生物制品分析概论.ppt

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第十三章第十三章生物制品分析概论生物制品分析概论基本要求基本要求概述概述质量检验的基本程质量检验的基本程序与方法序与方法常用定量分析方法常用定量分析方法及其应用及其应用练习与思考练习与思考返回主目录返回主目录基本要求基本要求11掌掌握握本本类类药药物物质质量量检检验验的的基基本本程程序序与与方法类型。

方法类型。

22掌掌握握HPLCHPLC法法和和酶酶活活力力测测定定法法在在本本类类药药物测定中的应用。

物测定中的应用。

33熟熟悉悉本本类类药药物物的的范范围围、种种类类、质质量量控控制的要点。

制的要点。

44了解本类药物含量测定的其他方法。

了解本类药物含量测定的其他方法。

返回一、防病、治病的一、防病、治病的三大药源三大药源化学药物、生物药物、中药化学药物、生物药物、中药第一节第一节概概述述BiopharmaceuticsorBiopharmaceuticals二、生物药物的定义二、生物药物的定义利用生物体、生物组织或组成生物利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，综合利用生物学、体的各种成分，综合利用生物学、微生物学、免疫学、物理化学和药微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的药物。

学的原理与方法制得的药物。

广义的生物药物：

天然活性生物物广义的生物药物：

天然活性生物物质、人工合成或半合成的天然物质质、人工合成或半合成的天然物质类似物。

类似物。

三、生物药物的发展三、生物药物的发展第第一一代代：

利利用用生生物物材材料料加加工工制制成成的的含含有有某某些些天天然然活活性性成成分分物物质质与与混混合合成分的粗提物制剂；成分的粗提物制剂；垂体后叶粉及其注射液垂体后叶粉及其注射液甲状腺粉及其片剂甲状腺粉及其片剂胰酶及其肠溶片、肠溶胶囊胰酶及其肠溶片、肠溶胶囊三、生物药物的发展三、生物药物的发展第第二二代代：

根根据据生生物物化化学学和和免免疫疫学学原原理理，应应用用近近代代生生化化分分离离纯纯化化技技术术从从生生物物体体制制取取的的具具有有针针对对性性治治疗疗作作用用的特异生化成分；的特异生化成分；尿激酶、肝素钠、胰岛素尿激酶、肝素钠、胰岛素人血白蛋白、人免疫球蛋白人血白蛋白、人免疫球蛋白三、生物药物的发展三、生物药物的发展第第三三代代：

应应用用生生物物工工程程技技术术生生产产的的天天然然生生理理活活性性物物质质，以以及及通通过过蛋蛋白白质质工工程程原原理理设设计计制制造造的的具具有有比比天天然然物物质质更更高高活活性性的的类类似似物物，或或与与天天然然物物质质结结构构不不同同的的全全新新的的药药理理活活性性成成分。

分。

重组人生长激素、重组人重组人生长激素、重组人IL-2四、生物药物的分类四、生物药物的分类生化药物生化药物生物合成药物生物合成药物生物制品生物制品11生化药物：

生化药物：

例例：

氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。

：

氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。

甘氨酸、丙氨酸甘氨酸、丙氨酸五肽胃泌素五肽胃泌素硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白门冬酰胺酶、辅酶门冬酰胺酶、辅酶Q102.2.生物合成药物生物合成药物由微生物代谢所生成的药物由微生物代谢所生成的药物利用微生物及其酶转化反应共同完成的利用微生物及其酶转化反应共同完成的半合成药物半合成药物山梨醇山梨醇木糖醇木糖醇甘露醇甘露醇枸橼酸枸橼酸抗生素抗生素3.3.生物制品生物制品以微生物、细胞、动物或人源组织和体以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成。

技术制成。

疫苗疫苗抗病毒及抗血清抗病毒及抗血清血液制品血液制品重组重组DNA制品制品诊断制品等诊断制品等疫苗类药物疫苗类药物用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造而成。

或经组织培养后加以处理制造而成。

细菌类疫苗细菌类疫苗病毒类疫苗病毒类疫苗联合疫苗联合疫苗双价疫苗及多价疫苗双价疫苗及多价疫苗抗病毒及抗血清类药物抗病毒及抗血清类药物抗病毒：

用细菌类毒素或毒素免疫马或抗病毒：

用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物所取得的免疫血清其他大动物所取得的免疫血清抗菌（抗病毒）血清：

