遗传学实验报告总结Word文件下载.docx
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5、酶解：
加入2.5％纤维素酶和2.0％果胶酶水溶液，在37℃酶解处理70－120min（根据软化程度而定）。
6、后低渗：
倒去酶液后用蒸馏水冲洗2－3次，在水中停留30min以上，即可直接用于制片。
也可换入固定液保存。
7、火焰干燥制片：
放2－3个根尖在载片上，加一小滴固定液，用镊子将根尖敲碎至浆状。
再滴2－3滴固定液，迅速用镊子夹住载片在酒精灯火焰上加热至着火，然后吹灭火焰。
载片在空气中自然干燥。
8、染色：
Giemsa染色液染色，1－3h。
自来水冲洗，晾干。
步骤2：
（本实验内容）
7、切去根冠，后取根尖1-2mm，加入一小滴染色剂，用镊子将根尖敲碎至浆状。
染色10-15分钟。
8、染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。
将片子放在实验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次，（注意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉。
）挤压出多余染液，然后置于显微镜下观察（先10x，找到分裂相后，40x观察记录）。
五、作业
1、制备分散良好的染色体制片。
2、绘出有丝分裂各时期的简图（中、后期）。
解：
有丝分裂各时期简图如是：
后期
中期
末期
如图中标示，染色体整齐排列在赤道板上的是有丝分裂中期的细胞，而染色体趋向于细胞两极，并有纺锤体牵引的是分裂后期的细胞，染色体完全分布在细胞两极，并中间可见模糊的凹陷即为末期分裂细胞。
六．实验分析
1.在此实验中，取材是关键步骤，去掉顶端1mm的根尖，取下方2mm左右的位置，进行切割，会利于后续有丝分裂的全过程观察，若是取材过于靠下，会取到伸长区的细胞，就无法观察有丝分裂现象，造成实验失败。
2.染色时间应该尽量控制在10—15min中内，过短着色过浅，过长则不利于观察细胞有丝分裂各时期。
3.染色完成后，要进行压片处理，用大拇指横向压几下，在用解剖针的背面轻击使细胞均匀分散，避免盖玻片移动，否则会使得分散的染色体聚集或者破坏染色体排布情况。
由于操作不甚熟练，所以实验重复了两次，不过最终取得了较满意的结果。
实验2
植物减数分裂染色体制片与观察
一、实验目的
1.掌握花粉母细胞染色体制片技术；
2.了解减数分裂过程中染色体的变化特征。
3.增强对植物细胞减数分裂的感性认识，进一步加深对减数分裂的理解。
二、实验原理
1.减数分裂的概念理解。
2.
减数分裂过程中的染色体变化的特点。
3.减数分裂的遗传学意义。
4.由于植物花药取材容易，操作方便，一般作为减数分裂制片材料，在发育的适宜时期取样、固定、压片等程序，便可在显微镜下观察到减数分裂时染色体的行为变化。
黑麦幼穗
镊子、载玻片、盖片、解剖针、吸水纸
醋酸洋红、改良卡诺固定液（95%乙醇∶冰醋酸=3∶1）
四、实验步骤（本实验从第3步骤进行）
1．取材：
选取适宜的小花或小穗，是实验的关键。
不同材料鉴别方法不同。
一般在9－11时固定，不需预处理。
黑麦：
在旗叶挑出后，旗叶与倒二叶的叶耳间距为3-4cm左右时，花药黄绿色，即处于减数分裂时期。
如花药为绿色时则为时过早，花药为黄色，则已过时。
一般上午8-10点为取材最佳时间。
2．固定：
将所取的幼花序立即放入改良卡诺固定液中固定2－24小时。
经95％、80％酒精冲洗后，保存于70％酒精中保存备用。
（1）迅速防止细胞死亡后的变化,防止自溶、腐败，尽量保持生长状态结构。
（2）使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。
（3）使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定。
（4）使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。
（5）防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
