈蓝色者鱼粉为没有掺入双缩脲,若呈紫红色,则鱼粉中掺有双缩脲,红色越深,掺入双缩脲的比例越大。
10、依据常规检验结果鉴别鱼粉掺假
通过测定粗蛋白、纯蛋白、粗纤维、粗脂肪、粗灰分及淀粉等项指标,可以准确识别鱼粉成分的真伪。
掺有尿素的鱼粉,因为含有大量的非蛋白氮,所以测定粗蛋白值很高,而真蛋白值却很低,掺入植物蛋白原料后,真蛋白虽然很高,但脂肪和淀粉含量相对增加;
掺入植物秸秆粉后,纤维含量增高;
掺入风化土,灰分境增加。
11、纯/粗蛋白比值鉴别鱼粉掺假
甲醛—尿素聚合物是常见的非蛋白氮掺入物,由于尿素以聚合物的形式存在,故用测定游离尿素的方法无法检出。
目前多根据纯/粗蛋白比值来推断是否掺有这类高氮化合物。
一般认为用纯/粗蛋白的比值80%即没有掺入高氮聚合物。
纯/粗蛋白的测定方法
(1)纯蛋白的测定原理
蛋白质与重金属盐类在碱性条件下,由于盐析作用而沉淀下来,而非蛋白氮则易溶于水,故可用热水将水溶性含氮化合物洗去,用凯氏定氮法测定沉淀物,即可得出纯蛋白的含量。
若得出的纯/粗蛋白的比率小于80%,则可判断为鱼粉中掺这类非蛋氮化合物。
(试剂)
6%硫酸铜溶液称取30.0gCuSO4,加水溶解,并稀释至500ml。
1.25%氢氧化钠溶液称取6.25g氢氧化钠,加水溶解,并稀释至500ml。
0.05mol/L盐酸标准溶液。
(3)仪器
半微量定氮仪
(4)测定步骤
精确称取鱼粉样品1g左右,置于250ml烧杯,加入100ml水(指去离子水,下同),于电炉上加热煮沸,加入25ml6%CuSO4溶液,再在搅拌下,缓缓加入25ml1.25%NaOH溶液,摇匀。
从电炉上取下,室温放置2小时,用11cm中速定性滤纸倾注法过滤。
并用少量水多次洗涤烧杯和沉淀物,直至洗出液无SO42-离子。
于80℃干燥箱烘至略潮,小心卷起滤纸成棒状,连沉淀物一起移入250ml凯氏烧瓶中,加入浓硫酸20ml,3.5gK2SO4和0.5gCUSO4,摇匀。
置电炉上小心消化至澄清透明,继续加热半小时,取下冷却,小心加入50ml水,放冷,移入100ml容量瓶中,用少量水多次洗涤烧瓶,洗液并入容量瓶,再补水至刻度。
蒸馏、滴定同粗蛋白。
(4)粗蛋白测定同国标法。
(5)计算
纯/粗蛋白%=
×
100%
付一鱼粉中掺尿素的定量测定
方法一
1.试剂
对二甲氨基苯甲醛(PMAB)溶液称取3.2g,PMAB,用200ml乙醇溶解,再加入20ml盐酸,该溶液在1个月内稳定。
醋酸锌溶液称取22.0g醋酸锌溶于水,加3ml醋酸,再用水稀释至100ml。
亚铁氰化钾溶液称取0.6g亚铁氰化钾溶于水并稀释至100ml。
活性炭。
磷酸盐缓冲液(pH7.0)称取3.403g无水磷酸二氢钾和4.355g无水磷酸氢二钾分别溶于约100ml水中,合并两面三刀溶液并稀稀释至1000ml,作为储备液。
分别吸取1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml、储备液于50ml容量瓶中,用磷酸缓冲液定容,则尿素工作液浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、120ug/ml、160ug/ml、200ug/ml、240ug/ml。
2.仪器分析天平;
振荡机;
分光光度计;
恒温水浴;
具塞试管;
三角瓶。
3.测定步骤
(1)工作曲线的绘制吸取各浓度尿素工作液5ml置于试管中(空白管为5ml磷酸缓冲液),各加入对二甲氨基苯甲醛溶液5ml,轻轻摇匀后置于25℃水浴中10分钟,在420nm处读取各溶液吸光值。
以尿素浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制工作曲线或作回归方程。
(2)样品的测定
称取2g试样(精确至1mg)置于300ml三角瓶中,加2g活性炭,190ml水,50ml醋酸锌溶液和5ml亚铁氰化钾溶液,震荡提取30分钟,待完全沉淀后过滤。
取5ml滤液于试管中,加入5ml二甲氨基苯甲醛溶液,充分振荡后置于25℃水浴中10分钟,此时于420nm波长下读取吸光度值。
对照液为5ml磷酸缓冲液,加入5ml对二甲氨基苯甲醛溶液,充分振摇后置于25℃水浴中10分钟,此时于420nm波长下读取吸光度值。
对照液为5ml磷酸缓冲液,加5ml对二甲基甲醛溶液,按照试样溶液的同样方法操作。
4.计算
D×
0.2
尿素(%)=——×
100%。
W
式中:
D——从工作曲线上计算出待测溶液浓度(µ
g/ml);
W——试样重量,g。
方法二
1.原理
尿素在酸性条件下与二乙酰—肟和硫代氨基脲共煮,二乙酰—肟分解成二乙酰与尿素形成二嗪衍生物的复合物。
该复合物颜色的深浅与尿素的含量成正比,在540nm波长处测定其吸光度,与标准比较定量。
2.试剂
酸性试剂吸取44ml浓硫酸,66ml浓磷酸加于盛有600m