用细菌或毒素本抗菌（抗病毒）血清：

用细菌或毒素本身免疫马或其他大动物所取得的免疫血身免疫马或其他大动物所取得的免疫血清清抗体抗体被动免疫制剂被动免疫制剂血液制品血液制品由由健健康康人人的的血血液液或或经经特特异异免免疫疫的的人人血血浆浆，经经分分离离、提提纯纯或或由由重重组组DNA技技术术制制成成的的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分。

血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分。

主要用于临床治疗和被动免疫预防主要用于临床治疗和被动免疫预防人血白蛋白、人免疫球蛋白等人血白蛋白、人免疫球蛋白等重组重组DNADNA制品制品天然基因天然基因合成的核合成的核苷酸序列苷酸序列内切酶内切酶连接酶连接酶载载体体重组重组的遗的遗传物传物质质导导入入到到受体受体细胞细胞增殖、表达增殖、表达分离纯化分离纯化目的目的产物产物重组重组DNADNA制品制品细胞因子类细胞因子类生长因子类生长因子类激素类激素类酶类酶类疫苗疫苗单克隆抗体单克隆抗体诊断制品诊断制品用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫状态的制品。

状态的制品。

毒素、诊断血清、分群血清、分型血清、毒素、诊断血清、分群血清、分型血清、因子血清、诊断菌液、抗原或抗体致敏因子血清、诊断菌液、抗原或抗体致敏血球、免疫扩散板等血球、免疫扩散板等体外诊断制品和体内诊断制品体外诊断制品和体内诊断制品五、中国生物制品的发展历史五、中国生物制品的发展历史我我国国第第一一所所生生物物制制品品生生产产、研研究究机机构构：

中中央央防防疫疫所所（1919年年）（北北京京生物制品研究所前身）生物制品研究所前身）50年年代代，先先后后成成立立了了北北京京、武武汉汉、长长春春、成成都都、兰兰州州、上上海海6大大卫卫生生部部直直属属的的生生物物制制品品研研究究所所以以及及中中国国医医学学科科学学院院昆昆明明医医学学生生物物研研究究所所、成成都输血研究所。

都输血研究所。

一些常用的预防性制品和血液制品一些常用的预防性制品和血液制品五、中国生物制品的发展历史五、中国生物制品的发展历史60年年代代初初成成立立中中国国药药品品生生物物制制品品检检定所定所80年年代代后后，进进入入高高速速发发展展期期：

出出现现大大量量生生物物制制品品企企业业；种种类类、剂剂型型快快速速增增加加；由由预预防防性性制制品品发发展展至至诊诊断断性制品，治疗、保健性制品性制品，治疗、保健性制品五、中国生物制品的发展历史五、中国生物制品的发展历史1956年成立卫生部生物制品委员会年成立卫生部生物制品委员会1988年年成成立立卫卫生生部部生生物物制制品品标标准准化化委员会。

委员会。

在在审审批批方方面面，为为与与化化学学药药、中中药药区区别别，国国家家药药品品监监督督管管理理局局专专门门制制定定了了新生物制品审批办法新生物制品审批办法六、生物药物的特点六、生物药物的特点1、生物体的基本生化成分、生物体的基本生化成分2、分子量大、不确定：

分子量测定、分子量大、不确定：

分子量测定3、结构难确证、结构难确证4、需检查生物活性、需检查生物活性5、要求安全性检查、要求安全性检查6、需做效价测定、需做效价测定7、全过程的质量控制、全过程的质量控制生物制品的全程控制生物制品的全程控制危险因素：

异源物质、不稳定、易受微危险因素：

异源物质、不稳定、易受微生物污染生物污染全程质量控制：

原材料、生产过程、最全程质量控制：

原材料、生产过程、最终产品终产品生物制品的生产特点：

生物制品的生产特点：

（1）来源于生物体）来源于生物体

（2）制造过程涉及生物材料和生物学）制造过程涉及生物材料和生物学特征特征（3）工艺存在易变性和安全性问题）工艺存在易变性和安全性问题生物制品的全程控制生物制品的全程控制全程质量控制尚无成熟的经验与方法全程质量控制尚无成熟的经验与方法鉴定方法的独特性鉴定方法的独特性生物制品安全性、有效性的保证：