3．制片：
取一小穗置载片上，用解剖针取出花药，根据花药大小横切3-4段（或加以纵切），加1滴醋酸洋红（或改良苯酚品红）染液。
用解剖针轻压花药，使花粉母细胞从切口出来。
静置染色5-10分钟。
去除残存的花药壁，加盖玻片，使染色液刚好布满，在盖玻片与载玻片之间成一薄层（不能过多，以防止花粉母细胞溢出盖玻片的边缘）。
观察分裂相
4．烤片：
用镊子夹住载片，在酒精灯上来回移动，并不时将片子放在手背上试温，以不烫手为宜。
经烤片后，细胞质颜色减退，使染色体得到充分鲜明的着色。
5．置换：
若染色太深，可从盖片一侧滴加45％冰醋酸，在另一边用滤纸吸，让冰醋酸从盖片下流过，置换出染液，使细胞质背景颜色变浅。
（此步骤略）
6．压片：
在盖片上覆以滤纸，用拇指均匀用力压下，勿使盖片移动。
7.镜检：
低倍观察，高倍绘制观察简图。
五、作业
1.记录观察到的时期，绘成简图。
2.固定的目的什么？
答:
固定操作为：
目的如下：
五．实验分析与总结
本实验在取花粉母细胞时，应用解剖针轻压横切过的花药，使其从切口流出，在进行染色，此时应小心花粉母细胞被冲走。
同时染色时间要严格把握，避免染色过长对细胞造成伤害。
观察时，发现大量处在减数分裂Ⅰ后期的细胞，中期细胞相对较少，不易观察，这可能和取材的时间有关。
实验操作时，应该注意压片的轻重和用力均匀，保证细胞分散开来，清晰观察。
附：
1％醋酸洋红配制：
称取1克洋红，加入100ml45%醋酸，煮沸1小时，保存备用，用时过滤。
加Fe（Ac）3媒染剂或放一生锈的铁钉，染色效果好。
实验3果蝇形态观察
1.了解果蝇生活史中各个不同阶段的形态特点；
2.区别雌雄果蝇以及几种常见突变类型的主要性状特征；
3.掌握实验果蝇的饲养、管理及实验处理方法和技术。
二、实验材料、用具及试剂
双目解剖镜、放大镜、小镊子、麻醉瓶、白瓷板、新毛笔、乙醚、酒精
成虫
卵蛹
一龄幼虫三龄幼虫
二龄幼虫
三、实验内容
1.果蝇的生活史
果蝇属于昆虫纲，双翅目，果蝇属，与家蝇是不同的种。
果蝇的生活周期长短与温度关系很密切。
30℃以上的温度能使果蝇不育和死亡，低温则使它的生活周期延长，同时生活力也降低，果蝇培养的最适温度为20-25℃。
10℃
15℃
20℃
25℃
卵→幼虫
8天
5天
幼虫→成虫
57天
18天
6.3天
4.2天
从表中可以看出，25℃时，从卵到成虫约10天；
在25℃时成虫约活15天。
卵：
羽化后的雌蝇一般在12小时后开始交配，两天后才能产卵。
卵长0.5mm，为椭圆形，腹面稍扁平，在背面的前端伸出一对触丝，它能使卵附着在食物（或瓶壁）上，不致深陷到食物中去。
幼虫：
从卵孵化出来后，经过两次蜕皮，发育成三龄幼虫，此时体长可达4-5mm。
肉眼可见其前端稍尖部分为头部，上有一黑色斑点即为口器。
口器后面有一对透明的唾液腺，透过体壁可见到一对生殖腺位于躯体后半部上方的两侧，精巢较大，外观上是一明显的黑点，而卵巢则较小，可以此作为鉴别。
幼虫活动力强而贪食，它们在培养基上爬行时，留下很多条沟，沟多而且宽时，表明幼虫生长良好。
蛹：
幼虫生活7-8天准备化蛹，化蛹前从培养基上爬出，附着在瓶壁上，逐渐形成一梭形的蛹.在蛹前部有两个呼吸孔，后部有尾芽，起初蛹壳颜色淡黄而柔软，以后逐渐硬化，变为深褐色，表明即将羽化了。
成虫：
幼虫在蛹壳内完成成虫体型和器官的分化，最后从蛹壳前端爬出。
刚从蛹壳里羽化出来的果蝇虫体比较长，翅膀尚未展开，体表尚未完全几丁质化，故呈半透明的乳白色。
透过腹部体壁，可以看到黑色的消化系统。
不久，变为短粗圆形，双翅展开。
体色加深。
如野生型初为浅灰色，然后呈灰褐色。
2.形态构造
头部：
有一对复眼，三个单眼和一对触角。
胸部：
有三对足，一对翅和一对平衡棒。
腹部：
背面有黑色环纹，腹面有腹片，外生殖器在腹部末端，全身有许多体毛和刚毛。
3.成虫雌雄的鉴别
雌果蝇
雄果蝇
体形较大
体形较小
腹部椭圆形，末端稍尖
腹部末端钝圆
腹部背面有明显的五条黑色条纹
腹部背面有三条黑色花纹，前两条细，后一条宽且延续至腹面
腹部腹面有明显的6个腹片（刚毛围成一圈）
四个腹片
无性梳
第一对跗节基部的一节有性梳
外生殖器外观比较简单
