TLC原理及应用.docx

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TLC原理及应用

吸附剂对不同物质吸附能力不同；展开剂对不同物质溶解度不同，通过展开达到分离的目的。

即混合液点在薄层板上时，吸附剂对不同物质有不同程度的吸附，在用溶剂展开时，因薄层上的毛细管效应，溶剂上升，当升到原点时，混合物溶解，溶解后随着不断上升的溶剂上移于原点之上，遇到新的吸附剂又被吸附，接着又溶解、解吸，使斑点不断上移。

而在上升过程中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之则快些，从而达到“差速迁移”，当展开至一定距离后，就可达到分离混合物的目的。

斑点上升的高度用Rf表示：

Rf=原点至斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离,Rf≤1

展开剂极性越大，溶质Rf值越大（即爬的越高），但很可能降低分离能力；另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相似相溶原理，要使用多元溶剂体系。

留个邮箱吧，我有篇文章是将展开剂的选择，还不错

tlc原理与技术

（1）

有机TLC板显色问题的讨论

tlc原理与技术

（2）

2011-03-2117:

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三）.专属性显色剂

由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下：

（1）烃类

   ①硝酸银／过氧化氢

   检出物：

卤代烃类。

   溶液：

硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30％过氧化氢1滴。

   方法：

喷后置未过滤的紫外光下照射；   

   结果：

斑点呈暗黑色。

   ②荧光素／溴

   检出物：

不饱和烃。

   溶液：

I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；

       Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。

   方法：

先喷（I），然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素（曙红），荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。

   ③四氯邻苯二甲酸酐

检出物：

芳香烃。

   溶液：

2％四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯（10：

1）的溶液。

   方法：

喷后置紫外光下观察。

   ④甲醛／硫酸

   检出物：

多环芳烃。

   溶液：

37％甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。

（2）醇类

   ①3，5一二硝基苯酰氯

   检出物：

醇类。

   溶液：

I．2％本品甲苯溶液；

       Ⅱ．0.5％氢氧化钠溶液；

       Ⅲ．O.002％罗丹明溶液。

   方法：

先喷（I），在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液（Ⅱ）30s，喷水洗，趁湿通过（Ⅲ）15s，空气干燥，紫外灯下观察。

②硝酸铈铵

检出物：

醇类。

溶液：

I．1％硝酸铈铵的0.2mol／L硝酸溶液；

     Ⅱ．N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸（128m1+25m1+1．5m1）混合液中，用前将（I）与（Ⅱ）等量混合。

喷板后于105oC加热5min。

③香草醛／硫酸

检出物：

高级醇、酚、甾类及精油。

溶液：

香草醛1g溶于硫酸lOOml。

方法：

喷后于120oC加热至呈色最深。

④二苯基苦基偕肼’

