双甲脒有关物质气相分析方法验证方案Word文档格式.docx
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信噪比S/N在10-15范围内对应的杂质浓度为定量限。
线性及范围
杂质对照浓度的60%,80%,100%,120%,140%范围内线性相关系数不小于0.99。
准确度
在杂质对照浓度80%,100%,120%三个浓度点下,平均回收率在80%-120%范围内;
各回收率的RSD不大于10.0%。
RSD=
精密度
重复性
连续检测6次对照溶液,6针对照图谱中各个杂质峰面积的RSD值不大于5.0%
中间精密度
由两个人在不同时间不同的仪器上对同一批产品分别检测6次,杂质含量12次检测结果的RSD不大于25.0%。
方法耐用性
色谱条件发生微小变动时,方法仍适用于样品检测,对照图谱中各个杂质之间的分离度不小于1.5;
连续6针对照各个杂质峰面积不大于5.0%。
溶液稳定性
样品溶液放置一段时间后,杂质含量的绝对值在±
0.1%以内,并不得出现新的大于报告限度的杂质,则认定该时间内样品溶液是稳定的。
2.参考资料
ICHQ2(R1);
EP<
467>
;
USP<
20424>
.
3.色谱条件和分析过程
3.1色谱条件
仪器:
GC,型号:
检测器:
UV,波长:
nm
色谱柱:
石英毛细管柱(规格10m×
0.53mm),柱壁涂布5μm的聚硅氧烷[95%甲基,5%苯基]固定相(毛细管柱ChrompackCP-SiL8CB可用)
柱温:
起始柱温125℃,保持在125℃5分钟,然后开始以5℃每分钟的速度线性上升到270℃,然后保持270℃15分钟,进一步升温至230℃。
进样口温度:
230°
C
检测温度:
300°
载气:
N2
流速:
12mL/min
进样量:
1μL
3.2分析过程
✧溶液配制
杂质a(2,4-二甲基苯胺)贮备液:
精密称取2,4-二甲基苯胺250mg于250ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容,浓度为0.1%(W/V)。
(注意闭光冷藏保存)。
杂质b(2,4-二甲基代苯胺)贮备液:
精密称取2,4-二甲基代苯胺200mg于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得,浓度为2.0%(W/V)。
杂质d[N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒]贮备液:
精密称取N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得,为2.0%(W/V)。
溶液A的制备:
分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容,得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。
(注:
如没有配制杂质b、杂质d贮备液,则溶液A的制备方法为:
分别精密称取20mg的杂质b和20mg的杂质d于同一10ml容量瓶中,并将精密量取1ml杂质a贮备液加入其中,加乙酸甲酯定容即可)。
溶液B的制备:
精密称取30mg的杂质c[N-甲基-N’-(2,4-二甲苯基)甲脒]溶解于5ml的乙酸甲酯中,加入32mg的三乙胺,用超声波混合2分钟,过滤,用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗,最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。
对照溶液的制备:
等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。
供试品溶液的制备:
精密称取500mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可,溶液浓度为5.0%(W/V)。
✧进样程序
在色谱条件平衡的条件下,分别进1针空白溶液(乙酸甲酯),6针对照溶液,2针供试品溶液,1针对照溶液记录色谱图。
✧计算公式
杂质a=
100%=
杂质b=
杂质c=
杂质d=
式中:
A样:
样品溶液中杂质的峰面积;
C标:
对照溶液中对应杂质的浓度,%;
A标:
对照溶液中对应杂质的峰面积。
✧系统适用性要求
连续6针对照各杂质的峰面积的RSD不大于5.0%。
4.器材和试剂
4.1器材
仪器名称
型号
编号
生产厂家
校正有效期
气相色谱仪
分析天平
物理天平
移液管
容量瓶
4.2试剂
名称
批号
级别
厂家
有效期/复验期
乙酸甲酯
三乙胺
杂质a(2,4-二甲基苯胺)
杂质b(2,4-二甲基代苯胺)
杂质c[N-甲基-N’-(2,4-二甲苯基)甲脒]
杂质d[N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒]
5.验证内容
5.1系统适用性
5.1.1目的
对由分析设备,试验操作,被分析产品组成的系统进行评估,确定该方法在该系统条件下是可适用的。
5.1.2实际操作:
