基因工程复习资料含答案Word格式.docx
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寡核苷酸探针和RNA探针。
7、部分酶切可采取的措施有:
(1)____________
(2)___________(3)___________等。
(1)减少酶量;
(2)缩短反应时间;
(3)增大反应体积
8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性:
(1)____________;
(2)________________的活性。
枯草杆菌蛋白酶;
(1)5'
-3'
合成酶的活性;
(2)3'
-5'
外切核酸酶
9、为了防止DNA的自身环化,可用_____________去双链DNA__________________。
碱性磷酸酶;
5’端的磷酸基团
10、基因工程中有3种主要类型的载体:
_______________、_____________、______________。
质粒DNA;
病毒DNA;
质粒和病毒DNA杂合体
11、pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于,它的四环素抗性基因来自于,它的氨苄青霉素抗性基因来自于。
pMBl;
pSCl01;
pSF2124(R质粒)
13、DNA重组连接的方法大致分为四种:
(1)_________________
(2)_______________(3)_____________(4)_______________________。
(1)黏性末端连接;
(2)平末端连接;
(3)同聚物接尾连接;
(4)接头连接法
14、差示杂交(differentialhybridization)技术需要__________________________。
两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因
16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。
基因组DNA克隆;
基因组DNA文库
17、根据Northern杂交的结果可以说明:
_____________________________。
外源基因是否进行了转录
18、在________________技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的DNA探针杂交。
Southern印迹
19、可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有____________和_______的活性。
5’→3’合成酶;
3’→5’外切核酸酶
20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素:
(1)_______________
(2)__________________(3)_________________。
(1)克隆的是完整的基因;
(2)使用的是表达载体;
(3)不含内含子
21、放射免疫筛选的原理基于以下三点:
(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;
(2)同一个抗原可以同几种抗体结合;
(3)抗体能够被标记
22、黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自、COS位点序列来自,最大的克隆片段达到 kb。
质粒;
λ噬菌体;
45
23、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自_______,第二、三两个字母取自_________,第四个字母则用___________表示。
属名的第一个字母;
种名的前两个字母;
株名
24、第一个分离的限制性内切核酸酶是___________;
而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
EcoK;
EcoRl
25、切口移位(nicktranslation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
DNA聚合酶I:
5'
一3'
外切核酸酶;
合成酶
26、就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:
_______________、_____________、______________。
另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
复制区:
含有复制起点;
选择标记:
主要是抗性基因;
克隆位点:
便于外源DNA的插入
27、pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过
和两种质粒改造而来。
它的复制子来自,Amp抗性基因则是来自。
pBR322和M13;
转座子
28、噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:
一是;
二是。
它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;
对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽
29、Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别:
(1)__________________________________________________________________
(2)_________________________________________________________________。
(1)印迹的对象不同:
Northern是RNA,Southern是DNA;
(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件
30、限制与修饰是宿主的一种保护体系,它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。
31、II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。
它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。
32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性(RFLP)。
33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA,___________时摄人DNA。
0︒C;
42︒C
34、野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是:
(1)
(2)(3)。
(1)分子量大,
(2)酶的多切点,(3)无选择标记
35、形成平末端的方法有:
用产生平末端的限制酶切,用S1核酸酶切除粘末端,用DNA聚合酶填平粘末端。
36、回收DNA片段时,在确定DNA条带位置时,应使用长波长紫外灯,以最大限度减少对DNA的照射损伤。
37、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型,m-表示修饰缺陷型,rec-表示重组缺陷型。
38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时,DNA以DNA-Ca2+复合物形式吸附于细胞表面。
39、TaqDNA聚合酶具有,缺乏因此无。
5‘→3‘聚合酶活性,3’→5‘外切酶活性,校正功能
40、PCR循环次数一般设定为,过多的循环次数会导致的出现。
25-30次,PCR反应“平台效应”。
41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端,则可以用__________进行3’末端标记。
如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端,可以用__________________进行3’末端标记。
Klenow酶填补的方法;
T4DNA聚合酶
42、限制酶是一类专门切割DNA的酶,它能特异性识别切割双链DNA。
43、需要部分酶切时可采取的方法有:
减少酶的用量;
缩短反应时间;
增大反应体积。
45、重组DNA技术的基本过程:
①目的基因的制备;
②载体的选择和制备;
③DNA分子的体外连接;
④将重组DNA导入宿主细胞;
⑤重组体的筛选和鉴定;
⑥重组体的扩增、表达和其他研究。
46、在分离质粒DNA的菌体培养过程中,加入氯霉素有两个好处:
可以扩增质粒DNA;
抑制了菌体的数量,有利于裂解。
48、II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。
50、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型,m-表示修饰缺陷型,rec-表示重组缺陷型。
52、核酸的体外标记法分为和。
化学法;
酶法
53、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。
125I;
光敏生物素标记。
54、影响核酸分子杂交的因素有:
(1)核酸分子的浓度与长度;
(2)温度;
(3)离子强度;
(4)甲酰胺;
(5)核酸分子的复杂性;
(6)非特异性杂交反应等。
三、选择题(20%)
1、下列有关基因工程技术的叙述,正确的是(
)C
A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体
B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达
2、下列不属于获取目的基因的方法是(
)B
A.“鸟枪法” B.转录法 C.反转录法 D.根据已知氨基酸序列合成法
3、以下说法正确的是( )A
A.在真核细胞的基因结构中,编码区也含有不能编码蛋白质的序列
B.终止子是转录终止的信号,因此它的DNA序列与终止密码TAA相同
C.基因的非编码区通常不起什么作用
D.启动子的作用是阻碍RNA聚合酶的移动,并使其从DNA模板链上脱离下来
4、Ⅱ型限制性内切核酸酶:
()B
(A)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
(B)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
(C)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(D)有外切核酸酶和甲基化酶活性
(E)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
5、关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有()不太恰当。
B
(A)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(B)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(C)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
(D)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
6.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好?