检出物：

醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。

溶液：

本品15mg溶于氯仿25ml中。

方法：

喷后于110oC加热5～lOmin。

结果：

紫色背景呈黄色斑点。

（3）醛酮类

①品红／亚硫酸

检出物：

醛基化合物。

溶液：

I．0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色；

     Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液；

     Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。

   方法：

将I、Ⅱ、Ⅲ以1：

1：

10混合，用水稀释至l00ml。

②邻联茴香胺   

检出物：

醛类、酮类。

溶液：

本品乙酸饱和溶液。

③2，4-二硝基苯肼

检出物：

醛基、酮基及酮糖。

溶液：

I．0.4％本品的2mol／L盐酸溶液；

Ⅱ．本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。

方法：

喷溶液I或Ⅱ后，立即喷铁氰化钾的2mol／L盐酸溶液。

结果：

饱和酮立即呈蓝色；饱和醛反应慢，呈橄榄绿色；不饱和羰基化合物不显色。

④绕丹宁

检出物：

类胡萝卜素醛类。

溶液：

I．1%～5%绕丹宁乙醇溶液；

     Ⅱ．25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。

方法：

先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，干燥。

（4）有机酸类

①溴甲酚绿

检出物：

有机酸类。

溶液：

溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。

方法：

浸板。

结果：

蓝色背景产生黄色斑点。

②高锰酸钾／硫酸

检出物：

脂肪酸衍生物。

溶液：

见通用显色剂酸性高锰酸钾。

③过氧化氢

检出物：

芳香酸。

溶液：

0.3%过氧化氢溶液。

方法：

喷后置紫外光（365nm）下观察。

结果：

呈强蓝色荧光。

④2，6-二氯苯酚-靛酚钠

检出物：

有机酸与酮酸。

溶液：

0.1%本品的乙醇溶液。

方法：

喷后微温。

结果：

蓝色背景呈红色。

（5）酚类

①Emerson试剂（4-氨基安替比林／铁氰化钾（Ⅲ））

检出物：

酚类、芳香胺类及挥发油。

溶液：

I．4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml；

     Ⅱ．铁氰化钾（Ⅲ）4g溶于水50ml，用乙醇稀释至100ml。

方法：

先喷溶液I，在热空气中干燥5min，再喷溶液Ⅱ，再于热空气中干燥5min，然后将板置含有氨蒸气（25％氨溶液）的密闭容器中。

结果：

斑点呈橙-淡红色。

挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。

②Boute反应

检出物：

酚类、氯、溴、烷基代酚。

方法：

将薄层置有NO2蒸气（含浓硝酸）的容器中3～10min，再用NH2蒸气（浓氨液）处理。

③氯醌（四氯代对苯醌）

检出物：

酚类。

溶液：

1％本品的甲苯溶液。

④DDQ（二氯二氰基苯醌）试剂

检出物：

酚类。

溶液：

2％本品的甲苯溶液。

⑤TCNE（四氰基乙烯）试剂

检出物：

酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。

溶液：

0.5%～1%本品的甲苯溶液。

⑥Gibb’s（2，6-二溴苯醌氯亚胺）试剂

检出物：

酚类。

溶液：

2%本品的甲醇溶液。

⑦氯化铁

检出物：

酚类、羟酰胺酸。

溶液：

1%～5%氯化铁的0.5mol／L盐酸溶液。

结果：

酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。

（6）含氮化合物

①FCNP（硝普钠／铁氰化物）试剂

检出物：

脂        肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。

溶液：

10％氢氧化钠溶液、10％硝普钠溶液、10％铁氰化钾溶液与水按1：

1：

1：

3混合，在室温至少放置20min，冰箱保存数周，用前将混合液与丙酮等体积混合。

②Dragendorff（碘化铋钾试剂）试剂

检出物：

芳香族含氮化合物，如生物碱类、抗心律不齐药物。

溶液：

I．碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中；

     Ⅱ．碘化钾8g溶于水20ml中。

    ．

将上述溶液I及Ⅱ等量混合，置棕色瓶中作为储备液，用前取储备液lml、冰醋酸2ml与水l0ml混合。

结果：

呈橘红色斑点。

③4-甲基伞形酮

检出物：

含氮杂环化合物。

溶液：

本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。

方法：

喷板后置25％氨水蒸气的容器中,取出后于紫外灯（365nm）下观察。

④碘铂酸钾

检出物：

生物碱类及有机含氮化物。

