微生物检验厌氧性细菌及检验Word文档下载推荐.docx
《微生物检验厌氧性细菌及检验Word文档下载推荐.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物检验厌氧性细菌及检验Word文档下载推荐.docx（24页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
沃廉菌属 2 产琥珀酸沃廉菌（来自牛瘤胃）和直线
沃廉菌（来自人牙龈沟）
月形单胞菌属 生痰月形单胞菌（来自人牙龈沟）和反
刍月形单胞菌（来自反刍动物瘤胃）
革兰阳性厌氧球菌
消化球菌属 1 黑色消化球菌
消化链球菌属 9 厌氧消化键球菌、不解糖化链球菌、吲
哚消化链球菌、大消化链球菌、微小消化
链球菌、产生消化链球菌、普氏消化链球
菌、四联消化链球菌
厌氧性链球菌成微需氧链球菌 4 麻疹链球菌、汉孙链球菌、多形链球菌
、短小链球菌、另外还有已属于口腔链
球菌的中间型链球菌和星群链球菌
瘤胃球菌属 8
粪球菌属 3
八叠球菌属 2
革兰阴性氧球菌
韦荣菌属 7 小韦荣菌、产碱韦荣菌
氨基酸球菌属 1 发酵氨基酸球菌
巨球菌属 1 埃氏巨球菌
二、厌氧菌感染
（一）厌氧菌在正常人体的分布
厌氧菌在人体的分布非常广泛，正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居。
厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌。
其中肠道中的厌氧菌数量是大肠埃希菌的1000～10000倍。
在人体肠道正常菌群中占绝对优势的有
A.双歧杆菌
B.伤寒沙门菌
C.大肠杆菌
D.变形杆菌
E.无芽胞厌氧菌
[答疑编号500735220101]
『正确答案』E
（二）临床意义
1.外源性感染：
梭状芽胞杆菌属引起的感染，其细菌及芽胞来源于土壤、粪便和其他外界环境。
少数致病菌能产生强烈外毒素和侵袭性酶，引起人和动物疾病。
2.内源性感染：
无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。
由厌氧菌引起的人类感染在所有的感染性疾病中占有相当大的比例，有些部位的感染如脑脓肿、牙周脓肿和盆腔脓肿等80%以上是由厌氧菌引起的。
其中部分系厌氧菌单独感染，大部分系与需氧菌混合感染。
3.厌氧菌感染的危险因素
1）组织缺氧或氧化还原电势降低，如组织供血障碍、大面积外伤、刺伤。
2）机体免疫功能下降，如接受免疫抑制剂治疗、抗代谢药物治疗、放射治疗、化学药物治疗的病人以及糖尿病患者、慢性肝炎患者、老年人、早产儿等均易并发厌氧菌感染。
3）机体局部屏障作用破坏：
某些手术及创伤，如开放性骨折、胃肠道手术、生殖道手术以及深部刺伤等易发生厌氧菌感染。
4）长期应用某些抗菌药物，如氨基糖苷类、头孢菌素类、四环素类等，可诱发厌氧菌感染。
5）深部需氧菌感染，需氧菌生长可消耗环境中的氧气，为厌氧菌生长提供条件，从而导致厌氧菌合并感染。
4.厌氧菌感染的临床及细胞学指征
1）感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发感，是产气荚膜梭菌所引起感染的特征。
2）发生在口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等处的感染，易发生厌氧感染。
3）深部外伤如枪伤后，以及动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。
4）分泌物有恶臭或呈暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。
产生红色荧光的分泌物，可能是产黑素普雷沃菌或不解糖紫单胞菌；
分泌物或脓肿有硫磺颗粒，为放线菌感染。
5）分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，而培养阴性者，或在液体及半固体培养基深部生长的细菌，均可能为厌氧菌感染。
6）长期应用氨基糖苷类抗生素无效的病例，可能是厌氧菌感染。
7）胃肠道手术后发生的感染。
三、厌氧菌标本的采集与送检
标本采集与送检必须注意两点：
