生物学常用染色液汇总.docx
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生物学常用染色液汇总
生物学常用染色液汇总
常用染料介绍
（一）天然染料
1、苏木精
苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。
苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。
被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。
常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红
洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。
单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。
常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
（二）人工染料
人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。
它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。
1、酸性品红
酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。
他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
他跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
2、刚果红
刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。
他能作染料，也用作指示剂。
他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。
他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。
在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。
刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。
3、甲基蓝
甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。
甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。
他跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。
它的水溶液是原生动物的活体染色剂。
甲基蓝极易氧化，因此用他染色后不能长久保存。
4、固绿
固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。
固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。
他和苏木精、番红并列为植物组
8、结晶紫
结晶紫是碱性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。
结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。
他是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。
凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到良好的结果。
用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。
用结晶紫染纤毛，效果也很好。
用结晶紫染色的切片，缺点是不易长久保存。
9、龙胆紫
龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。
在必要是，龙胆紫能跟结晶紫互相替用。
医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。
10、中性红
中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。
它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。
中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。
陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。
11、番红
番红是碱性染料，能溶于水和酒精。
番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。
12、亚甲蓝或美蓝
亚甲蓝或美蓝是碱性染料，呈蓝色粉末状，能溶于水（溶解度9.5%）和酒精（溶解度6%）。
亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料，其优点是染色不会过深。
13、甲基绿
甲基绿是碱性染料。
它是绿色粉末状，能溶于水（溶解度8%）和酒精（溶解度3%）。
甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
1.碘－硫酸法
植物细胞细胞壁的主要成分是纤维素，纤维素被硫酸水解后，遇碘呈蓝色反应。
因此用碘－硫酸法可鉴定细胞壁的成分。
试剂配制方法：
1%碘液将1.5克碘化钾溶于100毫升的蒸馏水中，待完全溶解后，加入1克碘，震荡溶解。
66.5%硫酸7份浓硫酸加入3份蒸馏水配制而成。
配制时要将浓硫酸慢慢地加入水中，并不断地用玻璃棒搅拌，否则会因急剧发热，而使容器炸裂。