外生殖器外观较复杂，刚羽化的幼蝇用低倍镜可明显观察到生殖弧、肛口板及阴茎
4.果蝇常见的几种突变类型
果蝇常见突变形状特征
突变形状名称
基因符号
形状特征
所在染色体
白眼
w
复眼白色
X
棒眼
B
复眼横条形
黑檀体
e
体呈乌木色，黑亮
ⅢR
黑体
b
体呈深色
ⅡL
黄身
y
体呈浅橙黄色
残翅
vg
翅退化，部分残留不能飞
ⅡR
焦刚毛
sn
刚毛卷曲如烧焦状
小翅
m
翅较短
四、果蝇的性别决定
1.染色体组成果蝇为二倍体2n=8,
核内有丝分裂：
不涉及细胞分裂和核分裂的染色体分裂方式。
体联会：
一些特殊的体细胞中（如果蝇唾腺细胞）的染色体经多次复制却不分开，依旧紧密地排列在一起就象减数分裂中的联会现象一样。
染色体组：
来自二倍体生物的正常配子的所有染色体。
连锁群：
来自配子中的每条染色体及其携带的基因。
雌雄基因平衡理论：
对果蝇而言，X染色体上有决定雌性的基因，常染色体上有决定雄性的基因存在，其比值决定果蝇的雌或雄，Y染色体只与育性有关，而与性别无关。
2.果蝇的性别决定
果蝇的性别决定为XY型，Y染色体在性别决定上不起作用，只与育性有关。
含有Y染色体，可产生正常的配子，不含Y染色体，则配子不育。
性别决定与性比值（性指数）有关。
X/A=1则为雌性；
X/A=0.5则为雄性。
X/A＞1，为超雌；
X/A＜0.5，则为超雄；
0.5＜X/A＜1则为中间性。
果蝇X染色体上有很多雌性基因，常染色体上有很多雄性基因，Y染色体上很少或没有与性别决定有关的基因，因此性别决定于基因的平衡。
3.果蝇的连锁群
X染色体上有141个基因；
第2染色体上有228个基因；
第3染色体上有156个基因；
第4染色体上有12个基因。
4.同源染色体：
来源相同、结构相似、控制的形状相同，在减数分裂中配对的一对染色体。
五、实验步骤
实验1：
性状观察
①.麻醉②.形态观察③.观察结果
实验2：
性别鉴定
①.麻醉②.性别鉴定③.观察结果
六．实验结果与讨论
1.性状观察结果如下：
性状
类型
e#
22#
2#
18#
体色
黑色
黄色
灰色
眼色
红色
白色
翅形
长翅
在进行果蝇形态学观察时，可以多加一点丙醇，使果蝇完全麻醉，利于后续的稳定观察
2.性别鉴定的方法：
性别
体形
腹部末端
腹部背面条纹
腹片
腹部腹面有明显的6个腹片
性梳
在用显微镜鉴别果蝇的性别时，由于果蝇体积较大，故需要不断的调整焦距和光线强弱，来观察果蝇的各个部位。
而实验材料当中，雌性果蝇居于大多数，因此，在观察雄性果蝇的性梳时，不易调整出来。
所以掌握果蝇的外部形态的基本判别方法，进行初次的预判，再利用显微镜进行性梳鉴别，就会大大提高实验效率。
果蝇培养基的配置（1000ml用量）
玉米面
红糖
琼脂
干酵母
正丙酸
85g
65g
8.5g
7g
5ml
水溶琼脂→加红糖→加搅好的玉米面→煮沸→加水到1000ml→冷却→50℃左右加入酵母粉→加入正丙酸（防腐剂）。
培养瓶处理：
150℃，3min干热灭菌（带瓶塞）。
实验4果蝇唾腺染色体的观察
1.练习取出果蝇等幼虫唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法。
2.根据唾腺染色体上带纹的形态和排列识别不同的染色体，进一步研究和鉴别果蝇染色体结构变异的方法。
二、果蝇唾腺染色体的有关知识
1.发现
1881年，意大利的细胞学家巴尔比尼（Balbiani）在双翅目昆虫摇蚊幼虫的唾腺细胞间期核中发现了一种巨大的染色体，由于存在于唾腺细胞中，所以又称为唾腺染色体。
1933年，美国学者贝恩特（Painter）等又在果蝇核其它双翅目昆虫的幼虫唾腺细胞间期核中发现了巨大染色体。
这种染色体宽约5μm，长400μm，相当于普通染色体的100-150倍，因而又称为巨大染色体。
2.原因
（1）染色体螺旋化程度不高。
（2）果蝇幼虫的唾腺细胞在发育过程中，细胞核内的DNA多次复制，但细胞、细胞核不分裂，复制后的染色单体DNA也不分开，形成了多线染色体。
（3）同源染色体相互靠拢在一起呈现一种联会状态，使其比一般的体细胞染色体粗大。
3.基本概念
不伴随核分裂和细胞分裂的染色体分裂。
核内复制；
不伴随细胞内核分裂的染色体复制现象。
