金银花嫩芽的组织培养 515.docx
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金银花嫩芽的组织培养515
2011届 分类号：
S567.23
单位代码：
10452
毕业论文
金银花嫩芽的组织培养
姓名 王爱萍
学号 200709410111
年级 2007级
专业 生物科学
系 （院） 生命科学学院
指导教师 邱奉同
二〇一一年五月
金银花嫩芽的组织培养
Thetissuecultureofthehoneysuckle
姓名王爱萍
专业生物科学
指导教师邱奉同
临沂大学
二〇一一年五月
摘要
本文以取自临沂大学北校区桂湖岸金银花春季嫩芽为实验材料，以MS，White，N6三种培养基培养外植体，对这三种培养基分别设置不同的激素浓度梯度组合，从而对外植体的组培快繁进行探讨。
结果表明，文中最合适的金银花嫩芽形成愈伤组织的培养基是MS,最适的激素浓度为MS﹢0.5%2,4-D﹢2%6-BA。
关键词：
金银花；组织培养；培养基；激素浓度
ABSTRACT
AbstracttheRapidPropagationTechnologyofTissueCultureforhoneysuckle.Werestudiedbyadoptingdifferentculturemediumsandformulaeofshootinduction,proliferationandrooting.TheresultsshowedthattheoptimumculturemediumforshootinductionwasMS+6–BA2.0mg/L+2,,4-D0.5mg/L;ThiswouldprovidesomeusefulparametersforreferenceinotherLonicerajaponica.
Keywords:
Honeysuckle;tissueculture;pollutionrate;hormone.
目录
引言………………………………………………………………………………1
金银花概述……………………………………………………………………1
金银花组培现状及意义…………………………………………………………1
1.试验材料与方法……………………………………………………………………3
1.1试验材料………………………………………………………………………3
1.2仪器与试剂……………………………………………………………………3
1.3试验方法步骤…………………………………………………………………4
2.试验结果……………………………………………………………………………5
2.1污染率…………………………………………………………………………5
2.2最适培养基……………………………………………………………………5
2.3最适激素浓度组合……………………………………………………………6
2.4诱导芽的再分化………………………………………………………………6
3.结果分析与讨论……………………………………………………………………7
参考文献………………………………………………………………………………9
附录（图）……………………………………………………………………………10
致谢…………………………………………………………………………………12
引言
金银花概述
金银花属于忍冬科忍冬属植物，又名忍冬银花、双花、过冬藤二宝花，为多年生半常绿木质藤本，幼枝密生柔毛和腺毛，野生种分布广泛，常见生于路旁、山坡灌丛或疏林中[1]。
金银花节间中空，节部膨大，不定根发达；单叶对生，叶片呈卵形或者长卵形，两面被柔毛；花初开时白色，后逐渐变成金黄色，花期在同一条藤蔓上不同花龄的花朵黄白相映，由此得名金银花，花期5~7月[2]；浆果球形，蓝黑色，成对生于叶腋中，花期4~6月，果期10~11月。
除了西北、东北等高寒、干旱地区和海南地区外，全国各地均有分布。
山东省沂蒙山区和苏北地区是我国的金银花主要产区[3]。
由于其花期长，花开时黄白相映，芳香怡人，藤蔓缠绕，枝繁叶茂，是园林中垂直绿化美化的良好材料，适于装饰棚廊、假山等。
此外，经修剪后其枝茎还可做树桩盆景。
金银花是一种珍贵的观赏植物，是人们十分喜爱的观赏及绿化的极好材料。
金银花根系发达，须根多，据调查其根系沿山体岩缝下扎深度可达9m以上，向四周伸长可达12m以上；其茎叶密度大，郁闭覆盖能力强，具有强大的护坡、固土、保水和持水能力，是优良的水土保持植物[4]。
另外，金银花全草均可入药，花蕾含有挥发性芳香油、肌醇、皂甙、绿原酸、黄酮类化合物、肉桂酸、橙花醇、茉莉醛等；茎中含有生物碱；叶中含有忍冬素、忍冬甙和木犀素等，有清热解毒、消炎、除火之功效，主治温病、风热感冒、咽喉、肿痛、肺炎、痢疾、痛肿溃疡、丹毒等症[5]。
另外，金银花中的水溶性化合物三萜皂甙和绿原酸四乙酸化物具有保肝利胆的功效[6]。
金银花除作为用途广泛的中药材外，还具有良好的保健作用；金银花茶香气宜人，可以制作饮料，对防治盛夏中暑、上呼吸道感染、风热感冒和肠胃疾病有良好的效果、对清除人体自由基、延缓衰老、提高人体免疫机能等具有良好的作用，因而也是高血压和心血管系统患者降低胆固醇的保健佳品。
金银花集观赏药用于一身，经济价值高，正逐渐被人类所重视。
植物的组合培养主要是利用植物的全能性，使已经分化的细胞、组织或器官进行脱分化，使其重新具有发育成完整植株的能力，进而使其在分化为新的植株。
植物细胞全能性（totipotency）：
