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学习汉语
编号008
高效液相色谱法测定食品中阿
斯巴甜的含量
学生姓名：
阿布都萨拉木.托合尼亚孜
学号：
20080301008
系部：
化学与环境科学系
专业：
化学
年级：
2008年1班
完成日期：
2011年5月19日
为乙腈（A）-0.4%磷酸（B）（10:
90），检测波长是315nm，流速为0.5mL/min。
在该色谱条件下，绿原酸在5μg/ml---80μg/ml范围内与其峰面积呈良好的线性关系，相关系数为R=0.9991，样品平均回收率100.2%，RSD%为4.87%。
该方法操作简单易行，有较好的精密度和准确性，可用于苜蓿中绿原酸含量的测定。
关键词：
玛得土力阿亚特；绿原酸；高效液相色谱法；维药；
目 录
中文摘要1
引言3
1.实验部分4
1.1实验仪器和药品4
1.1.1实验仪器4
1.1.2实验药品4
1.1.3实验药品的配制4
1.2实验方法4
1.2.1样品溶液的制备4
1.2.2对照品溶液的制备5
1.2.3色谱条件的选择5
2.结果与讨论6
2.1色谱条件6
2．2线性关系实验6
2．3回收率实验7
2．4样品含量的测定7
3.结论7
参考文献8
致谢9
引言
玛得土力阿亚特是常用维吾尔成药，主要作用为[1]：
燥湿散寒，健脑益智，开胃消食，补肾壮阳，用于偏瘫，面神经麻痹，舌重，健忘，神志痴呆，食欲不振，遗尿，腰痛，关节痛，齿松，肠痉，性功能减退。
玛得土力阿亚特的主要成份[2]：
中亚白及、白皮松子仁、洋甘菊子、白花丹、洋甘菊、奶桃、广防己、肉桂、胡椒（黑）、干姜、荜茇、余甘子等十四味。
绿原酸别名：
氯原酸,咖啡鞣酸。
化学名：
3-咖啡酰奎尼酸。
绿原酸是一种多酚类化合物，由一份子咖啡酸和一分子奎尼酸缩合脱水而成，是植物界广泛存在的一类次生代谢物质。
研究表明，绿原酸具有抗菌，消炎，解毒，利胆，降压和升高白细胞及显著增加胃肠蠕动和促进胃液分泌等药理作用，对大肠杆菌，金色葡萄球菌，肺炎球菌和病毒有较强的抑制作用，对急性后来炎和皮肤病有明显疗效，临床上由于治疗急性细菌性感染疾病及化疗时所致的白细胞减少症，对月经过多，子宫功能性出血有良好的止血效果。
此外，绿原酸还具有抗氧化作用而应用于食品工业。
绿原酸因具有广泛的生物活性[3]，现代科学对绿原酸生物活性的研究已深入到食品，保健，医药和日用化工等多个领域。
日本爱知医科大学加龄科学研究所经研究确认，绿原酸有可能用于预防和治疗艾滋病，目前受到国内外科学人士的特别关注。
绿原酸的测定方法主要报道是金银花和杜仲药材上，采用的方法主要是液相色谱法，也有文摘用毛细管电泳法测定。
1.实验部分
1.1实验仪器和药品
1.1.1实验仪器
高效液相色谱仪（岛津LC-20A，配有SPD-20A检测器，Lcsolution工作站），；KQ3200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA—N/JA—N电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；
1.1.2实验药品
玛得土力阿亚特；乙腈（色谱纯试剂）；甲醇（色谱纯试剂）；乙醇（分析纯试剂）；磷酸（分析纯试剂）；0.1%磷酸。
1.1.3实验药品的配制
（1）0.4%磷酸溶液的配制
准确量取4ml磷酸溶液，用蒸馏水稀释并定容至1000ml的容量瓶中，即可得到0.4%磷酸溶液。
（2）0.1%磷酸溶液的配制
准确量取0.8ml磷酸溶液，用蒸馏水稀释并定容至200ml的容量瓶中，即可得到0.1%磷酸溶液。
（3）0.2%磷酸溶液的配制
准确量取0.4ml磷酸溶液，用蒸馏水稀释并定容至200ml的容量瓶中，即可得到0.2%磷酸溶液。
1.2实验方法
1.2.1样品溶液的制备
对玛得土力阿亚特中绿原酸提取的方法采用醇提取法：
准确称取玛得土力阿亚特5.00g放置于50ml的烧杯中，加入适量乙醇溶解稀释，定容于50ml的容量瓶中，常温下放置24h后置于超声波清洗器中在30℃恒温超声20min后，用0.45μm微孔滤膜过滤于50ml容量瓶中，即得到玛得土力阿亚特中绿原酸的供试样品溶液。
1.2.2对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品10.0mg，用甲醇溶解并定容至50ml的容量瓶中，摇匀，即得到浓度为200μg/ml的对照品溶液。
1.2.3色谱条件的选择
（1）测定原理
本品用乙醇从玛得土力阿亚特中提取出来，经液相色谱分离，在315nm[4]处测定峰面积，计算含量。
（2）测定波长的选择
本实验中用甲醇将对照品绿原酸制成浓度为0.21mg/ml的标准溶液后在200-400nm范围内进行紫外扫描。
结果测定绿原酸在315nm和352nm处吸收值较大，但315nm处吸收值最大，且峰形较好。
因此本实验选择在315nm处测定绿原酸。
（3）流动相的选择[5]
流动相按乙腈：
0.4%磷酸（50:
50）、乙腈：
0.4%磷酸（10:
90），流速为0.5ml/min,柱温为30℃，进样量20μl，检测波长327nm，分别测样品，一色谱峰面积定量，得到吸收光谱曲线。
由图显示得到绿原酸在流动相为乙腈：
0.4%磷酸（10:
