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教学重点难点:

微生物检验的指标、范围、意义是本次课的重点和难点

教学内容:

第一章绪论

根据美国疾控和预防中心的信息引出微生物学检验的必要性。

(5min)

一、关于食物中毒(20min)

1.概念

2.举例说明

3.细菌性食物中毒的特点

4.细菌性食物中毒类型

5.食品中污染的细菌分类:

致病菌、条件致病菌、非致病菌

二关于药品污染(15min)

1药品污染的严重后果(举例说明)

2药品污染的范围和常见原因

三、食品和药品中污染的微生物类型(图片展示)(20min)

1食品和药品中常见的细菌

2食品和药品中常见的真菌

3食品和药品中常见的病毒

4食品中常见的寄生虫

5螨

课后问题:

为什么大肠菌群作为指示菌?

(作为指示菌大肠菌群的优点有哪些?

第二周(80min)

掌握微生物检验的基本程序和要求。

如何取样具有代表性是本次课的重点

学生参考书目:

食品检验技术(微生物部分),刘用成主编,中国轻工业出版社,2006;

114-132

课堂讨论:

第一章绪论

四、微生物检验(重点,40min)

1、概念

2、微生物检验的范围(举例说明)

3、微生物检验的指标(重点和难点)

(1)菌落总数

(2)大肠菌群

(3)致病菌

(4)霉菌及其毒素

(5)其它指标:

病毒、寄生虫、昆虫

3、微生物检验的意义

第二章微生物检验的一般程序

一、检验前准备(5min)

二、样品的采集(举例说明,20min)

强调样品必须具有代表性、要有科学的取样方案和正确的样品制备方法

1、微生物限度检验的特殊性

2、抽样对微生物限度检测值的影响

3、样品的种类

4、采样方法

(1)药品取样

(2)食品取样

(3)生产工序监测采样

(4)采样数量和标签

三、样品的送检(2min)

四、样品的处理(10min)

1、基本要求

2、供试液制备的一般方法

3、有抑菌成分的样品的处理

五、样品的检验(2min)

六、结果与报告(1min)

展示程序图,并作概况讲解

自学问题:

下列食品的检样如何制备?

1、清凉饮料、冷冻饮品;

2、冷食菜、豆制品;

3、糕点、果脯等;

4、酒类;

5、调味品;

6、方便;

面(素食米粉);

7、罐藏食品;

8、粮食

第三周(80min)

掌握微生物检验种常见食品药品的制备技术

区分卫生学和致病菌的取样方案

第三章各类食品、药品微生物检验样品的采集与制备

第一节各类食品检样的制备(40min)

一、肉与肉制品样品的采集与制备

1、采样

2、样品制备

二、乳与乳制品

1、采样

2、样品处理

三、蛋与蛋制品

2、检样的处理

四、水产品

讨论自学问题:

8、粮食

第二节各类药品微生物检验样品的采集与制备(40min)

一、一般供试品

(一)取样:

(二)稀释剂

(三)供试液制备

二、特殊供试品

(一)眼膏及软膏剂

(二)栓剂及油剂

(三)胶囊剂

(四)胶剂

(五)偏酸偏碱的供试品

第四周(80min)

掌握食品、药品和水的卫生细菌学检验方法

教学重点:

平板菌落计数法测菌落总数,多管发酵法大肠菌群

教学难点:

菌落总数的计数方法和大肠菌群的MPN检索

食品检验技术(微生物部分),刘用成主编,中国轻工业出版社,2006;

132-147

第四章卫生细菌学检验

一、菌落总数(40min)

1概念

2食品、药品的测定方法

3水样的测定

(1)饮用水的标准

(2)水样采集与制备

(3)测定程序、稀释度选择和报告方式

(4)

注意事项

(5)

其它测定方法:

滤膜法

试管稀释法

平板表面涂布法

6其它菌落总数的测定方法

二、大肠菌群(40min)

1、测定程序

2、检测方法

(1)薄膜集菌法

(2)多管发酵法

(3)COLIID检测法

(4)TTC(氯化三苯四氮唑)显色快速法

(5)DC(去氧胆酸钠)半固体试管快速法

(6)纸片快速法

3、耐热大肠菌群的测定

(1)耐热大肠菌群的定义

(2)耐热大肠菌群的检查

第五周(80min)

了解大肠埃希菌的特性,掌握其检验方法

检验方法

ELISA检测肠毒素,MUG-Indole检查法

第六章病原菌的检验

第一节大肠埃希菌(Escherichiacoli)

一、大肠埃希菌的生物学特性(10min)

1、形态与染色

2、培养特性

3、生化特性

4、抵抗力

5、抗原结构

6、致病力

二、大肠埃希菌检查法(30min)

IMViC

三糖铁琼脂(展示图片后,课堂讨论)

⏹志贺氏菌都能分解葡萄糖,产酸不产气,大多不发酵乳糖,不产生H2S。

应该产生什么现象?

