甘蔗生理生化测定指标修改版文档格式.docx

甘蔗生理生化测定指标修改版文档格式.docx

《甘蔗生理生化测定指标修改版文档格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《甘蔗生理生化测定指标修改版文档格式.docx（34页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

采用简易加热设备的，则因烘烤温度不易控制，精度较差。

称重烘干法是人工取土，劳动强度较大，又不能定点观测土壤湿度的连续变化，往往某些有机质在此温度时能逐渐分解而失重或氧化而增重。

因此，用此法只能测得近似的水分含量。

由于该法的准确度和精密度通常已达到土壤分析的要求，故测定土壤水分仍以烘箱法为准。

二、仪器设备

铝盒，土钻，天平，坩埚钳，干燥器，电子天平，分析天平，电热式恒温箱。

三、测定步骤：

1.在野外土壤水分观测点用土钻取样装入铝盒，取湿土重量一般以30-50g为宜，太少容易产生太大误差。

每个观测点应作三次重复。

2.称铝盒重：

取有编号的铝盒一个，洗净，放入恒温箱中，敞开盖子，在105℃-110℃烘干30分钟，用坩埚钳取出放在干燥器中盖好盖子，冷却到室温（大约20分钟），在分析天平上称重，然后再烘20分钟称重，直到恒重为止，此为铝盒重（W1）

3.取代表性样品约15～20克装入铝盒，在室内将装有土样的铝盒称重，在电子天平上用一张小纸称风干土壤样品，并将土壤平铺上述已知重铝盒中，盖上盖子，在分析天平上称量出铝盒加湿土的质量（W2）。

每个样品至少重复三次。

4.揭开铝盒盖，放入烘箱中，在105℃下烘至恒重（6-8h），用坩埚钳从烘箱中取出铝盒，盖好盒盖后放入底部有CaCl2的干燥器中约30分钟，如无干燥器则可放入磁盘或木盘中待至不太烫手时称质量。

然后，再将样品放入烘箱中烘烤2～3小时，马上在分析天平上称重称量，即铝盒加烘干土的重量（W3）。

一直到前后两次称量相差不超过0.05克时为止。

三、结果计算：

以烘干土壤为基础水分的百分数

以风干土壤为基础水分的百分数

式中：

W2—湿土＋铝盒重g

W3—烘干士＋铝盒重g

W1—铝盒重g

土壤速效氮、磷、钾的测定

一.土壤速效N的测定（碱解扩散法）

1、原理：

用1.0N氢氧化钠水解土壤样品，使土壤潜在有效氮，转化为氨气状态，不断逸出，由硼酸吸收，用标准酸滴定，然后计算出水解性氮的含量。

2、仪器及试剂配制

主要仪器：

扩散皿、半微量滴定管、恒温箱

试剂配制：

（1）1.0N氢氧化钠称取化学纯氢氧化钠40克，用水解溶解后冷却定容1升。

（2）硼酸指示剂液称取硼酸（H3BO3）20克加水900毫升稍稍加热溶解，冷却，加混合指示剂（0.099克溴甲酚绿和0.066克甲基红溶于100毫升乙醇中）20毫升，然后以0.1N氢氧化钠调节溶液至红紫色（PH约5.0）最后加入水稀疏至1000毫升，使溶液混合均匀，贮存于塑料瓶中。

（3）0.005mol/L（1/2H2SO4）标准溶液量取H2SO4（化学纯）2.83mL，加蒸馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0.020mol/L（1/2H2SO4）标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍，即得0.005mol/L（1/2H2SO4）标准液。

（4）碱性胶液取阿拉伯胶40.0g和水50mL在烧杯中热温至70～80℃。

搅拌促溶，约1h后放冷。

加入甘油20mL和饱和K2CO3水溶液20mL，搅拌、放冷。

离心除去泡沫和不溶物，清液贮于具塞玻瓶中备用。

3、操作步骤：

取通过60号筛的风干样品2.00克于扩散皿外室，水平的轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。

