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人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。

3.PCR技术扩增目的基因

(1)原理:

DNA双链复制

(2)过程:

加热至90~95℃DNA解链;

第二步:

冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;

第三步:

加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

基因表达载体的构建

1.目的:

使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。

2.组成:

目的基因+启动子+终止子+标记基因

(1)启动子:

是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。

(2)终止子:

也是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的尾端。

(3)标记基因的作用:

是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

常用的标记基因是抗生素基因。

(三)基因工程的应用

1.植物基因工程:

抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。

2.动物基因工程:

提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。

3.基因治疗:

把正常的外源基因导入病人体内,使该基因表达产物发挥作用。

(四)蛋白质工程的概念

蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。

(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质)

 

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专题2细胞工程

(一)植物细胞工程

1.理论基础(原理):

细胞全能性

全能性表达的难易程度:

受精卵>生殖细胞>干细胞>体细胞;

植物细胞>动物细胞

2.植物组织培养技术

(1)过程:

离体的植物器官、组织或细胞―→愈伤组织―→试管苗―→植物体

(2)用途:

微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。

(3)地位:

是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。

3.植物体细胞杂交技术

(2)诱导融合的方法:

物理法包括离心、振动、电刺激等。

化学法一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。

(3)意义:

克服了远缘杂交不亲和的障碍。

(二)动物细胞工程

1.动物细胞培养

(1)概念:

动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。

(2)动物细胞培养的流程:

取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

(3)细胞贴壁和接触抑制:

悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。

细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。

(4)动物细胞培养需要满足以下条件

①无菌、无毒的环境:

培养液应进行无菌处理。

通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。

此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

②营养:

合成培养基成分:

糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。

通常需加入血清、血浆等天然成分。

③温度:

适宜温度:

哺乳动物多是36.5℃+0.5℃;

pH:

7.2~7.4。

④气体环境:

95%空气+5%CO2。

O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。

(5)动物细胞培养技术的应用:

制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。

2.动物体细胞核移植技术和克隆动物

(1)哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难)。

(2)选用去核卵(母)细胞的原因:

卵(母)细胞比较大,容易操作;

卵(母)细胞细胞质多,营养丰富。

(3)体细胞核移植的大致过程是:

(右图)

核移植

胚胎移植

(4)体细胞核移植技术的应用:

①加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育;

②保护濒危物种,增大存活数量;

③生产珍贵的医用蛋白;

④作为异种移植的供体;

⑤用于组织器官的移植等。

(5)体细胞核移植技术存在的问题:

克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。

3.动物细胞融合

(1)动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。

融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。

(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。

(3)动物细胞融合的意义:

克服了远缘杂交的不亲和性,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。

(4)动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较:

比较项目

细胞融合的原理

细胞融合的方法

诱导手段

用法

植物体细胞杂交

细胞膜的流动性

去除细胞壁后诱导原生质体融合

离心、电刺激、振动,聚乙二醇等试剂诱导

克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂种植株

动物细胞融合

使细胞分散后诱导细胞融合

除应用植物细胞杂交手段外,再加灭活的病毒诱导

制备单克隆抗体的技术之一

4.单克隆抗体

(1)抗体:

一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。

从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

(2)单克隆抗体的制备过程:

注入小鼠

细胞融合

分离

抗原注入小鼠体内

B淋巴细胞

骨髓瘤细胞

杂交瘤细胞

细胞培养

选择培养细胞

培养基

体内培养

体外培养

从腹水提取

从培养液提取

单克隆抗体

(3)杂交瘤细胞的特点:

既能大量繁殖,又能产生专一的抗体。

(4)单克隆抗体的优点:

特异性强,灵敏度高,并能大量制备。

(5)单克隆抗体的作用:

①作为诊断试剂:

准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。

②用于治疗疾病和运载药物:

主要用于治疗癌症治疗,可制成“生物导弹”,也有少量用于治疗其它疾病。

专题3胚胎工程

(一)动物胚胎发育的基本过程

1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。

经过处理后获得的胚胎,还需移植到雌性动物体内生产后代,以满足人类的各种需求。

2、动物胚胎发育的基本过程

(1)受精场所是母体的输卵管上段。

(2)卵裂期:

特点:

细胞有丝分裂,细胞数量不断增加,但胚胎的总体体积并不增加,或略有减小。

(3)桑椹胚:

胚胎细胞数目达到32个左右时,胚胎形成致密的细胞团,形似桑椹。

是全能细胞。

(4)囊胚:

细胞开始出现分化(该时期细胞的全能性仍比较高)。

聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团,将来发育成胎儿的各种组织。

中间的空腔称为囊胚腔。

(5)原肠胚:

有了三胚层的分化,具有囊胚腔和原肠腔。

(二)胚胎干细胞

1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞,来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。