⏹大肠杆菌,能分解葡萄糖产酸产气,大多数能分解乳糖,不产生H2S。

应该是什么现象?

⏹沙门氏菌,能分解葡萄糖,不发酵乳糖,大多数产生H2S,多数产气。

⏹下面照片所示2-3-4,可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌?

硫化氢试验

血清学试验

氧化酶试验

三、MUG-Indole检查法(20min)

1、原理

2、检验程序

3、注意事项

四、肠毒素检验(10min)

1、产毒培养

2、ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay)检测LT和ST

五、快速检测(10min)

第六周,第七周(160min)

了解沙门菌的特性,掌握其检验方法

血清学检查法

第二节沙门菌检查法

一、生物学特性(40min)

1、形态

4、抗原结构

(1)抗原构造

(2)抗原变异

5、发病机理和症状

二、沙门菌常规检查法(80min)

1、培养基及诊断血清

预增菌:

增菌

分离培养

生化试验

赖氨酸脱羧酶试验

尿素酶试验

氰化钾试验

动力检查

血清学凝集试验

3、结果判断及报告

增添一些必要的生化试验。

4、注意事项

三、沙门菌噬菌体检验法(10min)

四、荧光抗体法(10min)

五、其它方法(10-20min)

ELISA

DNA探针

PCR技术

第八周,第九周(160min)

了解金黄色葡萄球菌的特性,掌握其检验方法

致病性,检验方法

血浆凝固酶试验

第三节金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)检查法

一、生物学性状(40min)

(一)形态与染色

(二)培养特征

(三)生化反应

(四)抗原构造

(五)抵抗力

(六)致病性

二、常规检查法(80min)

增菌培养

纯培养

革兰氏染色镜检

血浆凝固酶试验:

结果判定

三、其他鉴别试验(40min)

溶血试验法

肠毒素测定:

磷酸酶试验

耐热DNA酶试验:

触酶试验

第十周,第十一周(160min)

了解梭菌的特性,掌握产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌检验方法

特征性生化试验和动物毒素试验

第四节梭菌(Clostridium)检查法

一、梭菌概述(20min)

(一)梭菌形态特征

(二)培养特性

(三)检查方法

二、产气荚膜梭菌检查(60min)

(一)生物学特性

(二)产气荚膜梭菌半定量测定

(三)特征性生化试验

牛乳发酵

乳糖分解-明胶液化试验

卵磷脂酶试验与奈格尔试验

三、破伤风梭菌检查法(60min)

1、梭菌形态特征

3、生化反应

4、致病力

(二)检验方法

1、增菌产毒培养:

2、革兰染色镜检

3、毒力试验

4、分离培养

5、结果判定

(三)注意事项

四、肉毒梭菌检查法(20min)

第十二周(80min)

掌握GMP中的微生物检验标准和技术

空气洁净度的检测方法

药品微生物检定技术,李榆梅主编,化学工业出版社,2006;

85-96

提问讨论:

肉罐头中应检查哪种梭菌(10min)

第六章GMP中的微生物检验

一空气洁净度标准(10min)

1、英制(粒/ft3):

209E空气洁净度标准

2、公制(粒/L):

原苏联、澳大利亚标准,分三级。

3、国际公制(粒/米3)

二、洁净环境中微生物学警告水平和行动水平的建立(10min)

1警告水平

2行动水平

三、模拟生产操作步骤微生物学评估(10min)

四、空气洁净度的检测方法(重点和难点,30min)

1、制定采样计划和采样位置的关键因素

2、采样频率

3、洁净室采样点布置

4、设备

5、测定方法

(1)浮游菌测数

(2)沉降菌测试

五、微生物环境控制程序(10min)

第十三周(80min)

随堂考试

回顾所学内容(40min)

课堂答疑(40min)

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