标本绝对不能被正常菌群所污染；
应尽量避免接触空气。
1.采集：
采集标本须注意：
不被正常菌群污染，并尽量避免接触空气。
采集深部组织标本时，需用碘酒消毒皮肤用注射器抽取，穿刺针头应准确插入病变部位深部，抽取数毫升即可，抽出后可排出一滴标本于酒精棉球上。
若病灶处标本量较少，则可先用注射器吸取1ml还原性溶液或还原性肉汤，然后再抽取标本。
在紧急情况下，可用棉拭取材，并用适合的培养基转送。
厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长。
用于厌氧菌培养的标本不同于一般的细菌培养，多采用特殊的采集方法，如针筒抽取等，应严格无菌操作，严禁接触空气。
不同部位标本采集方法也各有不同特点，具体方法见表5-22-3。
表5-22-3不同部位标本采集方法
标本来源 收集方法
封闭性脓肿 针管抽取
妇女生殖道 后穹隆穿刺抽取
下呼吸道分泌物 肺穿刺术
胸腔 胸腔穿刺术
窦道、子宫腔、深部创伤 用静脉注射的塑料导管穿人感染部位抽吸
组织 无菌外科切开
尿道 膀胱穿刺术
哪些标本不符合厌氧菌检验要求
A.血
B.咽拭子
C.深部脓肿穿刺液
D.牙周脓肿穿刺液
E.膀胱穿刺液
[答疑编号500735220102]
『正确答案』B
2.送检方法与处理
标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h，以防止标本中兼性厌氧菌过度繁殖而抑制厌氧菌的生长。
如不能及时接种，可将标本置室温保存（一般认为，冷藏对某些厌氧菌有害，而且在低温时氧的溶解度较高）。
1）针筒运送：
一般用无菌针筒抽取标本后，排尽空气，针头插入无菌橡皮塞，以隔绝空气，立即送检。
这种方法多用于液体标本的运送，如血液、脓液、胸腹水、关节液等。
2）无菌小瓶运送：
一般采用无菌的青霉素小瓶，瓶内加一定量的培养基和少量氧化还原指示剂，用橡皮盖加铝盖固定密封，排除瓶内空气，充以C02气体。
同时先观察瓶内氧化还原指示剂的颜色，以判断瓶内是否为无氧环境，如合格将用无菌注射器将液体标本注入瓶中即可。
3）棉拭子运送一般不采用棉拭子运送，如果使用该方法，一定使用特制运送培养基，确保无氧环境，确保不被污染，确保快速送检。
4）厌氧罐或厌氧袋运送将厌氧罐或厌氧袋内装入可有效消耗氧气的物质，确保无氧环境。
该方法一般用于运送较大的组织块或床边接种的培养皿等。
四、厌氧菌的分离与鉴定
检验程序：
（一）直接镜检>
根据形态和染色性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估计。
表5-22-4厌氧菌直接镜检初步鉴别
菌名 革兰染色 形态及其他特征
脆弱类杆菌 G-b 两端钝圆，着深色，中间色浅且不均匀，且有气泡，
长短不一
产黑素普雷沃菌 G-b 多形性，长短不一，有浓染和空泡，无鞭毛和芽胞。
标本有恶臭，琥珀味，紫外线照射发红色荧光
具核梭杆菌 G-b 菌体细长，两头尖，紫色颗粒菌体长轴成双排列，
标本有丁酸味
坏死梭杆菌 G-b 高度多形性，长短不一，菌体中部膨胀呈圆球形
韦荣球菌 G-c 极小的革兰阴性球菌
消化链球菌 G+c 革兰阳性呈链状的小球菌
乳杆菌 G+b 细长，有时多形性，呈单、双、短链或栅状排列
痤疮丙酸杆菌 G+b 排列特殊呈X、Y、V或栅状，标本有丙酸气味
双歧杆菌 G+b 多形性，有分支呈Y、V形或棒状，标本有醋酸气味
放线菌 G+b 分支呈棒状、X、Y、V、或栅状，脓汁中有黄色颗粒
有琥珀酸气味
破伤风梭菌 G+b 细长、梭形或鼓槌状，有芽胞，有周鞭毛
产气荚膜梭菌 G+b 粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有荚膜
艰难梭菌 G+b 粗长杆菌，有芽胞，有鞭毛，近来发现有荚膜
c：
coccus，球菌；
b：
bacillus，杆菌。
（二）分离培养
主要分初代培养和次代培养两个阶段，其中初代培养相对比较困难，关键的问题就是厌氧环境和培养基的选择。
初代培养的一般原则是：
（1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择。