2.苏丹Ⅲ反应
苏丹Ⅲ可将细胞中脂肪、栓质、角质染为桔红色，因此可用此染料显示出上述物质在细胞中的分布和位置。
配制方法：
将苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染料0.1克，溶于10毫升95%酒精中，然后加入10毫升甘油。
3.间苯三酚反应法
间苯三酚反应是植物显微化学中确定木质化细胞壁的最常用和最简单的方法。
这一反应的原理是当间苯三酚在酸性环境下与细胞壁中的木质素相遇时，发生樱桃红色或紫红色反应。
其方法是将要鉴定的切片先用一滴1mol/L盐酸浸透（间苯三酚要在酸性环境下才能与木质素起作用），然后滴一滴5-10%间苯三酚的85%酒精溶液，木质化的细胞壁即发生颜色反应。
4．碘液测试淀粉法
淀粉遇碘呈蓝色反应，它是鉴定淀粉的最常用方法。
碘液配制方法：
将2克碘化钾放入5毫升蒸馏水中，加热使其完全溶解；然后加入1克碘，完全溶解后用蒸馏水稀释至300毫升，放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中，置于暗处保存。
测定淀粉时，可将上述溶液稀释2-10倍，使染色不致过深，效果更好。
5.压片法常用的染料
（1）醋酸洋红为压片法中最常用的染料。
配制方法是：
先将100毫升45%醋酸水溶液放于烧瓶中煮沸，移去火焰，停止加热。
然后缓慢加入1克洋红粉末，全部加入后再煮沸1-2分钟。
此时可将一枚生锈铁钉用棉线悬入溶液中约1分钟后取出（铁为媒染剂）。
静置12小时后经过过滤，放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存备用。
（2）石炭酸---品红为近年创用的一种优良核染色剂，将细胞核和染色体染为红紫色，细胞质一般不着色，背景清晰。
其配制方法有二：
配方Ⅰ：
原液A：
取3克碱性品红溶于100毫升的70％酒精中（此液体可长期保存）。
原液B：
取10毫升原液A，加入90毫升5%的石炭酸（酚）水溶液中（可保存两周）。
染色液：
取55毫升原液B加6毫升冰醋酸和6毫升37%甲醛。
此染色液因含有较多的甲醛，可使原生质体硬化，而能保持其固有的形态。
但也因此不易使组织软化，因而不太适用于植物组织的染色体压片染色（本染色液适于植物原生质体培养中使用）。
在此基础上加以改进的配方Ⅱ，则可普遍地用于一般植物组织的染色体压片的染色。
配方Ⅱ：
取配方Ⅰ中的染色液20毫或加80毫升45%醋酸和1.8克山梨醇。
染色液配制后为淡品红色，如立即使用染色较浅。
放置2周后，染色能力显著增强，而且放置时间越久，染色效果越好。
6．铬酸－硝酸离析法
为了观察一个细胞完整的立体形态结构，可以用一些化学药品把细壁中的中层物质（果胶质）溶解，使细胞分离散开，便于观察。
离析前先把材料洗净，用刀切成1-2毫米宽的狭条（如叶片）或切成火柴棍粗细的长约1厘米的小条（如根或茎）。
然后把切好的材料放进小玻璃瓶中，加入离析液（加入量约为材料的20倍），塞紧瓶塞，放于30-40℃温箱中。
浸渍时间因材料性质而异，叶片和幼嫩的根茎组织3-4小时即可，而有些次生结构（如木质部）则需要更长的时间。
离析情况应随时检查，检查的方法是取少许离析材料，放在载玻片上，加一滴水，盖上盖玻片，然后用解剖针尖端轻轻敲打，如果材料分离则表明浸渍时间已够。
浸渍时间超过一天以上时，应更换离
析液一次。
离析时间已够的材料，用水洗净后放入70%酒精中保存。
离析液配方：
10%铬酸1份
10%硝酸1份
两种溶液应在使用时才混合，混合均匀后再使用。
二、常用染色液的配制
1、吕氏（Loeffer）碱性美蓝染液
A液：
美蓝（methyleneblue）
0.06g
95%乙醇
30mL
B液：
KOH
0.01g
蒸馏水
100mL
分别配制A液和B液，配好后混合即可。
2、齐氏（Ziehl）石炭酸复红染色液
A液：
碱性复红（basicfuchsin）
0.3g
95%乙醇
10mL
B液：
石炭酸
5.0g
蒸馏水
95mL
配制方法：
将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%乙醇，继续研磨使其溶解，配成A液。
将石炭酸溶于水中，配成B液。
混合A液及B液即成。
通常可将此混合液稀释5~10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。
3、革兰氏（Gram）染色液
（1）．草酸铵结晶紫染液
A液：
结晶紫（crystalviolet）
2g
95%乙醇
20mL
B液：
草酸铵（ammoniumoxlate）
0.8g
蒸馏水
80mL
混合A液及B液，静置48h后使用。
（2）．卢戈氏（Lugol）碘液
碘片
1g
碘化钾
2g
蒸馏水
300mL
配制方法：
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分既成。
（3）．95%的乙醇溶液
（4）．番红复染液
番红（safranineO）
2.5g
95%乙醇
100mL
取上述配好的番红乙醇溶液10mL与80mL蒸馏水混匀既成。
4、芽孢染色液
（1）．孔雀绿染液
孔雀绿（malachitegreen）
5g
蒸馏水
100mL
（2）．番红水溶液
番红
0.5g
蒸馏水
100mL
（3）．苯酚品红溶液
碱性品红
11g
无水乙醇
100mL
配制方法：
取上述溶液10mL与100mL5%的苯酚溶液混合，过滤备用。
（4）．黑色素（nigrosin）溶液
水溶性黑色素
10g
蒸馏水
100mL
配制方法：
称取10g黑色素溶于100mL蒸馏水中，置沸水浴中30min后，滤纸过滤两次，补充水到100mL，加0.5g甲醛，备用。
5、荚膜染色液
（1）．黑色素水溶液
黑色素
5g
蒸馏水
100mL
福尔马林（40%甲醛）
0.5mL
配制方法：
将黑色素在蒸馏水中煮沸5min，然后加入福尔马林作防腐剂。
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