唾腺细胞中的染色体复制后，所有同源染色体一直处于紧密配对的前期状态，如同减数分裂的联会，这种现象称为体联会。
4.果蝇的染色体组成
由于在唾腺细胞中8条染色体之间以着丝粒相互连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会，经碱性染料染色后，可以观察到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5条染色体臂。
在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称为明带和暗带的横纹，这些横纹的位置、宽窄、数目都具有物种的特异性，不同物种，不同染色体的不同部位形态和位置是固定的，因此根据染色体各条臂带纹特征和各条臂端部带纹的特征能准确识别各条染色体。
在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环，其富含转录出来的RNA，因此不着色，是基因活动的区域。
在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染色体上出现的部位不同，因此可以研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。
果蝇共有4对染色体。
其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；
第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体，呈“V”形；
第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘。
由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；
而第二对、第三对染色体着丝粒在中央，可以从异染中心呈“V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R）和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。
雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。
在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。
（1）果蝇染色体有102个区，每个区又有A—F六个亚区，每个亚区又有1,2,3……等亚亚区。
（2）疏松区有许多灯刷状物质（灯刷染色体）
（3）唾腺染色体的末端有不同的特征，可以借此来鉴别各条染色体。
5.特点
（1）巨大；
（2）体联会现象决定了染色体只有半数；
（3）各个染色体中异染色质多的着丝粒部分相互靠拢形成染色中心；
（4）横纹有深浅、数目、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列，具有种的特异性。
（5）多线染色体（与中期高度螺旋的染色体相区别）若有缺失、易位、倒位、重复等现象，很容易在唾腺染色体上识别出来。
三、幼虫的培养
发育充足、肥大的三龄幼虫，唾腺和唾腺细胞发育良好。
利用这样的唾腺细胞才能制备出理想的染色体玻片标本。
因此要求培养基营养丰富，含水量较高，比较松软，发酵良好。
将果蝇放入培养瓶中（果蝇不应过多，半磅牛奶瓶10对左右）于15-18℃的稍低温度条件下培养，接种12小时后，将成虫移出，控制成虫的排卵持续时间，以免产生过多的卵（要求每cm2培养基表面20-40只幼虫），一龄幼虫出现后，每天在培养基表面滴加2-4.5%的酵母液或鲜酵母。
2-3龄幼虫应滴加10%左右的酵母液，滴加的量以覆盖在培养基表面薄薄一层为宜。
待三龄幼虫大量爬出培养基时，也可将培养瓶移至3-5℃冰箱中进行低温处理，不让其化蛹。
这样的幼虫活动慢，易解剖出唾腺，而且可以获得染色体分散良好的制片。
四、实验步骤
1.剥离唾腺：
在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。
