普通染色方法在神经研究中的应用Word文档格式.docx
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绿色变浅。
（3）o．3％冰醋酿溶液，在临用前配制.
3．染色方法：
（]）切片常规脱蜡至水
（2）harris苏木素液染5分钟；
（3）双蒸水冲洗5分钟；
〔4）三色液染30分钟；
（5）0．3％冰醋酸冲洗2次，每次5秒钟；
流水冲洗5—10分钟。
至切片组织不脱色为止；
（7）脱水、透明、中性树胶封片。
参考：
邓平，中华病理学1998
用于培养的背根神经节步骤相似。
为研究周围神经髓鞘被覆状态，我们经常要进行髓鞘染色
或许研究神经轴突髓鞘化的战友可以把细胞培养在盖玻片上试一试。
附件：
提到了其他的一些染髓鞘的方法以及染神经元的浸银法，如果哪位战友试验过在培养的细胞中应用，请来此介绍一下，汇编成册，以算是功德一件。
来源于病理版
锇酸osmicacid染色周围神经横切面，具体方法不知道
goldimpregnation（氯化金浸染）染色－－神经肌肉接头－－台大医学系资源网
张赛霞－－－广州中医药大学
取材与固定
取体重为3～4千克,年龄为3～4岁的猫,断头
处死,取肋间肌,（置生理盐水中）,然后剪成1～2mm
厚的小块,分别置于5%、10%、15%的柠檬酸水溶
液和20%的甲酸溶液中固定1-115hr至肌组织呈
透明状。
染色方法
将已透明的肌组织用蒸馏水速洗一次,用滤纸
吸干,入1%氯化金水溶液中浸染1-2hr至肌组织
变成金黄色。
取出组织块用滤纸吸干,入20%的甲
酸溶液中还原12-24hr至肌组织变成棕褐色。
蒸
馏水洗数次,滤纸吸干,入纯甘油中软化过夜,并可
保存于甘油中较长时间,期间更换数次新甘油。
压片
剪米粒大小的组织块,用滤纸吸干,置于载玻片
上,滴一滴D.P.X封片胶,加盖玻片稍压即可
Cajal银浸染色----polka所有
固定:
4%甲醛液固定,冷冻切片,厚20~30微米;
试剂配制:
（1）硝酸银水溶液100ml,吡啶8滴,95%乙醇5ml;
（2）对苯二酚甲醛还原液:
对苯二酚0.3g,蒸馏水70ml,4%甲醛液20ml,丙酮10ml.
操作:
（1）冷冻切片,厚20~30微米,蒸馏水充分清洗;
（2）室温下,用硝酸银溶液浸染6~12小时,若37度下,则浸染2~5小时（切片呈浅棕色）;
（3）95%乙醇速洗2次;
（4）对苯二酚甲醛还原液1~3min;
（5）蒸馏水洗2min;
（6）0.2%氯化金水溶液调色5~10min;
（7）蒸馏水稍洗;
（8）5%硫代硫酸钠固定3min;
（9）蒸馏水洗2次;
（10）将切片组织浸于50%乙醇内,裱于载物片上,用滤纸稍吸干;
（11）无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固.
结果:
神经元,神经纤维呈棕至黑色;
无髓鞘轴突亦染色,背景紫灰色
showsthatneuroncellbodies（Perik）andprocessescontaincytoskeletalelementstermedneurotubulesandneurofilaments（NF）.Sonumerousaretheseelementsthatso-calledneurofibrilscanbeseenbylightmicroscopyafternervoustissuehasbeenimpregnatedwithsilversalts.Findthecellbodiesofthelargemotorneuronsinthisslideofspinalcordstainedbysilverimpregnation.Identifytheneurofibrilswhicharelocatedintheperikaryonandextendoutintothedendrites（Den）andthelargeraxons。
40倍光镜，脊髓，运动神经元，显示神经元胞体和突起中的细胞骨架－称为神经管和神经丝。
silverimpregnation
银浸染色在AlzheimerDisease中的应用。
图一（上）：
NeurofibrillaryDegeneration神经原纤维退变；
图二（中）：
bothalteration;
图三（下）：
Senileplaques老年斑
（下左）：
Senileplaques低倍
（下右）：
Senileplaques中等
来源：
http:
//www.neuropat.dote.hu/alzheim.htm
TTC染色的大鼠脑片wgh_soly战友处
同上－为steven668战友所有
1.关于TTC浓度的问题。
大多文献都说2%。
我也用过2%的浓度。
看看上面的图片就知道了。
红的地方发黑，白的地方发红。
请看看印度人写的一篇关于TTC浓度的文章（JoshiCN,JainSK,MurthyPS.Anoptimizedtriphenyltetrazoliumchloridemethodforidentificationofcerebralinfarcts.BrainResBrainResProtoc.2004Apr;
13
（1）:
11-7.）。
我看了这篇文章，就把浓度改为0.1%。
.效果很好，没有上面的情况，这个浓度敏感度高，红白分界清晰，红色是红色，白色是白色。