（2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。
（3）最好多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基。
（4）尽量保证培养基新鲜。
（5）要考虑到微需氧菌存在的可能。
1.选用适当的培养基接种：
应接种固体和液体两种培养基；
（1）培养基的使用，应注意下列各点：
1）尽量使用新鲜培养基，2～4h内用完；
2）应使用预还原培养基，预还原24～48h更好；
3）可采用预还原灭菌法制作的培养基（用前于培养基中加入还原剂，如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等，尽可能使预还原剂处于还原状态）；
4）液体培养基应煮沸10min，以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种；
5）培养厌氧菌的培养基均应营养丰富，并加有还原剂与生长刺激因子（血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等）。
（2）培养基的选择：
初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。
1）非选择培养基：
本培养基使分离的厌氧菌不被抑制，几乎能培养出所有的厌氧菌。
常使用心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。
2）选择培养基：
为有目的选择常见厌氧菌株，以便尽快确定厌氧的种类。
培养基
细菌
KVLB血平板
产黑素类杆菌早期产生黑色素
七叶苷胆汁平板（BBE）
脆弱类杆菌
FS培养基（梭杆菌选择培养基）
梭杆菌
ES培养基（优杆菌选择培养基）
优杆菌
BS培养基（双歧杆菌选择培养基）
双歧杆菌
卵黄（EYA）及兔血平板（RBA）
产气荚膜梭菌
CCFA培养基（艰难梭菌选择培养基）
艰难梭菌
VS培养基
韦荣球菌
2.每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10%C02环境中培养，以便正确地培养出病原菌，从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。
3.厌氧培养法
（1）厌氧罐培养法。
（2）气袋法。
（3）气体喷射法：
又称转管法。
（4）厌氧手套箱培养法：
是迄今厌氧菌培养的最佳仪器之一。
（5）其他培养法：
平板焦性没食子酸法；
生物耗氧法；
高层琼脂培养法。
4.厌氧状态的指示：
美蓝和刃天青。
无氧时均呈白色，有氧时美蓝呈蓝色，刃天青呈粉红色。
5.分离培养厌氧菌失败的原因：
①培养前未直接涂片和染色镜检；
②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长；
③未用新鲜配制的培养基；
④未用选择培养基；
⑤培养基未加必要的补充物质；
⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为唯一厌氧菌培养基；
⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气；
⑧催化剂失活；
⑨培养时间不足；
⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。
分离培养厌氧菌失败的原因可能是
A.厌氧装置的催化剂失活
B.标本在空气中放置过久
C.培养基不是新鲜配置
D.培养基成分不合适
E.以上均是
[答疑编号500735220103]
『正确答案』E
6.鉴定试验：
可根据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性作出初步鉴定。
最终鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。
（1）形态与染色：
可为厌氧菌的鉴定提供参考依据。
（2）菌落性状：
不同的厌氧菌其菌落形态和性质不同。
梭菌的菌落特点是形状不规则的，而无芽胞厌氧菌多呈单个的圆形小菌落。
色素、溶血特点以及在紫外线下产生荧光的情况也可以作为厌氧菌鉴定的参考依据。