在扩散皿内室加入2%硼酸指示剂液2毫升，然后在扩散皿外室边缘涂上碱性甘油，盖上毛玻璃，并旋转数次，以使毛玻璃与皿边完全粘住，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿漏出一条缝，迅速加入1.0N氢氧化钠5毫升于扩散皿外室，立即用毛玻璃盖好。

水平轻轻旋转扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋固定，随后小心的放入40度的恒温箱中24小时取出，以0.01N硫酸标准溶液滴定扩散皿内室硼酸溶液吸收的氨量，终点是由蓝绿色转变红紫色，记下所用的标准酸量（V）

4、计算结果：

式中；

c—0.005mol/L（1/2H2SO4）标准溶液的浓度；

V—样品滴定时用去0.005mol/L（1/2H2SO4）标准溶液体积（mL）；

V0—空白试验滴定时用去标准液体积（mL）

14.0—氮原子的摩尔质量（g·

mol-1）

W—样品质量（g）；

103—换算系数

二.土壤速效P的测定——鲍士旦主编.土壤农化分析.第三版.北京：

中国农业出版社,2000.12:

74-83

中性和石灰性土壤速效磷的测定（0.5M碳酸氢钠法）

1、原理:

石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在,不能用酸溶液提取有效磷.一般用碳酸盐的碱溶液.由于碳酸根的同离子效应,碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度就有利于磷酸钙盐的提取，同时碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。

往复振荡机、分光光度计

（1）0.5M碳酸氢钠浸提液溶解42.0克碳酸氢钠于800毫升水中，以0.5N氢氧化钠调节浸提液pH至8.5。

此溶液暴于空气可因失去CO2而使pH增高，可于液面加一层矿物油保存。

贮存超过一个月，应检查pH是否改变。

（2）无磷活性炭活性炭常常含有磷，应做空白试验，检查有无磷存在。

含磷较多，须用2NHCl浸泡过夜，用蒸馏水多次后，再用0.5M碳酸氢钠浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水冲洗多次，并检查到无磷为止。

含磷较少可直接用碳酸氢钠处理即可。

（3）磷标准溶液准确称取105℃烘干过4~8小时的分析纯KH2PO40.2197克于小烧杯中，以少量水溶解，将溶液全部洗入1000毫升的容量瓶中，然后加H2SO45毫升，用水定容至刻度摇匀，此溶液为磷标准溶液（50μg/mLP），吸取50毫升此溶液稀释至500毫升，即溶液为磷标准溶液（5μg/mLP）

（4）7.5N硫酸钼锑贮存液

A.5g·

L-1酒石酸氧锑钾溶液：

取酒石酸氧锑钾0.5g，溶解于100mL水中。

B.钼酸铵——硫酸溶液：

称取钼酸铵10g，溶解于450mL水中，缓慢地加入153mL浓H2SO4，边加边搅。

再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。

充分摇匀．贮于棕色瓶中．此为钼锑抗混合液。

（5）钼锑抗混合显色剂于100毫升钼锑贮存液中，加入1.5克左旋抗坏血酸，此试剂有效期24小时，宜用前配制。

称取通过20目筛的风干样品5.00克于200毫升三角瓶中，加入0.5M碳酸氢钠溶液100毫升，再加一角勺无磷活性炭，塞紧瓶塞，在振荡机上振荡30分钟，立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100毫升三角瓶中，立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100mL三角瓶中，吸取滤液10mL（含磷量高时吸取2.5~5.0mL，同时应补加0.5M碳酸氢钠浸提液至10mL）于150mL三角瓶中，再用滴定管准确加入蒸馏水35mL，然后移液管加入钼锑抗试5mL，摇匀，放置30min后，用880nm或700nm波长进行比色。