也明显减少了TTC得用量，何乐而不为呢？
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skyskytotopeditedon2005-08-2017:
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∙•【讨论】关于氨氯地平阿托伐他汀钙片有关物质
skyskytotop
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2005-08-2017:
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尼氏染色刚易战友所有
对于尼氏小体，用CresylViolo染色法（焦油紫）、Toluidineblue染色法（甲苯胺兰）、Thionine硫堇染色法，其实都差不多。
主要就是看你对哪种方法掌握的程度。
建议你可以把每种方法都试试，看看哪种效果最好。
如需拍照，更应制出对比鲜明的切片。
如果你对硫堇情有独钟的话，我这里有现成的方法（本人的些许心得）。
取厚度3mm左右的新鲜组织块，以10％甲醛溶液固定约5h。
经过脱水、透明、浸蜡等（由自动脱水机实行）。
染色方法：
石蜡切片5um，脱蜡至水；
蒸馏水冲洗数遍，用2％硫堇溶液58度温箱染1h；
再用蒸馏水冲洗，95％酒精分化（不能过度），无水酒精脱水，二甲苯透明（此步骤在一般操作中略过，因其有一定的神经和血液毒性，如果制片量少，可以采用，可增加图像的视觉效果），封片。
结果：
尼氏小体深兰色，核淡兰。
windwing680和fzp211战友讨论
焦油紫染色
常用染色剂了解---（手头的资料不全）
细胞核染料
1.苏木精（hematoxylin）细胞核染料，易溶于无水酒精、甘油和热水中。
其本身不是染料，不能直接染色，必须先氧化成苏木红并使其成熟，配合适当的媒染剂增加亲和力后，才有染色作用。
常用的媒染剂有：
硫酸铝铵（铵矾）、钾明矾以及铁明矾。
氧化剂有：
氧化汞、高锰酸钾、过氧化氢。
如果不急等染色用，可在日光中自然成熟后再用。
自然成熟的染色液配制时间愈长染色效果愈强、愈好。
组织被染色后保存时间长、不易退色，颜色鲜艳，应用广泛。
是染细胞核的首选染色剂。
除染细胞核外，还可以染软骨、线粒体、神经胶质纤维等。
染细胞核时，最初为紫红色或者深砖红色，在碱性溶液中反蓝，为鲜艳的蓝色或深蓝色。
注意在酸性溶液中容易被脱色。
染色过程常常用0.1％－－0.3％的酸性水溶液或者酸性酒精作为分色剂；
不能染色时间太长，容易过染（背景变深，不该着色的部位也着色）。
2.甲苯胺蓝－O（yoluidinebuleo）碱性染料，硫堇的代替品，溶于水，因此常用1%的水溶液。
染细胞核、黏液、软骨基质‘肥大细胞颗粒、尼氏小体，细胞核蓝色、其他为蓝紫色。
在组织化学染色中，测定胸腺核苷酸。
3.亚甲蓝（美蓝，methyleneblue）碱性染料，蓝色粉末。
溶于水，不溶于酒精。
是一种重要的细胞核染料。
还可以用于染细菌、神经组织、浆细胞、尼氏小体、嗜碱性颗粒、肥大细胞、血液等，其优点是不会过染。
有异染性，组织被然成蓝色。
细胞质染料
1.伊红－Y,伊红－B（曙红Y，eosinY,eosinB）酸性染料，均能溶于水和酒精，不溶于二甲苯，为最长用的细胞质染色剂。
纯品为红中带蓝色的结晶或棕色粉末。
水溶液浓度高时为暗紫色，低时为红黄色，有黄绿色荧光；
酒精溶液浓度高时为红黄色，低时为红色。
细胞质染色为鲜艳的红色。
配置时加微量的酸（几滴）后，染色更加漂亮。
在低度酒精中容易脱色，在其内不能久置。
长与苏木精、甲基绿做对比染色。
颜色鲜艳、保存持久。
2.快绿（坚牢绿，fastgreen,FCF）酸性染料，能溶于水和酒精。
长配成1％的无水酒精溶液使用。
可与番红O做对比染色，还可以与番红O、甲基紫、橙黄G做四重染色。
此染色剂色彩鲜艳，不易退色，即使将染好的组织切片直接置于阳光的照射下，亮丽的绿色仍能保持数月之久，故此有坚固绿之称。
3.苦味酸（picricacid）：
为黄色结晶，强酸性，水中饱和度为0.9％－1.2％。
在空气中可自行燃烧，所以常常以在水中饱和形式保存。
常用来配制固定液及对比染色剂，染细胞质，在VanGieson结缔组织染色法中与酸性复红做对比染色。
细胞质、肌组织被染成黄色。
4.橙黄G（orangeG）酸性染料，能溶于酒精、丁香油，也能溶于水。
常常与龙胆紫等合并染胰岛的细胞。
作为苏木精的衬染，染细胞质，参与Mallory三色法对比染色结缔组织。
黄色。
优点是不容易过染。
5.甲基蓝（methyblue）强酸性染料，能在酒精和水中溶解。
既是一种重要的细胞质染料，也是一种良好的对比染色剂，水溶液还可以作为原生动物的活体染料。
被染组织为蓝色。
该染料容易在水中脱色，也极易氧化，因此染色不能保持太久为其最大缺点。
6.酸性品（复）红（acidfuchsin）酸性染料，为碱性品红的磺化衍生物，红色粉末。
染细胞质、红细胞、角化上皮、线粒体等为鲜艳的红色。
多用于VanGieson法和Mallory三色法染肌纤维，与苦味酸合用鉴别平滑肌和结缔组织。
就这么多吧。
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