()B
(A)反应时间(B)酶量(C)反应体积(D)酶反应的温度
7、限制性内切核酸酶可以特异性地识别:
(A)双链DNA的特定碱基对(B)双链DNA的特定碱基序列
(C)特定的三联密码(D)以上都正确
8、在基因工程中,可用碱性磷酸酶()A
(A)防止DNA的自身环化(B)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5′末端标记
(C)制备突出的3′末端(D)上述说法都正确
9、下面关于松弛型质粒(relaxedplasmid)性质的描述中,()是不正确的C
(A)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制,而不受染色体复制机制的制约,
因而有较多的拷贝数
(B)可以在氯霉素作用下进行扩增(C)通常带有抗药性标记
(D)同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
10、下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?
()C
(A)质粒(B)黏粒(C)酵母人工染色体(YAC)
(D)λ噬菌体(E)cDNA表达载体
11、ColEl是惟一用作基因工程载体的自然质粒,这种质粒:
()ACD
(A)是松弛复制型(B)具有四环素抗性
(C)能被氯霉素扩增(D)能产生肠杆菌素
12、同一种质粒DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是:
()B
(a)OCDNA>
SCDNA>
LDNA(b)SCDNA>
LDNA>
OCDNA
(c)LDNA>
OCDNA>
SCDNA(d)SCDNA>
LDNA
13、能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是()A
(A)charomid(B)plasmid(C)cosmid(D)phagemid
14、双脱氧末端终止法测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有()D
(A)模板(B)引物
(C)DNA聚合酶(D)ddNTP(E)缓冲液
15、PCR实验的特异性主要取决于()C
(A)DNA聚合酶的种类 (B)反应体系中模板DNA的量
(C)引物序列的结构和长度 (D)四种dNTP的浓度
(E)循环周期的次数
16、常用的Southern转膜方法有哪几种()。
BCD
(A)硝酸纤维素膜法(B)毛细管虹吸印迹法
(C)电转印法(D)真空转移法
17、原位杂交可以用来检测()ABCD
(A)DNA(B)RNA(C)cDNA(D)RNA和DNA
18、核酸酶S1能降解()AC
(A)DNA单链(B)DNA双链
(C)RNA单链(D)DNA/RNA杂交双链
19、构建载体时,使用双酶切相对于单酶切的优点在于(A、B、C、D)
(A)避免载体自身环化(B)提高连接效率(C)控制外源基因的插入方向
(D)便于转化后的筛选(E)便于修改阅读框
20、获得DNA重组体后,还需进一步鉴定,可采用的方法有:
(ABCD)
(A)DNA序列测定(B)PCR鉴定
(C)酶切鉴定 (D)表达产物的鉴定
(E)进行定点突变
21、外源基因与载体的连接方式有:
(ABCDE)
(A)粘端连接(B)平端连接
(C)加同聚尾连接(D) 加人工接头连接
(E)用T载体连接
22、关于多克隆位点,下列叙述正确的是:
(ABD)
(A)是外源基因的插入部位(B)由许多酶切位点组成
(C)是宿主细胞上的一段特殊序列 (D) 是人工合成的一段DNA序列
(E)含有药物抗性基因
23、用蓝白斑筛选重组子时,IPTG的作用是:
(A)
(A) 诱导载体上的LacZ基因表达(B)作为显色反应的指示剂
(C)作为酶的作用底物 (D)诱导载体上的抗性基因表达
E.诱导宿主上的LacZ基因表达
24、PUC系列载体的抗性筛选标记为:
(C)
(A) 卡那霉素(B) 四环素
(C)氨苄青霉素(D) G418
(E) 氯霉素
25、.免疫印迹法筛选重组体的原理是:
(E)
(A)根据载体抗性基因的表达(B)根据载体报告基因的表达
(C)根据DNA与DNA的杂交(D)根据DNA与mRNA的杂交
(E)根据外源基因的表达
26、Ti质粒:
()ACDE
(A)可从农杆菌转到植物细胞中(B)作为双链DNA被转移
(C)在植物中导致肿瘤(D)介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素(E)需要细菌的vir基因帮助转移(F)在植物细胞中作为染色体外质粒
28、关于cDNA的最正确的说法是:
()C
(A)同mRNA互补的单链DNA(B)同mRNA互补的双链DNA
(C)以mRNA为模板合成的双链DNA(D)以上都正确
29、用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为:
(A)染色体DNA断成了碎片(B)染色体DNA分子量大,而不能释放
(C)染色体变性后来不及复性(D)染色体未同蛋白质分开而沉淀
30、关于碱解法分离质粒DNA,下面哪一种说法不正确?