溶液：

10％六氯铂酸溶液3ml与水97ml混合，加6％碘化钾溶液，混匀。

临用前配制。

⑤硫酸高铈铵／硫酸

检出物：

生物碱及含碘有机化物。

溶液：

硫酸铈1g混悬于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入浓硫酸直至混浊消失。

方法：

喷后薄层于1l0oC加热数分钟。

结果：

阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出。

⑥Ehrlich（对二甲氨基苯甲醛／盐酸）试剂

检出物：

吲哚衍生物及胺类。

溶液：

1％本品的浓盐酸溶液与甲醇按1：

1混合。

方法：

喷后板于50oC加热20min。

结果：

呈不同颜色的斑点。

（7）胺类

①硝酸／乙醇

检出物：

脂肪族胺类。

溶液：

50滴65％硝酸于乙醇100ml中。

方法：

需要时120oC加热。

②2，6-二氯醌氯亚胺

检出物：

抗氧剂、酰胺（辣椒素）、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药物、苯氧基乙酸除草剂等。

溶液：

新鲜制备的0.5％～2％本品乙醇溶液。

方法：

喷后薄层于110oC加热10min，再用氨蒸气处理。

③茜素

检出物：

胺类。

溶液：

O.1％本品的乙醇溶液。

④丁二酮单肟／氯化镍

检出物：

胺类。

溶液：

I．丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中，加氯化镍0．95g，冷却后加浓氨水2ml；

   Ⅱ．盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。

方法：

将溶液I及Ⅱ混合，放置1天，过滤。

⑤Pauly（对氨基苯磺酸）试剂

检出物：

酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。

溶液：

磺酸4．5g溶于温热的12mol／L盐酸45ml中，用水稀释至500ml，取lOml于冰中冷却，加4．5％亚硝酸钠冷溶液lOml，于OoC放置15min。

用前加等体积10％碳酸钠溶液。

⑥硫氰酸钴（Ⅱ）．

检出物：

生物碱、伯、仲、叔胺类。

溶液：

硫氰酸铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。

结果：

白色至粉红色背景上呈蓝色斑点，2h后颜色消退。

若将薄层喷水或放入饱和水蒸气容器内，可重现色点。

⑦1，2-萘醌-4-磺酸钠

检出物：

芳香胺类。

溶液：

本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，滤去不溶物即得。

方法：

喷后反应30min显色。

⑧葡萄糖／磷酸

检出物：

芳香胺类。

溶液：

葡萄糖2g溶于85％磷酸l0ml与水40ml混合液中，再加乙醇与正丁醇各30ml。

方法：

喷后于115℃加热l0min。

（8）硝基及亚硝基化合物

①α-萘胺

检出物：

3，5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。

溶液：

I．O．5％α-萘胺乙醇溶液；

     Ⅱ．10％氢氧化钾甲醇溶液。

方法：

先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。

结果：

呈红褐色斑点。

②二苯胺／氯化钯

检出物：

亚硝胺类。

溶液：

1.5％二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2％氯化钠溶液lOOml，按5：

1混合。

方法:

喷后置紫外光（254nm）下观察。

结果：

显紫色斑点。

（9）氨基酸及肽类

①茚三酮

检出物：

氨基酸、胺与氨基糖类。

溶液：

本品O.2g溶于乙醇l00ml中。

方法：

喷后于110oC加热。

结果：

呈红紫色斑点。

②茚三酮／乙酸镉

检出物：

氨基酸及杂环胺类。

溶液：

茚三酮1g及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀释至500ml。

方法：

喷后于120oC加热20min。

③1，2-萘醌-4-磺酸钠

检出物：

氨基酸。

溶液：

临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。

方法：

喷后室温干燥。

结果：

不同氨基酸呈不同色点。

④靛红／乙酸锌

检出物：

氨基酸与某些肽类。

溶液：

靛红1g与乙酸锌1g溶于95％异丙醇l00ml中，加热至80oC，冷却后加乙酸1ml，冰箱保存。

方法：

喷后于80～85"C加热30min。

    ．

⑤茚三酮／冰醋酸

检出物：

二肽及三肽。

溶液：

1％茚三酮吡啶溶液与冰醋酸按5：

1混合。

方法：

喷后于l00oC加热5min。

⑥香草醛

检出物：

氨基酸及胺类。

溶液：

I．本品1g溶于丙醇50ml中;

       Ⅱ．1mol／L氢氧化钾溶液lml，用乙醇稀释至lOOml。

方法：

先喷溶液I后于110oC干燥l0min，再喷溶液Ⅱ，于110oC再干燥l0min，于紫外光（365nm）下观察。

（10）甾类

①香草醛／硫酸

检出物：

甾体激素