溶菌酶的溶菌作用.ppt

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第三次实验第三次实验溶菌酶的溶菌作用溶菌酶的溶菌作用小吞噬实验小吞噬实验溶菌酶的溶菌作用溶菌酶的溶菌作用实验原理实验原理溶菌酶溶菌酶（lysozymelysozyme）又称胞壁质酶（又称胞壁质酶（muramidasemuramidase）或）或N-N-乙乙酰胞壁质聚糖水解酶（酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramideglycanohydrlaseN-acetylmuramideglycanohydrlase），是），是正常体液与分泌液中所含的一种正常体液与分泌液中所含的一种小分子碱性蛋白质。

它能水小分子碱性蛋白质。

它能水解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖成分解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖成分（作用于作用于-1，4糖苷键），糖苷键），使细胞壁崩解。

使细胞壁崩解。

溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与与DNADNA、RNARNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。

、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。

因此，该因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

是非特异性免疫中一种酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

是非特异性免疫中一种重要的体液物质。

重要的体液物质。

实验材料与器材实验材料与器材11、人的唾液（含有溶菌酶）、溶菌酶标准品、生理盐水。

、人的唾液（含有溶菌酶）、溶菌酶标准品、生理盐水。

22、细球菌（、细球菌（M.Lysodeikticus）M.Lysodeikticus）。

33、1.0%1.0%盐水琼脂管（盐水琼脂管（77-8mL/8mL/管）、灭菌的管）、灭菌的1mL1mL吸管、毛细吸管、吸管、毛细吸管、打孔器、平皿、竹签和橡皮乳头等。

打孔器、平皿、竹签和橡皮乳头等。

注：

注：

唾液唾液生理盐水（阴性对照）生理盐水（阴性对照）溶菌酶（阳性对照）溶菌酶（阳性对照）实验步骤：

实验步骤：

11、取灭菌的小平皿一个，用灭菌、取灭菌的小平皿一个，用灭菌1mL1mL的吸管吸取的吸管吸取0.5mL（90.5mL（9亿亿/mL/mL）细球菌活菌菌液注入）细球菌活菌菌液注入平皿内平皿内。

22、取已溶化并冷却至、取已溶化并冷却至45-5545-55的生理盐水琼脂管一支，倾的生理盐水琼脂管一支，倾注于上述平皿内，迅速水平混匀，平放待凝。

注于上述平皿内，迅速水平混匀，平放待凝。

33、用打孔器（孔径为、用打孔器（孔径为6mm6mm）打孔，用竹签挑出孔中琼脂。

）打孔，用竹签挑出孔中琼脂。

44、先用清水漱口，略待片刻将唾液吐于灭菌平皿内，用毛细、先用清水漱口，略待片刻将唾液吐于灭菌平皿内，用毛细吸管吸出（吸管吸出（注意不要有气泡，不要溢出注意不要有气泡，不要溢出），并分别加入生），并分别加入生理盐水和溶菌酶标准品。

置理盐水和溶菌酶标准品。

置3737，18h18h后观察结果。

后观察结果。

231预测实验结果预测实验结果阳性结果：

加在唾液空周围出现一圈很明显的溶菌环。

阳性结果：

加在唾液空周围出现一圈很明显的溶菌环。

注意事项注意事项在实验中应该注意无菌操作，否则杂菌生长会影响溶在实验中应该注意无菌操作，否则杂菌生长会影响溶菌环的观察菌环的观察小吞噬实验小吞噬实验实验原理实验原理机体内具有吞噬功能的细胞可分为两大类，即小吞噬细胞机体内具有吞噬功能的细胞可分为两大类，即小吞噬细胞和大吞噬细胞。