指植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力。
在适宜条件下，任何一个细胞都可以发育成一个新个体。
植物细胞全能性是植物组织培养的理论基础。
金银花组培现状及意义
目前，关于金银花组织培养的研究不多，真正的大规模应用于生产的很少，只有灰毡毛忍冬和南江金银花实现了组培苗规模化生产，主要原因是金银花组培苗大面积移栽的成活率较低，育苗成本较高，限制了组培苗的商品化生产[7]。
叶片培养中不定芽的诱导率还偏低。
至今尚未见到金银花脱毒、原生质、胚乳、花药、花粉等培养的有关研究报道[8]。
扦插繁殖和播种繁殖是金银花的常用繁殖方式，然而这些常规的繁殖方式容易使金银花植株携带病毒细菌等，造成金银花生产性能下降，植株生长不良，有效成分积累减少，植株及产品品质降低。
通过以组织培养的方式繁育金银花种苗，不仅可以使金银花植株脱毒，提高植株性能，而且繁殖速度快、繁殖系数高，可更好地保持亲本品质，还能在避免生物资源和生态环境遭受破坏的前提下快速得到再生植株，不失为一种解决金银花栽培种苗的好方法[9]。
目前，国内外关于金银花组织培养的报道比较少，本实验以临沂大学北校区桂湖岸的引种金银花为实验材料，对金银花进行组织培养研究，旨在对金银花组培脱毒快繁技术进行有益参考，对金银花进行组培探讨。
1试验材料与方法
1.1试验材料
金银花春季嫩芽，取自临沂大学北校区桂湖岸。
1.2仪器与试剂
1.2.1实验仪器与设备
光照培养箱，超净工作台，立式压力蒸汽灭菌器，电子天平。
容量瓶，移液管，100ml三角瓶，烧杯。
1.2.2试剂与培养基
0.2%升汞，75%酒精
White培养基，N6培养基，MS培养（成分见附录）
（1）配制MS培养基，分装，灭菌，备用，配方见附录。
（2）分别配制MS培养基White培养基，N6培养基。
每种培养基设置四个激素浓度组合，第一种是基本培养基+0.5mg/L2,4-D+2mg/L6-BA，第二种是基本培养基+0.5mg/LIBA+2mg/L6-BA，第三种是基本培养基+0.5mg/LIBA+1mg/L6-BA，第四种为基本培养基+0.5mg/L2,4-D+1mg/L6-BA。
如下表进行实验。
表一A组培养基（单位mg/L）
MS培养基
A1
A2
A3
A4
2,4-D
0.5
-
-
0.5
6-BA
2
2
1
1
IBA
-
0.5
0.5
-
表二B组培养基（单位mg/L）
White培养基
B1
B2
B3
B4
2,4-D
0.5
-
-
0.5
6-BA
2
2
1
1
IAA
-
0.5
0.5
-
表三C组培养基（单位mg/L）
N6培养基
C1
C2
C3
C4
2,4-D
0.5
-
-
0.5
6-BA
2
2
1
1
IAA
-
0.5
0.5
-
（3）组培器皿的灭菌
将配好的培养基分装灭菌，将培养基分装到100ml三角瓶中，每个装25ml左右，再进行高压蒸汽灭菌，118℃，20min。
1.3试验方法步骤
1.3.1外植体的预处理
由于金银花春秋两季都有新萌发的顶芽，所以在春秋季可以取新萌发的顶芽和带有腋芽的茎段作为外植体。
顶芽末梢取2cm长，茎取带节段2cm长，先用自来水冲洗0.5h，然后进行灭菌处理。
1.3.2灭菌
外植体灭菌采用赵贤慧等建议的方法进行[10]。
在净化工作台内，先用75%酒精消毒30s，再用2%HgCl2浸泡5min。
再用无菌水冲洗4~5次。
1.3.3接种
（1）在超净台上，将处理好的嫩芽接种到MS培养基的三角瓶中，每个瓶中接3~4个嫩芽。
（2）培养3~5d后，观察，先获得脱菌芽。
（3）将无菌的芽儿分别转移到MS、White、N6三种培养基不同浓度激素组合的培养基上，每个浓度激素组合接种15瓶左右，培养观察。
2试验结果
2.1污染率
无菌外植体的脱菌分离分两次进行，第一次在MS培养基上进行脱毒苗的培养。
其结果如表1：
表4MS培养基初代培养污染率
分组
A
B
C
污染率
20%
28%
37.5%
根据实验我们可以看出，A组的污染率为20%，B组的污染率为28%，C组的污染率为37.5%。
其中A组污染率最低，C组污染率最高。
第二次在MS培养基上进行脱毒苗的培养，其结果表2:
表5MS继代培养污染率
分组
A
B
C
污染率
13%
20%
23%
继代培养中，A组污染率为13%，B组污染率为20%，C组污染率为23%。
.
第二次操作的污染率低于第一次，主要原因是相比于第一次，第二次的操作更熟练，更规范。
污染现象的图片见附录二。
2.2最适合的培养基
三组培养基愈伤组织的培养情况，如表3所示
表6三种培养基愈伤组织的生长情况
接种外植体
（无污染/瓶）
愈伤组织块数
愈伤组织诱导率%
愈伤组织颜色
生长状况
A
B
C
52
40
38
23
14
15
44.3
35
39
黄色有光泽
黄绿色无光泽
黄绿色有光泽
﹢﹢﹢
﹢﹢﹢
﹢﹢﹢﹢
由表中的结果来看，A组的愈伤组织诱导率为44.3%，愈伤组织有光泽，呈黄色；B组的愈伤组织诱导率为35%，愈伤组织无光泽，呈黄绿色；C组的愈伤组织有光泽，呈现黄绿色。
所以，长势最好的就是C组的愈伤组织。
可以得出，最合适的诱导金银花嫩芽愈伤组织的培养基为MS（A组）。
但是愈伤组织的生长状况最好的是N6（C组）。
2.3最适激素浓度组合
对A组不同激素浓度组合的愈伤组织培养结果统计如下表4
表7A组不同激素浓度组合的愈伤组织的生长情况
A组
接种外植体
（无污染/
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