以空白液的吸收值为0，读出待测液的吸收值（A）。

磷标准曲线绘制：

分别取5Pμg/mL磷标准溶液0、1、2、3、4、5mL于150mL三角瓶中，再加入0.5M碳酸氢钠10mL，准确加水使各瓶的总体积达到45mL，摇匀；

最后加入钼锑抗试剂5mL，混匀显色。

同待测液一样进行比色，绘成标准曲线。

最后溶液中磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μg/mL。

式中式中：

p—由标准曲线计算出P的质量浓度（μg/mL）

V—显色时定容体积

ts—为分取倍数（即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比）；

m—风干土质量（g）

k将风干土换算成烘干土质量的系数；

103将μg换算成mg；

三.土壤速效K的测定（NH4OAc浸提，火焰光度计测定法）

以NH4OAc作为浸提剂与土壤胶体阳离子起交换作用。

NH4OAc浸提剂常用火焰光度计直接测出。

为了抵消NH4OAc的干扰影响，标准钾溶液也需要用1NNH4OAc配制。

2、仪器及试剂配制：

主要仪器：

火焰光度计、往返式振荡机。

（1）1N中性醋酸铵溶液称取化学纯醋酸铵77.09克加水稀释，定容至近1L，用HOAc或NaOH调至PH7.0，然后稀释至1升。

（2）钾的标准溶液的配制及标准曲线的绘制准确称取烘干（105℃4-6小时）的分析纯KCl0.1907克溶于水中，定溶至1升，即含K100μg/mL。

然后分别准确吸取此100μg/mLK标准液0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0mL放入100mL容量瓶中，用1N中性醋酸铵溶液定容，即得0、2.5、5、10、15、20、40μg/mLK标准系列溶液。

称取通过1毫米筛孔的风干土5.00克于100毫升三角瓶中，加入50毫升1N中性NH4OAc溶液，塞紧橡皮塞，振荡30min，用干的普通定性滤纸过滤。

滤液盛于小三角瓶中，同钾标准系列溶液一起在火焰光度计上测定，记录其检流计上的读数，然后从标准曲线上求得其浓度。

4、结果计算：

V——加入浸提液毫升数

W——样品烘干重（克）

土壤有机质测定（稀释热法）

一、原理

稀释热法（水合热法）是利用浓硫酸和重铬酸钾迅速混和时所产生的热来氧化有机质，以代替外加热法中的油浴加热，操作更加方便。

由于产生的热，温度较低，对有机质氧化程度较低，只有77%。

二、仪器及试剂配制

仪器：

试剂：

（1）1mol/L（1/6K2Cr2O7）溶液。

准确称取K2Cr2O7（分析纯，105℃烘干）49.04g溶于水中，稀释至1L。

（2）0.4mol/L（1/6K2Cr2O7）的基准溶液。

准确称取K2Cr2O7（分析纯）（在130℃烘3h）19.613g于250mL烧杯中，以少量水溶解，将全部洗入1000mL容量瓶中，加入浓H2SO4约70mL，冷却后用水定容至刻度，充分摇匀备用其中含硫酸浓度约为2.5mol/L（1/2H2SO4）

（3）0.5mol/LFeSO4溶液。

称取FeSO4·

7H2O140溶于水中，加入浓H2SO415mL，冷却稀释至1L或称取Fe（NH4）2（SO4）·

6H2O196.1g溶解于含有200mL浓H2SO4的800mL水中。

稀释至1L。

此溶液的准确浓度以0.4mol/L（1/6K2Cr2O7）的基准溶液标定之。

即准确分别吸取3份0.4mol/L（1/6K2Cr2O7）基准溶液各25mL于150mL三角瓶中，加入邻啡罗琳指示剂2~3滴（或加2羧基代二苯胺12~15滴），然后用0.5mol/LFeSO4溶液滴定至终点，并计算出FeSO4的准确浓度。