小吞噬细胞一般指血液中的和大吞噬细胞。

小吞噬细胞一般指血液中的中性粒细胞中性粒细胞。

中性粒细胞（中性粒细胞（neutrophilicgranulocyteneutrophilicgranulocyte）在瑞氏染色血）在瑞氏染色血涂片中，胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细涂片中，胞质呈无色或极浅的淡红色，有许多弥散分布的细小的（小的（0.20.20.40.4微米）浅红或浅紫色的特有颗粒。

细胞核呈微米）浅红或浅紫色的特有颗粒。

细胞核呈杆状或杆状或2255分叶状，叶与叶间有细丝相连。

其颗粒表面有一分叶状，叶与叶间有细丝相连。

其颗粒表面有一层膜包裹，颗粒中含髓过氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、层膜包裹，颗粒中含髓过氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶、溶菌酶、葡糖苷酸酶、碱性磷酸酶等。

中性粒细胞具趋化葡糖苷酸酶、碱性磷酸酶等。

中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。

作用、吞噬作用和杀菌作用。

实验材料与器材：

实验材料与器材：

11、表面葡萄球菌菌液（、表面葡萄球菌菌液（9亿亿/mL）。

）。

2、3.8%枸櫞酸钠或肝素（枸櫞酸钠或肝素（25U/mL）。

）。

3、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞氏、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞氏-姬姬娒萨染料、娒萨染料、PH6.4PB、酒精、棉球、采血针等。

、酒精、棉球、采血针等。

实验步骤实验步骤：

11、取厚凹玻片一张，在凹孔中滴加一滴（、取厚凹玻片一张，在凹孔中滴加一滴（0.4mL0.4mL）3.8%3.8%枸櫞酸枸櫞酸钠或肝素（钠或肝素（25U/mL25U/mL）。

）。

22、酒精棉球消毒手指后，用采血针从消毒部位采取、酒精棉球消毒手指后，用采血针从消毒部位采取22大滴（约大滴（约0.2mL0.2mL）加入凹孔中混匀。

）加入凹孔中混匀。

33、加表皮葡萄球菌菌液、加表皮葡萄球菌菌液11滴（滴（0.02-0.04mL0.02-0.04mL），然后用牙签轻），然后用牙签轻轻搅匀。

轻搅匀。

44、将玻片放湿盒内，置、将玻片放湿盒内，置3737孵箱中孵箱中40-50min40-50min。

55、作用完毕，取出、作用完毕，取出11滴制成薄片，自然干燥。

滴制成薄片，自然干燥。

66、置瑞氏液、置瑞氏液1min1min，置，置PH6.4PBPH6.4PB中中3min3min，置瑞氏，置瑞氏-姬娒萨染姬娒萨染料染料染5-10min5-10min，蒸馏水洗，待干镜检。

，蒸馏水洗，待干镜检。

预测实验结果预测实验结果胞浆呈淡蓝色或淡红色，细菌呈深蓝色或紫色，红胞浆呈淡蓝色或淡红色，细菌呈深蓝色或紫色，红细胞呈褐色，细胞核呈紫红色。

细胞呈褐色，细胞核呈紫红色。

注意事项注意事项11、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。

亦不同。

22、涂血片时不宜太厚，否则不宜观察。

、涂血片时不宜太厚，否则不宜观察。

结果结果胞质呈无色或胞质呈无色或极浅的淡红色，极浅的淡红色，有许多弥散分布有许多弥散分布的细小的（的细小的（0.20.20.40.4微米）浅红或微米）浅红或浅紫色的特有颗浅紫色的特有颗粒。

细胞核呈杆粒。

细胞核呈杆状或状或2255分叶状，分叶状，叶与叶间有细丝叶与叶间有细丝相连。

相连。

返回返回油镜下见中性油镜下见中性粒细胞粒细胞胞浆呈淡胞浆呈淡兰色，核分叶、兰色，核分叶、紫红深染，葡萄紫红深染，葡萄球菌呈兰色球菌呈兰色。

可。

可见中性粒细胞胞见中性粒细胞胞浆内吞噬有很多浆内吞噬有很多白葡菌。

白葡菌。

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