精密称取2,4-二甲基苯胺mg于250ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容,浓度为0.1%(W/V)。
精密称取2,4-二甲基代苯胺mg于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得,浓度为2.0%(W/V)。
精密称取mg的杂质c[N-甲基-N’-(2,4-二甲苯基)甲脒]溶解于5ml的乙酸甲酯中,加入mg的三乙胺,用超声波混合2分钟,过滤,用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗,最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。
分别移取空白溶液(乙酸甲酯),供试品空白溶液和对照溶液注入色谱仪中,分别进针1次,1次和6次,记录色谱图,计算连续6针对照图谱中双甲脒峰面积的RSD值。
5.1.3接受标准:
连续6针对照图谱中各杂质峰面积的RSD值不大于5.0%。
5.1.4验证结果:
表1:
系统适用性验证结果
序号
杂质a峰面积
杂质b峰面积
杂质c峰面积
杂质d峰面积
1
2
3
4
5
6
平均峰面积
RSD(%)
结论:
5.2专属性
5.2.1目的:
对分析方法准确可靠测定被分析物的能力进行测试。
5.2.2实际操作:
精密称取N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒mg于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得,为2.0%(W/V)。
分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各ml于同一10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容,得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。
溶液B的制备(杂质c溶液):
精密称取mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可,溶液浓度为5.0%(W/V)。
混合溶液的制备:
分别取溶液A和溶液B适量,与同体积的供试品溶液混合。
(V:
V:
V=1:
1:
1)
分别取空白溶液,杂质a溶液,杂质b溶液,杂质c溶液,杂质d溶液和混合溶液注入气相色谱中,记录色谱图。
5.2.3接受标准:
溶液乙酸甲酯对双甲脒的检测没有影响;
混合溶液中各峰的分离度不小于1.5;
样品溶液中可能存在的降解杂质对双甲脒的检测没有影响。
5.2.4验证结果:
表2-1:
专属性验证结果-单独溶液中各峰的相对保留时间
相对保留时间
杂质a
杂质b
杂质c
杂质d
双甲脒
RT(min)
表2-2:
专属性验证结果-混合溶液中各杂质分离度
项目
相对保留时间(min)
与相邻峰的分离度
5.3检测限、定量限
5.3.1目的:
确定该方法在一定的条件下最小能够检测到的被分析物的浓度为多少,以及最小能够定量的被分析物的浓度为多少。
5.3.2实际操作:
杂质a储备液的配制:
精密称取杂质a对照品mg于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后,摇匀。
杂质a检测限溶夜:
精密移取mL杂质a储备液于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。
逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中,信噪比S/N在3-5之间。
杂质a定量限溶液:
逐步稀释到溶液进样后双甲脒图谱中,信噪比S/N在10-15之间,一般为检测限浓度的3倍。
杂质b储备液的配制:
精密称取杂质b对照品mg于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后,摇匀。
杂质b检测限溶夜:
精密移取mL杂质b储备液于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。
杂质b定量限溶液:
杂质c储备液的配制:
精密称取杂质c对照品mg于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后,摇匀。
杂质c检测限溶夜:
精密移取mL杂质c储备液于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。
杂质c定量限溶液:
杂质d储备液的配制:
精密称取杂质d对照品mg于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后,摇匀。
杂质d检测限溶夜:
精密移取mL杂质d储备液于mL的容量瓶中,加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。
杂质d定量限溶液:
取空白溶液(甲酸乙酯)注入气相色谱仪连续检测3次,然后分别取检测限溶液和定量限溶液注入色谱仪,检测限溶液连续进样3次,定量限溶液连续进样5次。
5.3.3验证结果:
表3-1:
基线信噪比