（3）抗生素敏感性鉴定试验：
常用的抗生素有卡那霉素及甲硝唑。
卡那霉素可用于梭杆菌属与类杆菌属的区分。
甲硝唑用于厌氧菌与非厌氧菌的区分。
（4）生化特性：
主要包括多种糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酸酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验、胆汁肉汤生长试验以及硫化氢试验等。
目前有多种商品化的鉴定系统可以使用。
（5）气液相色谱：
可以利用该技术来分析厌氧菌的终末代谢产物，已成为鉴定厌氧菌及其分类的比较可靠的方法。
五、常见厌氧菌
（一）破伤风杆菌
1.生物学性状
本菌细长，有周鞭毛，无荚膜。
芽胞在菌体顶端，呈圆形，使整个细菌体呈鼓槌状。
早期培养物为革兰阳性，培养48小时后，尤其是芽胞形成后，易转变为革兰阴性。
（2）培养特性：
为专性厌氧菌，在普通培养基上不易生长。
可在血平板上生长，37℃48小时形成扁平、灰白色、半透明、边缘不齐的菌落。
（3）生化反应：
本菌一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，多数菌株吲哚阳性，不还原硝酸盐，对蛋白质有微弱的消化作用。
（4）抗原构造：
本菌有菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原。
（5）抵抗力：
繁殖体的抵抗力与其他细菌相似，但芽胞体抵抗力非常强，在干燥的土壤和尘埃中可存活数十年。
2.微生物学检查：
破伤风的临床表现典型，根据临床症状即可作出诊断，所以一般不做细菌学检查。
（1）特殊需要时，可从病灶处取标本涂片，革兰染色镜检。
（2）需要培养时，将标本接种疱肉培养基培养。
（3）也可进行动物试验。
3.临床意义：
>
本菌可引起人类破伤风，对人的致病因素主要是它产生的外毒素。
细菌不入血，但在感染组织内繁殖并产生毒素，其毒素人血引起相应的临床表现，本菌产生的毒素对中枢神经系统有特殊的亲和力。
主要症状为骨骼肌痉挛。
典型的临床症状为咀嚼肌痉挛造成的牙关紧闭、呈苦笑面容，以及颈部、躯干及四肢肌肉持续强直性痉挛导致的角弓反张，呼吸困难，终因窒息死亡。
4.治疗原则
（1）正确处理创口，包括清创、扩创等，防止厌氧微环境。
（2）可以尽早注射破伤风抗毒素，也可同时给予类毒素。
在注射抗毒素前应做皮试。
（3）采用四环素、红霉素等进行抗感染治疗。
（二）产气荚膜梭菌
产气荚膜梭菌为革兰阳性粗大杆菌，芽胞呈椭圆型，位于次极端。
体内不形成芽胞，在体外培养也很少形成芽胞，只有在无糖培养基上方可形成。
在机体内可形成明显的荚膜。
厌氧但不十分严格。
20℃～50℃均能旺盛生长，最适温度为45℃。
在血平板上，多数菌株有双层溶血环。
本菌代谢活跃，可分解多种糖类，产酸产气，能液化明胶，在疱肉培养基中，可分解肉渣中的糖类而产生大量气体。
在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量气体，出现“汹涌发酵”现象。
（3）分型：
根据其产生的毒素，大体可将产气荚膜梭菌分成5个型别（A、B、C、D、E），对人类致病的主要为A型。
2.微生物学检查
（1）直接涂片镜检：
在创口深部取材涂片，革兰染色镜检，这是极有价值的快速诊断方法。
（2）分离培养及鉴定：
可取坏死组织制成悬液，接种血平板或疱肉培养基中，厌氧培养，取培养物涂片镜检，利用生化反应进行鉴定。
本菌可产生外毒素及多种侵袭酶类，外毒素以α毒素为主，本质为卵磷脂酶；
还可产生透明质酸酶、DNA酶等。
本菌主要可引起气性坏疽及食物中毒等，气性坏疽多见于战伤，也可见于工伤造成的大面积开放性骨折及软组织损伤等。
病人表现为局部组织剧烈胀痛，局部严重水肿，水气夹杂，触摸有捻发感，并产生恶臭。
病变蔓延迅速，可引起毒血症、休克甚至死亡。
某些A型菌株产生的肠毒素，可引起食物中毒，病人表现为腹痛、腹泻，1～2天可自愈。
4.治疗原则：
对感染局部应及时处理，包括扩创，冲洗，切除坏死组织。
尽早使用多价抗毒素血清，同时用大剂量青霉素杀灭病原菌。
青霉素为首选抗生素，万古霉素为次选抗生素。
（三）肉毒梭菌