()D
(A)溶液I的作用是悬浮菌体(B)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
(C)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
(D)质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性
31、在下列表型中,()是基因工程上理想的受体菌表型B
(A)r+m+rec*(B)r-m-rec-(C)r-m-rec+(D)r+m+rec-
32、cDNA文库包括该种生物的()A
A某些蛋白质的结构基因B所有蛋白质的结构基因
C所有结构基因D内含子和调控区
33、Southem印迹的DNA探针()杂交。
C
A只与完全相同的片段B可与任何含有相同序列的DNA片段
C可与任何含有互补序列的DNA片段
D可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段E以上都是
34、用下列方法进行重组体的筛选,只有()说明外源基因进行了表达。
ASouthem印迹杂交BNorthem印迹杂交
CWestern印迹D原位菌落杂交
35、报告基因()ACD
A以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
B以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
C能用于检测启动子的活性D能用于确定启动子何时何处有活性
36、在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是()A
A诱导宿主的α肽的合成B诱导宿主的ω肽的合成
C作为酶的作用底物D作为显色反应的指示剂
37、切口移位是指在()作用下,使()带上放射性标记。
B
ADNA聚合酶I,RNABDNA聚合酶I,DNA
CDNA聚合酶Ⅲ,RNADDNA聚合酶Ⅲ,DNA
38、用免疫化学法筛选重组体的原理是()A
A根据外源基因的表达B根据载体基因的表达
C根据mRNA同DNA的杂交D根据DNA同DNA的杂交
39、分离质粒DNA时,用蔗糖的目的是:
A.抑制核酸酶的活性B.保护DNA,防止断裂
C.加速蛋白质变性D.有利于细胞破碎
40、CsCl-EB密度梯度离心法纯化质粒DNA的原理是:
A氯化铯可以较多地插入到线状DNA中去
B氯化铯可以较多地插入到SCDNA中去
CEB可以较多地插入到线状DNA中去
DEB可以较多地插入到SCDNA中去
41、用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为:
A染色体DNA断成了碎片
B染色体DNA分子量大,而不能释放
C染色体变性后来不及复性
D染色体未同蛋白质分开而沉淀
42、切口平移法标记DNA探针时,需用的酶是:
(B)
A限制酶BDNaseI
CRNaseDDNA连接酶
E拓扑异构酶
43、重组DNA分子导入受体细胞的方法有:
(ABC)
A.转化B.转染
C.转导D.转位
E.转录
44、关于菌落杂交法筛选重组体,下列叙述正确的是:
(BD)
A.需要外源基因的表达B.需要探针与外源基因有同源性
C.需要IPTG诱导 D.不需要外源基因的表达
E.不需要探针与外源基因有同源性
45、核酸分子杂交时,用于标记的探针可以是:
(AB)
A.DNAB.RNA
C.抗原D.抗体
E. DNA连接酶
46、限制性内切酶可特异性识别(B)
A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列
C.单链RNA的特定碱基序列D.单链DNA的特定碱基序列
E双链RNA的特定碱基对
47、下列因素中影响限制酶切割的有(A,B,C,D,E)
A.EDTA浓度B.甘油浓度C.DNA纯度D.酶的自身活性E.盐浓度
48、重组连接时,反应体系必须的组分有(A、C)
A.Mg2+B.BSAC.ATPD.PO43-E.EDTA
49、PCR产物具有特异性是因为()C
A.TaqDNA酶保证了产物的特异性
B.合适的变性,退火,延伸温度
C.选择特异性的引物
D.引物的Tm值不同.
50、要使目的基因与对应的载体重组,所需的两种酶是(
)A
①限制酶
②连接酶 ③解旋酶
④还原酶
A.①②
B.③④ C.①④
D.②③
51、用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为:
A.
染色体DNA断成了碎片
B.
染色体DNA分子量大,而不能释放
C.
染色体变性后来不及复性
D.
染色体未同蛋白质分开而沉淀
52、同一种质粒DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是:
OCDNA>
SCDNA>
LDNA
SCDNA>
LDNA>
OCDNA
LDNA>
OCDNA.SCDNA
OCDNA>
53、在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指(B)
A.I类限制酶B.II类限制酶C.III类限制酶D.核酸内切酶
E.RNAase
54、下列关于同裂酶的叙述错误的是(B)
A.是从不同菌种分离到的不