硫酸亚铁（FeSO4）溶液在空气中易被氧化需重新配制或以标准的K2Cr2O7溶液每天标定之。

（4）邻啡罗琳指示剂：

称取邻啡罗琳（GB1293~77，分析纯）1.485g与FeSO4·

7H2O0.695g，溶于100mL水中。

（5）浓硫酸

三、实验步骤

1.土样的测定

准确称取0.5000g土壤样品于500mL的三角瓶中、然后准确加入1mol/L（1/6K2Cr2O7）溶液10mL干土壤样品中，转动瓶子使之混合均匀，然后加浓H2SO420mL，将三角瓶缓缓转动1min，促使混合以保证试剂与土壤充分作用，并在石棉板上放量约30min，加水稀释至250mL，加3~4滴邻啡罗琳指示剂，用0.5mol/LFeSO4标准溶液滴定至近终点时溶液颜色由绿变成暗绿色，逐滴加入FeSO4直至生成砖红色为上。

用同样的方法做空白测定（不加土样）。

2.结果计算：

1.33—为氧化校正系数；

c—为0.5mol/LFeSO4标准溶液的浓度；

V0—空白滴定用体积（mL）；

V—样品滴定用去体积（mL）；

10-3将mL换算为L；

3.0—1/4碳原子的摩尔质量（g/mol）；

1.724—土壤有机碳换成土壤有机质的平均换算系数。

光合作用强度测定

1.LI-6400测定系统测定植物光合

实验原理

LI-6400是一种开放型光合作用测定系统，即从进气口进入仪器主机的气体经主机头部一分为二，25%进入参考气体红外分析仪；

75%进入样品气体红外分析仪,然后气体各自排出仪器。

在光合作用测定过程中,有两种光源可供选择：

一是自然光，用透明叶室；

二是自动光源（为红光），此时将叶室的透明部分换成含产生光的部分（用自动光源时需事先设定程序）。

用自动光源测定时可测定植物的最大光合作用（Amax,即达到光饱和点时的光合作用）以及光合作用光照强度曲线。

测定时,仪器根据参考气体与叶室气体CO2浓度差、气体流速、叶面积等参数计算光合作用或呼吸作用速率；

根据参考气体与叶室气体H2O浓度差、气体流速、叶面积等参数计算蒸腾速率；

根据参考气体H2O与叶室H2O浓度与蒸腾速率计算叶面水分总导度；

又据此以叶片两面的气孔密度比率计算水分气孔导度即气孔导度（其倒数即为气孔阻力）；

根据气孔水分导度、叶片两面气孔密度比率、叶面边界层阻力计算气孔对CO2的导度；

最后,据气孔CO2导度、蒸腾速率、参考气体CO2浓度、光合速率计算胞间CO2浓度（Ci）。

LI-6400能够测定的植物光合与水分生理指标有:

净光合（呼吸）速率、蒸腾速率、总气孔导度、气孔导度或气孔阻力、胞间CO2浓度等。

性能指标

LI-6400主要性能指标有：

工作温度0~50℃，相对湿度10~80%（>

92%时仪器拒绝工作或停机）；

CO2红外分析仪测定范围0~3000µ

molmol-1,分辨率0.1µ

molmol-1，在0~1500µ

molmol-1之间误差为±

5µ

molmol-1，1500~3000之间为±

10µ

molmol-1；

H2O红外分析仪测定范围为0~7kPa或露点温度（Dewpoint）40℃，分辨率0.001kPa，误差<

0.006kPa；

光感应器测定范围为0~3000µ

molm-2S-1，分辨率<

1µ

molm-2s-1，误差±

7%。

基本操作要点

一、对LI-6400测定系统调零

1.开机预热20分钟。

2.进入Open（开机）状态,按f3键，进入Calibration（标定）状态。

3.将CO2去除剂（碱石灰）和水分干燥剂（均在主机左侧）上方的开关彻底打开（逆时针方向），这样气流经CO2去除剂和水分干燥剂后,变成无CO2和H2O的空气进入红外分析部位。