2、具有胚胎细胞的特性,在形态上表现为体积小,细胞核大,核仁明显;

在功能上,具有发育的全能性,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。

另外,在体外培养的条件下,可以增殖而不发生分化,可进行冷冻保存,也可进行遗传改造。

3、胚胎干细胞的主要用途是:

①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律;

②是在体外条件下研究细胞分化的理想材料,在培养液中加入分化诱导因子,如牛黄酸等化学物质时,就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化,这为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段;

③可以用于治疗人类的某些顽疾,如帕金森综合症、少年糖尿病等;

④利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性,移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能;

⑤随着组织工程技术的发展,通过ES细胞体外诱导分化,定向培育出人造组织器官,用于器官移植,解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。

(三)胚胎工程的应用

1.体外受精和胚胎的早期培养

(1)卵母细胞的采集和培养:

主要方法:

用促性腺激素处理,使其排出更多的卵子,然后,从输卵管中冲取卵子,直接与获能的精子在体外受精。

第二种方法:

从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞;

第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。

采集的卵母细胞,都要在体外经人工培养成熟后,才能与获能的精子受精。

(2)精子的采集和获能:

在体外受精前,要对精子进行获能处理。

(3)受精:

获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。

(4)胚胎的早期培养:

精子与卵子在体外受精后,应将受精卵移入发育培养液中继续培养,以检查受精状况和受精卵的发育能力。

培养液成分较复杂,除一些无机盐和有机盐外,还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分,以及血清等物质。

当胚胎发育到适宜的阶段时,可将其取出向受体移植或冷冻保存。

不同动物胚胎移植的时间不同。

(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植,小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植,人的体外受精胚胎可在8~16个细胞阶段移植。

2.胚胎移植

(1)胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。

其中提供胚胎的个体称为“供体”,接受胚胎的个体称为“受体”。

(供体为优良品种,作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。

地位:

如转基因、核移植,或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎,都必须经过胚胎移植技术才能获得后代,是胚胎工程的最后一道“工序”。

(2)胚胎移植的意义:

大大缩短了供体本身的繁殖周期,充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。

(3)生理学基础:

①动物发情排卵后,同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。

这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。

②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。

这就为胚胎的收集提供了可能。

③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。

这为胚胎在受体的存活提供了可能。

④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。

(4)基本程序主要包括:

①对供、受体的选择和处理。

选择遗传特性和生产性能优秀的供体,有健康的体质和正常繁殖能力的受体,供体和受体是同一物种。

并用激素进行同期发情处理,用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。

②配种或人工授精。

③对胚胎的收集、检查、培养或保存。

配种或输精后第7天,用特制的冲卵装置,把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)。

对胚胎进行质量检查,此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段。

直接向受体移植或放入-196℃的液氮中保存。

④对胚胎进行移植。

⑤移植后的检查。

对受体母牛进行是否妊娠的检查。

专题4生物技术的安全性和伦理问题

(一)转基因生物的安全性争论:

(1)基因生物与食物安全:

反方观点:

反对“实质性等同”、出现滞后效应、出现新的过敏原、营养成分改变

正方观点:

有安全性评价、科学家负责的态度、无实例无证据

(2)转基因生物与生物安全:

对生物多样性的影响

扩散到种植区之外变成野生种类、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体、成为超级杂草、有可能造成“基因污染”

生命力有限、存在生殖隔离、花粉传播距离有限、花粉存活时间有限

(3)转基因生物与环境安全:

对生态系统稳定性的影响

打破物种界限、二次污染、重组出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通过食物链进入人体

不改变生物原有的分类地位、减少农药使用、保护农田土壤环境

(二)生物技术的伦理问题

(1)克隆人:

两种不同观点,多数人持否定态度。

否定的理由:

克隆人严重违反了人类伦理道德,是克隆技术的滥用;

克隆人冲击了现有的婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念;

克隆人是在人为的制造在心理上和社会地位上都不健全的人。

肯定的理由:

技术性问题可以通过胚胎分级、基因诊断和染色体检查等方法解决。

不成熟的技术也只有通过实践才能使之成熟。

中国政府的态度:

禁止生殖性克隆,不反对治疗性克隆。

四不原则:

不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验。

(2)试管婴儿:

两种目的试管婴儿的区别两种。

不同观点,多数人持认可态度。

把试管婴儿当作人体零配件工厂,是对生命的不尊重;

早期生命也有活下去的权利,抛弃或杀死多余胚胎,无异于“谋杀”。

解决了不育问题,提供骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法,提供骨髓造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤。

(三)生物武器

(1)种类:

致病菌、病毒、生化毒剂,以及经过基因重组的致病菌。

(2)散布方式:

吸入、误食、接触带菌物品、被带菌昆虫叮咬等。

(3)特点:

致病力强、多数具传染性、传染途径多、污染面广、有潜伏期、不易被发现、危害时间长等。

(4)禁止生物武器公约及中国政府的态度

专题5生态工程一、生态工程的基本原理

项目

理论基础

意义

实例

物质循环

可避免环境污染及其

对系统稳定和发展

无废弃物农业

生态系统的稳定性

生物多样性程度高,可提高系

统的抵抗力稳定性

“三北”防护林建设中的单

纯林问题,珊瑚礁生态系统

的生物多样性问题

生物与环境的协调与平衡

可避免系统的失衡和破坏

太湖富营养化问题

社会、经济、自然

复合系统

统一协调各种关系,保障系统

的平衡与稳定

林业建设中自然系统与社

会、经济系统的关系问题

系统的结构决定功能

原理:

分布式优

于集中式和环式

改变和优化系统的结构以改善

功能

桑基鱼塘

系统整体性原理:

整体大于部分

保持很高的系统生产力

珊瑚礁藻类和珊瑚虫的关系

二、生态工程的实例和发展前景

1、生态工程的实例分析

类型

主要原理

注意问题

农村综合发展型生态工程

物质循环再生原理、整体性原理、物种多样性原理

①核心:

沼气工程

②优点:

农林牧副渔全面发展;

开发可更新资源,减少环境污染

小流域综合治理生态工程

整体性原理、协调与平衡原理、工程学原理

①“综合”表现在同时考虑到生态效益和经济效益

②不同气候带、不同自然条件和不同经济发展水平的地区,生态工程模式应各具特色

大区域生态系统恢复工程

物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理

工程建设中应注意的问题

①考虑树种生态适应性问题,种植适宜品种

②考虑树种多样性,保证防护林体系稳定

③不同地区应根据当地情况采取不同策略

湿地生态恢复工程

协调与平衡原理、整体性原理

1主要措施:

退耕还林

2主要困难:

解决迁出湖区居民的生计问题

矿区废弃地的生态恢复工程

系统学和工程学原理

①种植耐旱的灌木、草和树

②确定合理载牧量

③改良表土

城市环境生态工程

①解决大气污染措施:

禁止使用有铅汽油

②水污染:

减少或禁止污水排放,进行污水净化

一、生态工程的概念

生态工程是指应用生态系统中物种共生与物质循环再生原理、结构与功能相协调原则,结合系统分析的最优化方法而设计的促进物质被分层多级利用的生产工艺系统。

二、生态工程的基本原理

生态工程的设计所依据的是生态学和工程学原理

1、生态学原理

(1)物种共生原理:

自然界任何一种生物都不能离开其他生物而单独生存和繁衍,存在着共生、竞争等关系,这构成了生态系统的自我调节和反馈机制。

(2)生态位原理:

生态系统中各种生物都占有一定的生态位,依据此原理,可构建一个具有多层次、多种群的稳定而高效的生态系统。

(3)食物链原理:

食物链/食物网是实现生态系统中物质循环、能量流动和信息传递的基础,物种间的食物关系是生态工程设计的重要因素。

(4)物种多样性原理:

生态系统中生物多样性越高,抵抗力稳定性越陷越高,生态系统就越稳定。

(如“三北防护林”虫害、珊瑚礁区的生机)

三、生态工程建设的基本过程

1.生态工程建设的核心环节是技术设计.

2.生态工程设计的方法及实例

(1)食物链(网)的“相接”,如稻田养鱼农业生态工程。

(2)食物链(网)的“加环”,如玉米芯的充分利用。

3.生态工程在设计时要考虑到有利于人和自然两方面,突出低消耗、多效益、可持续的特征。

二、我国生态工程建设的实例

1.治污生态工程

(1)内容:

主要涉及固体、液体、有机废物的处理,生态肥料的研制与试用,湖区污染的生态治理,塑料的再生利用。

(2)实例——“人工湿地”生态工程:

(1)湿地的重要特点之一是生物多样性丰富,湿地生态系统具有较强的功能,被誉为“地球之肾”。

(2)“人工湿地”的净化作用是通过湿地环境中所发生的物理、化学和生物作用的综合效应实现的,由不同类型的水生植物和微生物的共同作用来完成。

(3)水生植物可吸收、转化污水中的N、P等物质,还能促进细菌等微生物对污水的处理和净化。

2.生态恢复工程

(1)生态恢复工程的第一步是恢复植被.

(2)实例

a.矿山废弃地生态恢复工程:

在矿区废弃地的生态修复中,植被要注意选择生长快和抗逆性强的树种,优先选择负担树种,尽量选择适应性强的乡土树种和先锋树种,注意树种的多功能效益。

b.西部的生态治理

水土流失是西部生态问题中最本质、最突出的矛盾。

3.生态农业工程

生态农业以保持生态系统的生态平衡为主导思想,促进物质在系统内循环和重复使用,以最少的投入获取最大的经济效益和生态效益。

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