1.生物学性状：
肉毒梭菌为革兰阳性短粗杆菌，芽胞呈椭圆型，粗于菌体，位于次极端，使细菌呈汤匙状或网球拍状。
严格厌氧，可在普通琼脂平板和血平板上生长。
根据所产生毒素的抗原性不同，肉毒梭菌可分为8个型，引起人类疾病的以A、B型最为常见。
肉毒梭菌芽胞体抵抗力很强。
肉毒毒素对酸的抵抗力比较强，可在胃液24小时不被破坏，可被胃吸收。
但肉毒毒素不耐热，煮沸1分钟即可被破坏。
肉毒毒素的毒性比氰化钾强1万倍，是已知最剧烈的毒素，对人的致死量为0.1～1.Oμg。
2.临床意义：
本菌主要可引起食物中毒，属单纯性毒性中毒，并非细菌感染。
临床表现与其他食物中毒不同，胃肠症状很少见，主要表现为某些部位的肌肉麻痹，重者可死于呼吸困难与衰竭。
本菌还可以引起婴儿肉毒病，一岁以下婴儿肠道内缺乏拮抗肉毒梭菌的正常菌群，可因食用被肉毒梭菌芽胞污染的食品后，芽胞在盲肠部位定居，繁殖后产生毒素，引起中毒
3.微生物学检查
（1）分离培养与鉴定：
在怀疑为婴儿肉毒病的粪便中检出本菌，并证实其是否产生毒素，诊断意义较大。
（2）毒素检测：
可取培养滤液或悬液上清注射小鼠腹腔，观察动物出现的中毒症状。
尽早诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素，同时进行对症治疗。
（四）艰难梭菌
为革兰阳性粗长杆菌，有鞭毛，次极端有卵圆形芽胞。
芽胞可在外环境存活数周至数月，分离困难，需要特殊培养基。
由于本菌的分离培养困难，所以在临床上一般不采用分离培养病原菌的方法，可通过临床表现及细胞毒素试验阳性检测来进行诊断。
在CCFA平板上的菌落，黄色，粗糙型，脂酶，卵磷脂酶阴性。
在紫外线照射下呈黄绿色荧光。
3.临床意义本菌可产生A、B两种毒素，毒素A为肠毒素，可使肠壁出现炎症，细胞侵润，肠壁通透性增加，出血及坏死。
毒素B为细胞毒素，损害细胞骨架，致细胞固缩坏死，直接损伤肠壁细胞，因而导致腹泻及假膜形成。
本菌感染与大量使用抗生素有关，如阿莫西林、头孢菌素和克林霉素等，其中以克林霉素尤为常见。
艰难梭菌所致伪膜性肠炎，病人表现为发热、粪便呈水样，其中可出现大量白细胞，重症患者的水样便中可出现地图样或斑片状假膜。
这些症状一般可在使用有关抗生素一周后突然出现。
及时调整或停止相关抗生素的使用，尤其是那些广谱抗生素。
可以用万古霉素加甲硝唑进行抗感染治疗。
六、无芽胞厌氧菌
（一）主要种类及生物学性状
无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。
见表5-22-5：
1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。
形态呈多形性，有荚膜。
除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。
2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。
为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。
其他革兰阴性球菌极少分离到。
3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。
本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。
4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：
（1）丙酸杆菌属：
小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。
表5-22-5与人类相关的主要无芽胞厌氧菌
革兰阴性 革兰阳性
杆菌球菌 杆菌 球菌
类杆菌属韦荣菌属 丙酸杆菌属 消化链球菌属
（Bacteriodes）（Veillonella） （Propionibacterium）（Peptostreptococus）
普雷沃菌属 双歧杆菌属
（Prevotella） （Bifidobacterium）
卟啉单胞菌属 真杆菌属
（Porphyromonas） （Eubacterium）
梭杆菌属
升级会员 