4.选择FlowRateZero（流速调零），调气体流速为0，以电信号±

1mVmin-1为准。

用荧屏左右的上下红色箭头键调节（下同）。

5.选择IRGAZero（红外气体分析仪调零）.首先调CO2为零，再调H2O为零，用f1、f2、f3功能键调之。

要求CO2达到±

0.1Lmolmol-1，H2O±

0.01mmolmol-1。

6.完成上述步骤后，将CO2去除剂和H2O干燥剂开关彻底关闭（顺时针方向,说明书上未提及此步骤）。

然后将探头上进入样品分析室的塑料管（带黑色环者）打开,并与标准CO2钢瓶塑料管连接。

7.选择IRGASpan（红外气体分析仪调跨度）,然后分别调CO2-A和CO2-B（参考气体和样品气体CO2红外分析仪,下同），用上下箭头调节，直至与标准气体CO2浓度相差±

1Lmolmol-1以内。

8.完成上述标定后，选择StoreFlowRate（流速调零存盘）和StoreZero&

SpanInformation（红外分析仪调零、调跨度存盘）存储标定参数，这样仪器即可在标定的状态下工作。

二、测定

1.在Open状态下,按f4键,进入NewMeasurement（测定）状态，按数字2后用f4设定温度，与环境温度不要相差太大；

用f5设置光强。

2.打开叶室，夹住被测植物叶片,使叶在叶室内的方向与其着生方向一致（用自动光源时不必作此要求）。

3.待荧屏上CO2-A、CO2-B、H2O-A、H2O-B、光合作用、蒸腾作用等显示的数据基本稳定后（约需3分钟），记录数据。

4.记录数据在新的测量模式下按（1，f1）打开一个文件。

输入文件名、记录号，当进行下一片叶测定时，用remark功能键重新做记录。

5.按数字1，观察仪器测定和存储数据的次数，待完成给定的次数后，按f3关闭文件，进行下次测定。

6.当所有的植物都测完以后，把仪器带回实验室，LI-6400与PC微机兼容的软件，将其装入计算机后可通过电缆将数据转入计算机。

2.TPS-1光合作用测定系统操作方法

1.连接叶室，气路R、A与主机上的接口（R、A）对应连接。

2.打开主机电源时显示的第一个菜单是主菜单：

1REC测定与记录2校正3数据输出

4清除内存5时钟校正6诊断

↓按1

选择叶室：

1标准叶室2通用型叶室

↓按2

1REC记录类型A：

用内部时钟设置时间进行自动记录；

M：

按Record键进行手动记录，按1键可以在A和M之间转换。

2INT每次记录的时间间隔。

FLO叶室气体的流量。

↓Y↑N

1:

LIGHT设置SUN为自然光，LAMP为人工光源。

2:

LEAFAREA输入夹入叶室内的实际叶面积,以cm2为单位

1P是小区号,用户输入，用于识别不同处理的测定记录。

R是记录号，如果改变小区号，记录号重新设置为01。

FREERECORDSnnn存储器能够存储测定结果的数量。

↓Y（进入测定菜单状态）

C为参比CO2浓度；

+/-nnn为分析气与参比气CO2浓度差值；

Q为量子通量密度；

H为参比水蒸气压；

+/-nn.n为分析气与参比气水蒸气压之间的差值；

T为叶室温度。

↓X↑（X转换键）

E蒸腾速率（mmol·

m-2·

s-1）；

G气孔导度（mmol·

T叶片温度；

A净光合速率（μmol·

s-1），正值为净光合速率，负值为呼吸速率大于光合速率。

CI细胞间隙CO2浓度。

在测定状态下按1/2/3返回到设置菜单；

1用于改变记录方式；

2用于改变光源或叶面积；

3用于改变小区号。

修改完毕，返回测定状态，按“Y”键。

（3）.选择待测叶片夹入同化室，给以适当的光照，观察△CO2值变化，待△CO2值稳定后（40秒左右）按X（转换键）观察记录结果，或按[0/R]，存储测定结果。

一个叶片的测定结束，进行另一叶片的测定。

测定结束，按N键返回到主菜单，关机。

叶绿素含量的测定

——张宪政主编，作物生理研究法，农业出版社，1992：

145-150

基本原理

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：

α比例常数。

当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。

各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

叶绿素a和叶绿素b的光谱吸收锋虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此又有重叠，这种情况下，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后分别得到两种组分的含量。