生物制品安全性、有效性的保证：

（1）严格遵守）严格遵守GMP标准标准

（2）完善的制造检定规程）完善的制造检定规程（3）各生产工序相适应的检定方法、）各生产工序相适应的检定方法、标准操作细则（标准操作细则（SOP）药品国家标准：

法定技术依据、标准药品国家标准：

法定技术依据、标准生物制品的国家标准生物制品的国家标准生物制品及鉴定规程草案生物制品及鉴定规程草案（1952）生物制品制造检定规程生物制品制造检定规程（1959）中国生物制品规程中国生物制品规程（第（第6版版2000）中华人民共和国药典中华人民共和国药典（三部）（三部）（2005），收载），收载101种生物制品种生物制品各部药典收载情况一部药典：

药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂等；二部药典：

化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品以及药用辅料等；三部药典：

生物制品，包括疫苗、抗毒素及抗血清、重组DNA制品、体内诊断制品等；项目：

1.品名（中文通用名称、英文名称、汉语拼音）2.定义、组成及用途3.基本要求4.制造5.检定（原液、半成品、成品）6.保存运输及有效期7.使用说明（仅预防类含此项）生物制品质量控制的重点生物制品质量控制的重点有效成分的统一性、结构确证有效成分的统一性、结构确证有效成分的均一性、纯度检验有效成分的均一性、纯度检验有害物质及残余杂质的控制有害物质及残余杂质的控制高效、灵敏的生物活性及比活性实验方高效、灵敏的生物活性及比活性实验方法法生生化化药药物物和和基基因因工工程程药药物物质质量量检检验验的的基本程序与方法基本程序与方法鉴别试验鉴别试验杂质检查杂质检查安全性检查安全性检查含量、效价测定含量、效价测定鉴鉴别别试试验验理化鉴别试验理化鉴别试验化学反应法化学反应法光谱鉴别法光谱鉴别法UVUV色谱鉴别法色谱鉴别法HPLCHPLC生物化学鉴别法生物化学鉴别法酶法酶法电泳法电泳法-等电聚焦电泳、等电聚焦电泳、PAGEPAGE生物鉴别法生物鉴别法对比吸收光谱和特征对比吸收光谱和特征吸收的一致性吸收的一致性对比色谱保对比色谱保留行为的一留行为的一致性致性第二节第二节鉴别试验鉴别试验

（一）理化鉴别法一）理化鉴别法1.1.化学鉴别法化学鉴别法：

例：

胰蛋白酶例：

胰蛋白酶+对甲苯基磺酰对甲苯基磺酰-L-L-精氨酸精氨酸甲酯盐酸盐甲酯盐酸盐紫色紫色2.2.紫外分光光度法紫外分光光度法l蛋蛋白白质质的的UVUV：

芳芳香香族族氨氨基基酸酸侧侧链链（主主要要是是酪氨酸、色氨酸，其次是苯丙氨酸）酪氨酸、色氨酸，其次是苯丙氨酸）l重重组组人人干干扰扰素素1b、2a、2b最最大大吸吸收收峰峰278nm3nm；l重重组组人人促促红红素素：

最最大大吸吸收收279nm2nm；最最小小吸吸收收250nm2nm；在在320nm360nm处无吸收峰处无吸收峰3.3.高效液相色谱法高效液相色谱法l主峰保留时间和肽图的一致性主峰保留时间和肽图的一致性l结结合合N-N-末末端端氨氨基基酸酸序序列列分分析析，是是蛋蛋白白质类生物制品精确的鉴别方法质类生物制品精确的鉴别方法高效液相色谱法：

高效液相色谱法：

1、反相高效液相色谱法、反相高效液相色谱法2、分子排阻色谱法、分子排阻色谱法毛细管电泳毛细管电泳1、毛细管区带电泳、毛细管区带电泳CZE重组人粒细胞集落刺激因子重组人粒细胞集落刺激因子的肽图分析的肽图分析1、RP-HPLC条件：

条件：

VydacC18（1504.6,5m）MP:

0.1%CF3COOH-CH3CNingradientelutionFR:

0.5ml/minDW:

214nm2、CZE条件：

条件：

毛细管柱毛细管柱37cm75m，有效长度，有效长度30cmBuffer:

0.05mol/L的磷酸盐水溶液，的磷酸盐水溶液，pH5.8运行电压：

运行电压：

12KVDW：

214nm二、生化鉴别法二、生化鉴别法1.1.酶法酶法：

例：

尿激酶的鉴别例：

尿激酶的鉴别-气泡上升法气泡上升法