由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持镊子或解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）。
去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。
2.解离：
在唾腺组织上滴一滴1NHCl，解离1-2min，以松软组织，利于染色体的分散。
（略）
3.染色：
吸去
HCl，用水冲洗2-3次后滴加醋酸洋红染液染色10min。
4.压片：
染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。
将片子放在实验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次。
（注意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉。
）
5.镜检：
五、注意事项
1.一定加生理盐水，否则唾腺易干。
2.将脂肪组织清除干净。
3.水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。
4.染色时间不可过长，否则背景也着色。
5.压片时要揉。
6.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。
所需药品及材料
三龄幼虫0.7%生理盐水1NHCl碱性品红解剖镜解剖针吸水纸
六、实验结果
唾液腺染色体的镜检图
七、分析与讨论
由于在唾液腺细胞中8条染色体之间以着丝粒互相连结在一起形成染色盘和同源染色体之间的假联会，经碱性染料染色后，可以观察到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5条染色体臂。
我们观察到的果蝇唾液腺细胞的染色体特别大，是因为此时唾液腺细胞中的染色体刚好处于同源染色体配对的阶段，同时，唾液腺细胞没有分裂能力，所以染色体即大又集中。
实验5
果蝇的伴性遗传
通过果蝇野生型和白眼突变型遗传杂交实验，了解由性染色体上基因所控制的性状分离规律，以及伴性遗传在正反交中的差异。
伴性遗传是由性染色体上基因所决定的某些性状总是伴随性别而遗传的现象。
例如，果蝇野生型红眼（X+）和突变型白眼（Xw）是一对相对性状，X+对Xw是显性。
将显性纯合的红眼雌蝇（X+X+）与白眼雄蝇（XwY）杂交，F1不论雌雄均表现为红眼。
F1雌雄个体互交，F2红眼与白眼的比例为3：
1，但无白眼雌蝇。
另以白眼雌蝇和红眼雄蝇杂交，F1雄蝇表现为母本的白眼性状，而雌蝇表现为父本的红眼性状，呈交叉遗传。
F1雌雄个体互交，F2红眼与白眼的比例1：
1，其中雌雄蝇各占一半，这是伴性遗传的特征。
三、实验材料
果蝇野生型红眼品系（♀：
X+X+，♂：
X+Y）和突变型白眼品系（♀：
XwXw，♂：
XwY）。
四、实验用具、药品
放大镜、培养瓶、麻醉瓶、白瓷板、标签、毛笔
玉米粉、酵母粉、蔗糖、丙酸、琼脂、蒸馏水。
五、实验步骤
1、亲本饲养
将红眼雌雄果蝇及白眼雌雄果蝇分别近亲交配，每瓶放5对，置于
20-25℃恒温箱中饲养。
2、收集处女蝇
杂交前2-3天将亲本果蝇和已羽化的成蝇全部移出，以后每隔6-8h对新羽化的果蝇用雌雄鉴别，并分开单独饲养，收集备用。
3、杂交
一组取红眼处女蝇和白眼雄蝇各3只，放入培养瓶中作正交组合：
红眼（♀）×
白眼（♂）；
另一组取白眼处女蝇和红眼雄蝇各3只，放入培养瓶中作反交组合：
白眼（♀）。
贴上标签，注明组合名称、杂交日期、实验者姓名，置于20-25℃恒温箱中饲养。
4、观察统计
杂交7-8天后，从培养瓶中移去亲本，15-20天后F1幼虫先后化蛹羽化成蝇，观察记录F1个体的性别和眼色，统计后的果蝇即可投入死蝇盛留器中。
六、实验作业
1、将果蝇伴性遗传杂交实验的观察结果填入上表。
2、对观察结果进行X2测验，讨论实验结果是否符合理论比例。
果蝇伴性遗传的杂交实验结果（正交实验）
世代
统计日期
白眼（♂）
雌
蝇
雄
红眼
F1
2013.4.21
全部
无
结果：
由于我
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