OD1=82.04Ca+9.27Cb

（1）

OD2=16.75Ca+45.6Cb

（2）

式中，Ca为组分a（叶绿素a）的浓度；

Cb为组分b（叶绿素b）的浓度；

将表中数值代入上式

（1）、

（2），经整理，得到下式：

Ca＝0.0127OD1－0.00269OD2

Cb＝0.0229OD2－0.00468OD1

如果把Ca、Cb的单位从原来的g/L改为mg/L，则上式可改写为下列形式：

Ca＝12.7OD1－2.69OD2（3）

Cb＝22.9OD2－4.68OD1（4）

Ct＝Ca+Cb＝8.04OD1+20.29OD2（5）

式中，Ct为总叶绿素的浓度，单位是mg/L。

利用式（3）（4）（5）可以计算叶绿素的量。

一、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：

新鲜（或烘干）的植物叶片。

（二）仪器设备：

1.分光光度计；

2.电子天平（感量0.01g）；

3.棕色容量瓶；

4.定量滤纸；

5.吸水纸；

6.擦镜纸。

（三）试剂：

96％乙醇；

80％丙酮；

去离子水或蒸馏水

二、实验步骤丙酮乙醇水混合液法（丙酮乙醇混合液法）

1．取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。

2．称取剪碎的新鲜样品0.5g，共2份，放入25mL的容量瓶中，然后加入乙醇:

丙酮:

水=4.5:

4.5:

1的提取液到刻度，静置暗处提取12小时。

（准确称取0.1左右，放入具塞得三角瓶或刻度试管中，加混合提取液10ml盖塞，在室温下（10-30度）暗处提取，直至材料变白（因材料不同需1-8h）。

对于少量样品如需短时间内测定，则应将三角瓶或试管放在50-60度，的水浴中快速提取20min-1h即可变白）

3.取上清液在663nm和645nm波长下测定光密度。

三、计算方法及公式（V=9mL）

叶绿素a含量=

植物组织中自由水和束缚水含量、相对含水量的测定

自由水未被细胞原生质胶体颗粒吸附而可以自由移动、蒸发和结冰，也可以作为溶剂。

束缚水则被细胞原生成胶体颗粒吸附而不易移动，因而不易被夺取．也不能作为溶剂。

基于上述特点以及水分依据水势差而移动的原理，将植物组织浸入高浓度（低水势）的糖溶液中一定时间后，自由水可全部扩散到糖液中．组织中便留下束缚水。

自由水扩散到糖液后（相当于增加了溶液中溶剂）便增加了溶液的重量．同时降低了溶液的浓度、测定降低了的糖液的浓度。

再根据原先已知的高浓度溶液的浓度及重量，可求出浓度降低了的糖液的重量。

用浓度降低了的溶液的重量减去原来高浓度溶液的重量即为植物组织中的自由本的重量（即扩散到高浓度溶液中的水的重量）。

最后，用同样的植物组织的总含水量减去此自由水的含量即是植物组织中束缚水的含量。

二、仪器设备及试剂配制

仪器设备：

阿贝折射仪，分析天平或电子顶载天平（感量0.1mg），烘箱，干燥器，称量

瓶．打孔器（面积0.5cm2左右），烧杯，瓷盘，托盘大平（感量0.1g），量筒。

重量百分浓度为60％～65％的蔗糖溶液：

用托盘天平称取