基线噪声
表3-2:
检测限
杂质名称
浓度(μg/mL)
S/N
S/N平均
浓度(ppm)
表3-3:
定量限
RSD,%
5.4线性和范围
5.4.1目的:
确定设计的范围内,测试结果与被测物浓度呈正比关系的程度。
5.4.2实际操作:
精密称取2,4-二甲基苯胺mg于250ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容,浓度为0.2%(W/V)。
精密称取2,4-二甲基代苯胺mg于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得,浓度为4.0%(W/V)。
精密称取N,N’-双(2,4-二甲苯基)甲脒200mg于10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得,为4.0%(W/V)。
分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中,加乙酸甲酯定容,得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.40%(W/V)的溶液。
精密称取mg的杂质c[N-甲基-N’-(2,4-二甲苯基)甲脒]溶解于5ml的乙酸甲酯中,加入32mg的三乙胺,用超声波混合2分钟,过滤,用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗,最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.2%左右)。
200%对照溶液制备:
精密量取等体积的溶液A和溶液B混合。
精密量取等体积的200%对照溶液和乙酸甲酯混合。
60%对照溶液的配制:
精密量取ml200%对照溶液于mL容量瓶中,用乙酸甲酯稀释至刻度。
(备注:
例如量取3ml稀释至10ml)
80%对照溶液的配制:
精密量取ml对照溶液于mL容量瓶中,用乙酸甲酯稀释至刻度。
例如量取4ml稀释至10ml)
100%对照溶液的配制:
例如量取5ml稀释至10ml)
120%对照溶液的配制:
例如量取6ml稀释至10ml)
140%对照溶液的配制:
例如量取7ml稀释至10ml)
分别取空白溶液(乙酸甲酯)、对照溶液、60%-120%对照浓度溶液、对照溶液1注入色谱仪。
空白进样1次,对照溶1进6针,60%-120%对照溶液分别进样1针,对照溶液进1针。
记录色谱仪,并计算线性方程和线性相关系数。
5.4.3接受标准:
线性方程的线性相关系数不小于0.99。
5.4.4验证结果:
表4-1:
杂质a线性验证结果
溶液名称
杂质a浓度(mg/mL)
对照溶液中杂质a峰面积
杂质a含量(%)
对照溶液1
60%对照溶液
80%对照溶液
100%对照溶液
120%对照溶液
线性方程
线性相关系数
表4-2:
杂质b线性验证结果
杂质b浓度(mg/mL)
对照溶液中杂质b峰面积
杂质b含量(%)
表4-3:
杂质c线性验证结果
杂质c浓度(mg/mL)
对照溶液中杂质c峰面积
杂质c含量(%)
表4-4:
杂质d线性
杂质d浓度(mg/mL)
对照溶液中杂质d峰面积
杂质d含量(%)
5.5准确度
5.5.1目的:
考察分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。
5.5.2实际操作:
空白供试溶液1的制备:
空白供试溶液2的制备:
空白供试溶液3的制备:
80%-1加样溶液的配制:
精密称取mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中,加如ml200%对照溶液,然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。
(备注加上4ml)
80%-2对照溶液的配制:
精密称取mg的双甲脒供试样品于10ml容量瓶中,加如ml200%对照溶液,然后用乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可。
80%-3对照溶液的配制:
100%-1对照溶液的配制:
(备注加上5ml)
100%-2对照溶液的配制:
100%-3对照溶液的配制:
120%-1对照溶液的配制:
(备注加上6ml)
120%-2对照溶液的配制:
120%-3对照溶液的配制:
5.5.3接受标准:
单一回收率应在80%~120%之间;
各浓度水平内的回收率及各浓度水平回收率平均值之间的RSD不大于10.0%。
5.5.4验证结果:
表5-1:
杂质a的加样回收率验证结果
加入杂质a的浓度
空白公式样品中杂质a的平均含量
杂质a的面积
检测到的杂质a含量,%
实际回收的杂质a的含量,%
实际回收的杂质a的浓度
回收率,%
对照溶液
80%-1对照溶液
100%-1对照溶液
100%-2对照溶液
100%-3对照溶液
120%-1对照溶液
120%-2对照溶液
120%-3对照溶液
回收率RSD,%=
表5-2:
杂质b的加样回收率验证结果
加入杂质b的浓度
空白公式样品中杂质b的平均含量
杂质b的面积
检测到的杂质b含量,%
实际回收的杂质b的含量,%
实际回收的杂质b的浓度