90）的条件下分离效果最佳，在此条件下测得绿原酸的保留时间在7.2min左右，样品在溶液中主峰和其它杂峰达到完全分离。
故本次试验采用流动相是乙腈：
0.4%磷酸（10:
90）。
（4）流动相溶剂的选择
高效液相色谱法是一种分离效率高[6]、分析速度快和应用范围广泛的现代分析技术，溶剂的选择使用是高效液相色谱分析能否成功的重要环节。
根据文献报道[8]，常用的溶剂有甲醇、乙腈、水、四氢呋喃等，本次实验采用最佳流动相乙腈：
0.4%磷酸（10:
90）做溶剂。
2.结果与讨论
2.1色谱条件
KromasilODS-色谱柱（Φ4.6×250mm,5μm），柱温为30℃，流动相为乙腈（A）-0.4%磷酸（B）（10:
90），检测波长是315nm，流速是0.5ml/min。
图1 样品及对照品HPLC色谱图。
其中B为样品色谱图，A为对照品色谱图
2．2线性关系实验
分别精密移取0.20mg/ml绿原酸对照品溶液0ml、0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml于6支10ml容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，即得浓度分别5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的溶液。
分别精密移取上述6份溶液20μl，再分别注入高效液相色谱仪中，按上述测定条件进行测定，见图1。
以对照品浓度X（μg/ml）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。
表1.绿原酸标准溶液的吸光度测定
C（μg/ml）
5
10
20
40
80
A
38468
97856
176852
364528
698657
2．3回收率实验
精密量取20ul按供“1.2.1”项方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样20ul,分别进样两次，记录色谱图，计算玛得土力阿亚特中绿原酸的加样回收率及RSD值。
表2回收率实验结果
编
样品含量
加入对照品量
测得总量
回收率
平均回收率
RSD
号
μg/g
μg
μg
（%）
（%）
（%）
1581
20
1602
105
100.2
4.87
1
1581
15
1595
93.5
1581
10
1591
100
2
1581
5
1586.2
102
2．4样品含量的测定
含量的测定按“2.1”项下的色谱条件，分别取样品溶液和对照品溶液各进样20μL，以峰面积按外标法计算含量，绿原酸的含量为1581μg/g（n=5）。
3.结论
本实验采用RP-HPLC法测定玛得土力阿亚特中绿原酸的含量。
综合实验结果，测定绿原酸的最佳色谱条件是：
柱温30℃，流动相为甲醇：
0.5%磷酸（30:
70），检测波长315nm，流速0.5ml/min绿原酸进样量在5--20ug/mL范围内，绿原酸进样量与峰值面积呈良好线性关系（r=0.999）。
加样回收率的平均回收率为100.2%，RSD为4.87%。
用该法测定玛得土力阿亚特样品时绿原酸含有1581ug/g,该方法简便、可靠准确，可用于玛得土力阿亚特中绿原酸含量的测定。
参考文献
[1]刘勇民.维吾尔药志（上）[M].乌鲁木齐:
新疆科技卫生出版社.1999,868.
[2]敖明章,高莹莹,余龙江等.刺山柑化学成分及其药理活性研究进展[J].中草药.2007,38（3）:
463-466
[3]高锦明，张鞍灵，张康健等．绿原酸分布、提取与生物活性研究综述［Ｊ］．西北林业学院学报.1999，14
（2）：
73.
[4]中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社.2005，4:
606-607.
[5]L.R.斯奈德,J.J.柯克兰等.《现代液相色谱法导论》[M].化学工业出版社.1988,2:
305.
[6]安登魁.现化药物分析选论[M].中国医药科技出版社.2001，2:
1-3.
致谢
已经接近尾声，在此我想对位的母校，我的父母，亲人们，我的老师和同学们表达我由衷的谢意。
感谢我的家人对我大学四年的默默支持；感谢我的母校喀什师范学院给了我在大学四年深造的机会，让我能继续学习和提高；感谢喀什师范学院的老师和同学们四年来多关心和鼓励。
同学们在学习中的人真热情，生活上的热心主动，所有这些让我的四年充满感动。
这次毕业论文设计我的论文指导老师买买提吐尔逊老师的对我的关心和支持尤其重要。
每次遇到难题，我最先做的就是向指导老师寻求，而买老师每次不管忙或闲，总会抽空找我面谈，然后一起商量的办法，麦老师平日里工作繁多。
这一个月以来，买老师不仅在学业上给我以精心指导，同时还在思想上给我无微不至的关怀，在此向买老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。
同时，毕业论文的写作也得到了亚森江等同学的热情帮助。
感谢在整个毕业论文设计期间跟我密切合作的同学。
在此，我再一次真诚的向帮助过我的老师和同学们表示感谢！
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